收稿日期:2006-09-15 修回日期:2006-10-15
基金项目:湖北省教学研究项目(No.20050087)
通讯联系人:朱丽华,女,教授,研究方向为分析化学及环境功能材料.第23卷第4期Vol.23 No.4分析科学学报
JOURNALOFANALYTICALSCIENCE2007年8月
Aug.2007
文章编号:1006-6144(2007)04-0401-04
双波长分光光度法测定有机弱酸弱碱的解离常数
余 陈,何正标,王 敏,何鸿雁,陈 芳,
夏春苗,唐和清,朱丽华＊
(华中科技大学化学系,武汉430074)
摘 要:本文提出了一种测定有机一元弱酸弱碱解离常数的新方法———双波长分光光
度法。该方法是在选定的一对工作波长下测定相同浓度不同pH值的有机一元弱酸弱
碱水溶液的吸光度,利用所推导的公式作图求得pK
a(或pK
b)。利用本方法测定了甲
基橙、溴甲酚绿、苯酚和苯胺等多种常见的有机一元弱酸弱碱的解离常数,结果十分满
意。与传统的单波长分光光度法相比,双波长法测定结果的精密度和准确度更高。
关键词:双波长;分光光度法;有机弱酸弱碱;解离常数
中图分类号:O657.32 文献标识码:A
解离常数pK
a是酸碱物质的一个重要的特征常数,其准确测定对了解该物质的性质有重要意义。有
机酸碱的pK
a的测定方法主要包括电位分析法[1]、电导法[2,3]和分光光度法[4]。电位分析法测量过程比
较简单,但当有机弱酸弱碱的水溶性较差时,不能测得准确的pK
a值。电导法操作简单,可适用于稀溶
液,但其计算和数据处理相当烦琐。分光光度法主要用于测定酸碱指示剂及显色剂类有机酸碱的pK
a
值[4],但对工作波长的选择有严格的要求。另外,当待测物质的酸式体和碱式体吸收峰的重叠程度较大
时,很难恰当地选择工作波长,pK
a的测定误差将明显增大。在光度法的定量分析中,可采用双波长法消
除背景和共存组分的干扰,以获得更高的准确度[4]。但用双波长法测定化合物的某种物理常数尚未见报
９０ 广东化工 ｗｗｗ．ｇｄｃｈｅｍ．ｃｏｍ ２００７年第ｌ２期 第３４卷总第１７６期
双波长分光光度法测定金柚皮中总黄酮的含量
朱远平，牟利辉
（嘉应学院生物系，广东梅州５１４０１５）
【摘要】以乙醇为提取剂，微波辅助提取法提取金柚皮中的总黄酮。应用双波长分光光度法，测定金柚皮中的总黄
酮含量，测定波长５１０ ｎｌｎ，参比波长５８８ ｎｍ，平均回收率９９．３２％，ＲＳＤ＝０．６４％（ｎ＝５）。结果表明，梅州产金柚的柚皮中 总黄酮平均含量达１．０％以上，该方法稳定可靠，重复性好。 【关键词】金柚；金柚皮；总黄酮；双波长分光光度法
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｇｏｌｄｅｎ－ｐｏｍｅｌｏ Ｐｅｅｌｓ
Ｂｙ Ｄｏｕｂｌｅ－ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ
Ｚｈｕ Ｙｕａｎｐｉｎｇ，Ｍｏｕ Ｌｉｈｕｉ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｊｉａｙｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍｅｉｚｈｏｕ ５ １ ４０ １ ５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｇｏｌｄｅｎ—ｐｏｍｅｌｏ ｐｅｅｌｓ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｍｉｃｒｏｗａｖｅ—ａｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ ａｓ ｓｏｌｖｅｎｔ．Ａ
ｄｏｕｂｌｅ—ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔＯ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｇｏｌｄｅｎ—ｐｏｍｅｌｏ ｐｅｅｌｓ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ
５ １ ０ ｎｍ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎｅ ｗａｓ ５８８ ｎｍ，ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９９．３２％，ＲＳＤ＝０．６４％（ｎ＝５）．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｇｏｌｄｅｎ—ｐｏｍｅｌｏ ｐｅｅｌｓ ｆｒｏｍ Ｍｅｉｚｈｏｕ ｗａｓ ａｂｏｖｅ １．０％．ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｔａｂｌｅ．ｒｅｌｉａｂｌｅ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ．
