载脂蛋白B测定试剂盒

载脂蛋白A1和B检测试剂的研制王仁莉 杨一明 钟 平 (上海生物制品研究所,上海200052)摘 要 目的 研制载脂蛋白A1和B检测试剂。

方法 采用硫酸葡聚糖沉淀、超速离心、层析等方法。

结果 分离的载脂蛋白A1(ApoA1)和B(ApoB),经检定证实其为单一成分,用它们为抗原,免疫绵羊,获得ApoA1和ApoB抗血清,检定结果与德国Bochinger公司产品一致。

用这两种抗血清配制的浊度检测试剂与德国Diasys公司的同类试剂盒进行对照,相关良好。

结论 所研制的载脂蛋白A1和B检测试剂达到了国外同类产品的质量水平。

关键词 ApoA1 ApoB 比浊测定Preparation of Kit for Detecting Apoprotein A1and BWang Renli,Yang Yiming,Zhong Ping(Shanghai Institute o f Biological Products,Shanghai200052) Abstract Objective To prepare a kit for detec ting apoprotein(Apo)A1and B.Methods Dex tran sulfate precipitation,ultracentrifugation,chromatography,and so on.Results Either Apo A1and B separated by the above-mentioned methods was proved to be a single component.Anti-Apo Al and anti-Apo B sera were obtained by immunizing sheep with Apo Al and B respectively.The detection results of the2 kinds of sera were consistent with those of imported products(B ochinger,Germany),and the kit for turbidime try prepared with them showed good c orrelation with those manufactured by Diasys Co.(Germany).Conclu sion The kit reached the quality level of imported product of the same kind.Key words Apo Al Apo B Turbidimetry载脂蛋白A1(ApoA1)和载脂蛋白B(ApoB)分别是组成高密度脂蛋白HDL与低密度脂蛋白LDL的主要蛋白质,其主要功能是维持脂蛋白结构与脂类的运输,调控脂代谢。

载脂蛋白A1、B校准品
适用范围：与北京利德曼生化股份有限公司的载脂蛋白APOA1/B测定试剂盒配套使用，用于建立系统校准曲线。

1.1 规格：1×1mL(冻干品)。

1.2 组成：在血清基质中添加载脂蛋白A1，载脂蛋白B，牛血清（稳定剂）<0.1%。

定值范围：APOA1（1.8～
2.5）g/L，APOB（1.8～2.5）g/L。

2.1 外观：冻干品，溶解后为浅黄色至黄色液体,标签内容清晰。

2.2 溯源性：根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，该校准品溯源至APOA1：参考物质（BCR-393）、APOB：纯品（SunnyLab）。

2.3 准确度
APOA1：用校准品配合试剂检测参考物质（BCR-393），测值与参考物质靶值的相对偏差应在±10%范围内。

APOB：回收率应在85～115%之间。

2.4 重复性：CV<3%。

2.5 含水量：冻干物水分含量<3%。

2.6 稳定性
2.6.1 效期稳定性：按照标签所示存储条件保存，产品有效期为24个月。

在效期满后30天内其中一天检测，其外观、准确度和重复性符合2.1、2.3、2.4要求。

2.6.2 复溶稳定性：复溶后，在（2～8）℃避光密封保存，可稳定2天。

在第3天检测准确度符合2.1、2.3要求，在-20℃避光密封保存可稳定14天，在第15天检测，其外观、准确度和重复性符合2.1、2.3、2.4要求。

载脂蛋白A1/B校准品
适用范围：与本公司生产的试剂盒配套使用，用于载脂蛋白A1/B共2项检测系统的校准。

1.1包装规格
2×1mL。

1.2主要组成成分
本产品状态为冻干粉末，是以人血清为基质，含载脂蛋白A1、载脂蛋白B共2个项目。

主要组分见表1：
表1主要组成成分
校准品靶值批特异，详见说明书。

2.1外观和性状
2.1.1各组分应齐全、完整、无渗漏；外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.1.2开封前应为白色或淡黄色冻干粉。