双波长分光光度法是一种常用的药品含量测定方法，其原理是利用物质在不同波长下吸光度的差异来测定样品的含量。然而在实际的药品生产和质量控制过程中，有时会出现药品含量偏低的情况，而双波长分光光度法测得的结果也会出现偏差。那么，造成药品含量偏低的原因是什么呢？
1. 药品成分不均匀
药品在生产过程中，可能会出现成分不均匀的情况。这可能是由于原料混合不均匀、加工过程中受热不均、或者贮存条件不当等因素导致的。当药品成分不均匀时，使用双波长分光光度法测定含量就会出现偏低的情况。
2. 良品率不足
在药品生产过程中，如果生产线上的设备不稳定或者操作不当，很可能会导致药品的良品率不足。这样一来，部分药品的含量就会偏低，从而影响到双波长分光光度法的测定结果。
3. 样品制备不当
样品的制备过程也是影响双波长分光光度法测定结果的关键因素之一。如果样品制备不当，比如溶解不彻底、稀释比例错误等，都有可能导致测定结果偏低。
4. 仪器故障 双波长分光光度法依赖于专用的分光光度计来进行测定，而仪器的精准度和稳定性直接影响着测定结果的准确性。如果仪器发生故障或者未经过定期校准，就有可能导致测定结果偏低。
5. 操作不当
操作人员的技术水平和操作规范也会对双波长分光光度法的测定结果产生影响。样品的操作过程中如果没有按照要求操作，或者操作人员缺乏相关经验和训练，都有可能导致测定结果出现偏差。
导致药品含量偏低的原因包括药品成分不均匀、良品率不足、样品制备不当、仪器故障以及操作不当等多个方面。在实际生产中，为了确保药品含量的准确性，需要从原料采购、生产工艺、仪器选择和操作规范等多个环节进行全面的管理和控制，以确保药品含量测定结果的准确性和可靠性。在实际的药品生产过程中，药品含量偏低可能会给企业带来不小的损失，因为药品的含量不足会直接影响其疗效和安全性，甚至可能引发法律纠纷和产品召回。对于药品含量偏低的原因以及如何预防和解决这一问题，企业必须高度重视，并加以有效管理。
６６０ 纯度鉴定 实验结果显示，采用ＭＡＣＳ双阳性法分选ＣＤ４ ＣＩ）２５‘Ｔ淋巴细胞的得率为３．５４％．平均分离纯度为７２．０％． 见表２。 ３讨 论 长期以来Ｔｒｅｇ细胞的免疫学归宿一直是免疫学界争论的 焦点．一方面由于其明确的表面标志未能确定，另一方面也由 于其形成抑制的分子基础未得到阐明。Ｔｒｅｇ细胞的发现归溯 于对自身免疫性疾病和肿瘤治疗的免疫学研究一ｊ。Ｔｒｅｇ细胞 的功能是通过其抑制自身反应性Ｔ细胞活化，从而抑制器官 特异性自身免疫性疾病的形成而得到认识的，所以早先一直把 它作为抑制性Ｔ细胞（Ｔ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌ，Ｔｓ）加以研究。现在 看来，这种观点有失偏颇：即Ｔｒｅｇ细胞可以通过分泌调节性细 胞因子（如ＩＩ 一１０、ＴＧＦ一８等）．或者通过抑制树突状细胞成熟 等方式参与免疫调节 ，Ｔｒｅｇ细胞是个体维待免疫自稳的重 要调节机制之一。研究证明，正常机体依靠胸腺的”阴性选择” 机制可以清除针对自身抗原的自身反应性Ｔ细胞．但是这种 清除通常是不完全的．未被胸腺阴性选择清除的自身反应性Ｔ 细胞的亚活化状态或休眠状态的维持主要归功于胸腺产生的 Ｔｒｅｇ细胞。国内外目前对Ｔｒｅｇ细胞的应用研究主要集中在 自身免疫性疾病和肿瘤的免疫学治疗等方面 。 但是，Ｔｒｅｇ细胞由于其对效应性Ｔ细胞强大和特异性抑 制功能，国内外越来越趋向于将其引入和应用于移植免疫、免 疫耐受的诱导 。另外由于Ｔｒｅｇ细胞的功能和发挥抑制作用 的免疫学机制也尚未得到完全阐明。所以，对Ｔｒｅｇ细胞的免 疫学特性有必要进一步深入研究，而体外成功分离和培养该细 胞．将是对其免疫学特性行进一步研究的必要条件。我们的实 验结果说明通过目前已成熟的免疫磁珠技术分离Ｔｒｅｇ是可行 的。当然，由于所分离细胞得率偏低，因此我们在下一步实验 研究中拟同时进行关于Ｔｒｅｇ细胞的体外扩增研究，为对进行 重庆医学２００２年８月第３１卷第８期 关于Ｔｒｅｇ细胞的免疫学特性的深入研究奠定基础。 参考文献： ［１］杨尚琪．诱导器官移植免疫耐受的新进展［Ｊ］．肾脏病与 透析肾移植杂志，２０００，９（４）：３８５． ［２］Ｇａｖｉｎ ＭＡ，Ｃｌａｒｋｅ ＳＲ，Ｎｅｇｒｏｕ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ａｎｅｒｇｙ ｏｆ（２Ｉ）４十ＣＩ）２５＋ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００２，３（１）：３３． ［３］李绍康，沈瑞珍．用国产龙尼毛分离小鼠Ｔ淋巴细胞鉴定 ［Ｊ］．上海免疫学杂志．１ ９８１，１０（１）：１０． ［４］郑峻松，吴军，黄文华，等．１ ８ １１１度烫伤对小鼠脾脏Ｔ 淋巴细胞经ＴＣＲａ／ｂｑ、ＣＩ）２８活化通路和 Ｉ、细胞功能的影 响［Ｊ］．第三军医大学学报。２００１，２３（１２）：１４３０． ［５］Ｓｈｅｖａｃｈ ＥＭ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］． Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏ１．