2.1.3复溶后应为浅黄色溶液，无浑浊，无未溶解物。

2.2准确度
用产品校准品定标后，测试标准物质，测定值与标准物质标示值的相对偏差应不超过±15%。

2.3重复性
变异系数（CV）应不超过10%。

2.4批内瓶间差
变异系数（CV）应不超过10%。

2.5量值溯源
根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，本公司生产的载脂蛋白A1溯源至标准物质（GBW(E)090620），载脂蛋白B校准品溯源至标准物质（GBW09193）。

2.6稳定性
2.6.1复溶稳定性
复溶后的校准品在2℃～8℃条件下密闭保存，可以稳定2天，应符合2.2、2.3之规定。

复溶后的校准品在-20℃条件下密闭保存，可以稳定15天，应符合2.2、2.3之规定。

2.6.2效期稳定性
该产品在2℃～8℃条件下贮存有效期为24个月，取效期末的产品进行检测，应符合2.2、2.3之规定。

载脂蛋白B（ApoB）测定试剂盒（免疫比浊法）适用范围：该试剂盒用于体外定量测定人血清中载脂蛋白B的浓度。

1.1 产品规格1.2组成成分该试剂盒由试剂1（R1）、试剂2（R2）、校准品（选配）和质控品（选配）组成。

1.2.1试剂组成试剂1：Tris缓冲液≥50.0mmol/L试剂2：ApoB抗体液1.2.2校准品的组成牛血清载脂蛋白B抗原目标浓度：2.20g/L该校准品为牛血清基质冻干品1.2.3质控品的组成水平1：牛血清载脂蛋白B抗原目标浓度：0.90g/L水平2：牛血清载脂蛋白B抗原目标浓度：1.20g/L该质控品为牛血清基质冻干品2.1 外观a) R1应为无色溶液，无混浊，无未溶解物。

b) R2应为无色至淡黄色溶液。

c) 校准品应为白色至淡黄色固体。

d) 质控品应为白色至淡黄色固体。

2.2 净含量液体组分不少于标示值。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度应不大于0.500。

2.4 分析灵敏度ApoB试剂盒测定浓度1.00g/L 的被测物时，吸光度差值（ΔA）应不小于0.150。

2.5 准确度回收实验：回收率应在85%-115%。

2.6 精密度2.6.1重复性变异系数应不大于3%。

2.6.2批间差批间相对极差（R）应不大于10%。

2.6.3校准品、质控品批内瓶间差测试校准品、质控品，所得结果的批内瓶间差应不大于5%。

2.7 线性在[0.25, 2.50]g/L范围内，ApoB试剂盒的线性相关系数r应不低于0.9900；相对偏差应不超过±10%。

2.8 质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。

2.9 校准品溯源性要求依据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供载脂蛋白B校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。

校准品溯源至国际参考品 P3-07。

2.10 稳定性2.10.1校准品、质控品复溶稳定性校准品、质控品复溶后，在2℃～8℃密封保存24小时，校准品测试准确度，应符合2.5的要求，质控品测试赋值有效性，应符合2.8的要求。

S100-β蛋白测定试剂盒（荧光免疫层析法）组成：预期用途：用于体外定量测定人全血、血清、血浆中S100-β蛋白的含量。

2.1外观1)检测卡使用铝塑单个密封包装，标签应完整清晰，内容物齐全，卡壳应整洁、无破损，扣合紧密；2)缓冲液为无色或淡黄色透明液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物。

2.2装量样本缓冲液装量偏差应不大于±10%。

2.3宽度试纸条宽度为4.0±0.2mm。

2.4移行速度液体移行速度不低于10mm/min。

2.5空白限试剂盒的空白限不大于0.08ng/ml。

2.6线性在[0.08，10]ng/ml 范围内，线性相关系数应满足r≥0.990。

2.7重复性用高浓度[5，10]ng/ml、低浓度[0.18，1.0]ng/ml两水平样本重复测定10次，其测定值的变异系数（CV）应不大于15%。

2.8准确度用本试剂盒做回收试验，其回收率应在85%～115%范围内。

2.9特异性取不含S100-β蛋白的样本，分别加入以下物质平行检测3次，结果均应不大于0.08ng/ml。

表1特异性2.10溯源性根据GB/T 21415-2008及有关规定，提供校准曲线的赋值过程及不确定度等内容，溯源至企业工作校准品并与已上市产品比对赋值。

2.11批间差用3个不同批号的试剂盒分别测试样本，所得结果的相对极差（R）应不大于15%。

2.12稳定性原包装的试剂盒在2℃～30℃贮存，有效期为12个月。

在有效期满后六个月以内的试剂盒，分别检测2.1，2.2，2.3，2.4，2.5，2.6，2.7，2.8，2.9项，结果应符合各项目的要求。

载脂蛋白A1、B校准品适用范围：本校准品与本公司生产的载脂蛋白A1、B测定试剂盒（免疫比浊法）配套使用，用于载脂蛋白A1、B检测系统的校准。

1.1 产品型号/规格冻干粉型（复溶体积）：6×1mL；1×1mL。

1.2 主要组成成分本校准品以人血清为基质，并添加了特定项目的生物源性物质和化学成分，具体内容见下表。

表1 载脂蛋白A1、B校准品主要组成成分注：校准品具有批特异性，具体浓度见值单。

2.1 外观和性状2.1.1 外包装完整无破损；中文包装标签应清晰、准确、牢固。

2.1.2 本校准品应为白色至浅黄色冻干粉；复溶后应为浅黄色或黄色透明液体，无浑浊，无未溶解物。

2.2 水分含量水分含量应不大于5%。

2.3 量值溯源依据GB/T 21415有关规定建立溯源性，量值溯源见表1，赋值过程见附录。

2.4 赋值结果及其不确定度的表示方式赋值结果±扩展不确定度。

2.5 正确度︱≤1。

各项目量值传递的正确度应符合︳En2.6 均匀性2.6.1 瓶内均匀性各项目的瓶内均匀性变异系数（CV）应不大于10%。

瓶内2.6.2 瓶间均匀性）应不大于10%。

各项目的瓶间均匀性变异系数（CV瓶间2.7 稳定性2.7.1 复溶稳定性复溶后的校准品密封保存于2 ℃～8 ℃、避光环境中，可稳定3天；复溶后的校准品密封保存于不高于-18℃、避光环境中，可稳定10天。

在稳定期内赋值结果的变化趋势不显著。

2.7.2 效期稳定性校准品保存于2 ℃～8 ℃，有效期为24个月。

在有效期内赋值结果的变化趋势不显著。

猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒使用说明书96T/48T猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒使用说明书MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISA试剂盒产品货号：fk-S2173产品规格：96T/48T。

保存条件：2-8℃低温保存保质期：6个月，所有试剂盒均提供最新批次。

试剂盒成分：酶标板，试剂，标准品等。

猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒使用说明书样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。

使用不含热原和内毒素的试管。

收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于。

1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。

尽可能的不要使用溶血或高血脂血。

如果血清中大量颗粒，前先离心或过滤。

人白细胞抗原ELISA试剂盒技术原理不要在37℃或更高的温度加热解冻。

应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作步骤1．使用前，将所有试剂充分混匀。

不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。

每个标准品和空白孔建议做复孔。

每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。

立即加入50ul的生物素标记的抗体。

盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。

重复此操作3次。

如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

血清载脂蛋白B检测操作规程1. 检测原理APO A-1与特异的抗血清反应形成不溶性的复合物，可在340nm测定该不溶性复合物的浊度。

通过测定标准品，建立一个吸光度对APO A-1浓度的标准曲线就可以测定出样品中的APO A-1浓度。

2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或中哺乳后3个月检验才能反应其基本血脂水平。

注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药等。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3 抗凝剂：血浆使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。

2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。

3．试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司APOA1试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。

校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。

全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。

3.3 试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。

试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。

试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。

试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。

项血脂类标准液或APOA/B标准液在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，2-8℃储存可稳定一周，参见校准血清说明书。

载脂蛋白AI（ApoAI）测定试剂盒（免疫比浊法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中载脂蛋白AI（ApoAI）的浓度。