２０００，１８：４２３． １ ６ ｊ Ｍａｓａｋｉ Ｈ，Ｃｈｅｒｒｙ ＩＫ，Ｍａｓａｎｏｒｉ Ｎ，ｅｔ ａ１．ＩＩ 一１０ ｉｓ ｒｅ— ｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔＯ ｍｅｄｉａｔｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔＯ ａｌ— ｌｏａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｖｉｖｏ￣Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２ＯＯ１，１ ６６：３７８９． Ｌ７ Ｙａｍａｇｉｗａ Ｓ，Ｇｒａｙ Ｊ，Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ Ｓ．ｅｔ ａ１．Ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ＦＧＦ一口ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４＋ＣＩ）２ ５＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａ１ｂ１ｏｏｄ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍ— ｍｕｎｏｌ，２００１，１ ６６：７２８２． ［８ Ｍａｌｏｙ Ｋ，Ｐｏｗｒｉｅ Ｆ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００１．２（９）： ８１ ６． ［９］Ｄｉａｎａ Ｚ，Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ Ａ，Ｓｕｓａｎ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＣＩ）４＋ Ｔ—ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔｓ ｉｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｒａｎｓｐ１ａｎｔａｔｉｏｎ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ ｏｒ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２００１，１８２：１ ６４． ・基层园地・ 双波长分光光度法测定益康唑软膏的含量 邹 泽，罗 冰 （重庆市黔江中心医院４０９０００） 中图分类号：Ｒ９２７．２ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１ ６７１—８３４８（２００２）０８—０６６０—０２ 益康唑为抗真菌药物，广泛用于各种真菌疾患的治疗．其 制剂一般为注射剂、软膏和栓剂。关于益康唑的测定，文献报 道较少，常见的有非水碱量法和ＧＣ法，前者常用于原料药分 析．后者多用于制剂分析，但ＧＣ法处理样品费时，尤其药物碱 性强．极性大．峰形有拖尾。近来又有文献报道采用ＨＰＩ Ｃ 法，虽方法准确、专属，但也同样存在着由于药物极性较大，易 强吸附造成峰形拖尾。为了寻找测定益康唑的简单、快速方 法．我们采用双波长分光光度法，只需将大部分的基质滤除，就 可直接用于测定益康唑软膏中益康唑的含量。 １实验方法 １．１标准溶液的配制 １．１．１益康唑标准溶液 精密称取益康唑适量，加乙醇配制 成１０ｍｇ／ｍｌ溶液。 １．１．２基质溶液称取基质约１０ｇ于烧杯中，在水浴中加热， 融化，加乙醇５０ｍｌ，加热并不断搅拌至微沸，移人１００ｍｌ量瓶 中，用热乙醇洗涤烧杯２次．洗液并人量瓶中，冷却至室温．加 乙醇至刻度，摇匀，置冰水中冷冻１～２ｈ，取出迅速过滤．弃去 初滤液，取回升至室温的续滤液适量，加乙醇稀释１ｏｏ倍。 １．２ 等吸收点的选择 通过对益康唑标准溶液及基质溶液的 紫外吸收光谱分析，在２２５ｎｍ处益康唑有较大的吸收值而基 质的吸收值较小，Ａ ／Ａ 最大，故以２２５ｎｍ为测定波长．在 ２３９．６ｎｍ具有等吸收点。 １．３标准曲线的绘制 精密称取益康唑约０．１ｇ，置１００ｍｌ量 瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精确吸取此液０．６、 ０．８、１．０、１．２、１．４ｍ１，分别置１００ｍｌ量瓶中．加乙醇稀释至刻 度，摇匀，以乙醇为空白，分别在２２５ｎｍ和２３９．６ｎｍ波长处测 定吸收度，求出△Ａ。在浓度（Ｆｇ／ｍ１）为６．００、８．００、１０．００、 １２．（）（］、１４．（）（］时的△Ａ值分别为０．２３２、０．４３４、０．５４４、０．６５６、 ０．７６４，得回归方程Ｃ一１８．１］５△Ａ＋０．１４２，ｒ一０．９９９ ９。表明 在６～１４￣ｇ／ｍｌ范围内符合比耳定律。（下转第６６７页）