1.1包装规格1.2主要组成成分试剂1主要组分：TRIS缓冲液 25mmol/l试剂2主要组分：羊抗人ApoAI血清具体浓度依据效价确定校准品冻干粉主要组分：牛血清基质ApoAI 1.50-2.80g/L，批特异，具体浓度见瓶签质控品冻干粉主要组分：牛血清基质ApoAI 水平1：0.60-1.50g/L；水平2：1.00-2.50g/L，批特异，具体浓度见瓶签2.1外观2.1.1试剂1应为无色透明液体，无混浊，无未溶解物。

2.1.2试剂2应为无至淡黄色透明液体，无混浊，无未溶解物。

2.1.3校准品应为无色至淡黄色固体。

2.1.4质控品应为无色至淡黄色固体。

2.2装量液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白ApoAI试剂盒在波长（570~630）nm处测定空白样品的吸光度值，应不大于0.5000。

2.4分析灵敏度ApoAI试剂盒测试1.00g/L ApoAI时，吸光度差值（△A）应大于0.1000。

2.5准确度用本公司ApoAI试剂盒和已上市ApoAI试剂盒同时测定不少于40个临床样本，用线性回归方法计算两组结果的线性相关系数（r2）应不小于0.95；样本浓度在[0.35，0.50] g/L范围内时，绝对偏差应不大于±0.10g/L；样本浓度在(0.50，2.50] g/L范围内时，相对偏差应不大于±15%；95%检测样本应符合上述要求。

2.6精密度2.6.1重复性重复测试（1.00±0.50）g/L的样本，所得结果的变异系数CV应不大于3%；2.6.2批间差测试（1.00±0.50）g/L的样本，所得结果的批间相对极差应不大于10%。

2.7线性范围ApoAI试剂盒在（0.35,2.50）g/L范围内，线性相关系数（r）应不小于0.990；在（0.35,1.00］g/L区间内，线性绝对偏差应不超过±0.1g/L；在（1.00,2.50）g/L区间内，线性相对偏差应不超过±10%。

载脂蛋白B(APOB)测定试剂盒（免疫比浊法）说明书【产品名称】载脂蛋白B(APOB)测定试剂盒（免疫比浊法）【包装规格】a)试剂1：2×45mL试剂2：1×18mLb)试剂1：4×50mL试剂2：2×20mLc)试剂1：2×100mL试剂2：2×20mL【预期用途】用于体外定量测定人血清中载脂蛋白B(APOB)的含量。

APOB的测定值是低密度脂蛋白的主要形式，APOB升高被认为是心、脑血管疾病的危险因素。

APOB升高：常见于动脉粥样硬化、糖尿病、Ⅱ型高脂蛋白血症、肾病、胆汁淤滞、甲状腺功能低下、肥胖等。

APOB降低：常见于心肌局部缺血、肝脏疾病、甲状腺功能亢进。

测定载脂蛋白B常用于心、脑血管病、肝功能等病症的辅助诊断[1]。

【检验原理】APOB与特异的抗血清反应生成不溶性复合物，可在340nm测定该不溶性复合物的浊度。

通过与同样处理的标准液比较，计算出APOB的含量。

【主要组成成分】试剂1主要组分Tris缓冲液50mmol/L聚乙二醇4%氯化钠100mmol/L试剂2主要组分Tris缓冲液50mmol/L抗人APOB抗体4%表面活性剂2%注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。

【储存条件及有效期】1.试剂原包装在2～8℃储存，有效期为18个月，生产日期、有效期见标签。

2.开口后的试剂在仪器仓中（2～8℃）可稳定30天。

【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200；日立HITACHI7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT008AS型；贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/ AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821；佳能TBA-FX8/TBA-120FR/ TBA-2000FR；罗氏cobas8000c702/cobas8000c701/cobas8000c502；西门子SIEMENS ADVIA1800/ADVIA2400；雅培ABBOTT ARCHITECT c8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200；西森美康SYSMEX BM6010/C；科华KHB卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ZY-1280；迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/CS-600A/ CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/CS-1400；迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/BS-400/BS-430/BS-600/ BS-800/BS-2000M；颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480；赛诺迈德SUNMATIK-9050型；雷杜Chemray420；英诺华D280；特康TC6010L；锦瑞GS400；普康6066。