生物化学--实验七邻甲苯胺法测定血糖

邻甲苯胺法测定血清（浆）葡萄糖[原理] 在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺缩合、脱水，生成希夫氏碱（Schiff base ），经分子重排生成蓝绿色化合物，其颜色深浅在一定范围内与血糖浓度成正比。

[试剂]1．邻甲苯胺试剂 称取硫脲(AR)2.5g ，溶于冰醋酸(AR)750ml 中。

将此液转入1 L 容量瓶内，加邻甲苯胺150ml ，2.4%硼酸溶液100ml ，用冰醋酸定容至刻度。

此溶液应置棕色瓶内室温保存，至少可应用2个月。

新配制试剂应放置24h 后待“老化”使用，否则反应产物的吸光度低。

2．100mmol/L 葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g ，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml 中，以12mmol/L 苯甲酸溶液定容至100ml 。

2h 以后方可使用。

3．5.0mmol/L 葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml 放于100ml 容量瓶中，用12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。

4．0.3mol/L 三氯醋酸溶液 称取三氯醋酸5g ，溶于蒸馏水70ml 中，然后用蒸馏水定容至100ml ，混匀即可。

[主要器材]1．试管及试管架 2．刻度吸量管 3．721型分光光度计 [操作步骤]1． 血清、血浆、脑脊液及清亮的胸腹水按表8操作。

CHOH —CHOH CHOH —CHO HO —CH 2葡萄糖 羟甲基糠醛 HC CHOC C CHOOH —CH 2 2 羟甲基糠醛 邻甲苯胺 醛亚胺（蓝绿色）HC CHOC C CHO OH —CH 2HC CHOC C CH= OH —CH 2 N+ H 2N表8加入物(ml)空白管 标准管 测定管 蒸馏水0.1 － － 葡萄糖标准应用液（5.0 mmol/L ） － 0.1 － 血清(血浆、脑脊液) － － 0.1 邻甲苯胺试剂3.03.03.0混匀，置沸水中煮沸12min ，取出置冷水中冷却3min ，在630nm 处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。

葡萄糖氧化酶法与邻甲苯胺法作血糖测定方法对比试验.txt台湾一日不收复，我一日不过4级！如果太阳不出来了，我就不去上班了；如果出来了，我就继续睡觉！葡萄糖氧化酶法与邻甲苯胺法作血糖测定方法对比试验更新日期：2010-10-15 点击：农嵩摘要以生物化学方法—葡萄糖氧化酶法(GOD法)为对比方法，有机化学方法—邻甲苯胺法(O-T法)为候选方法作血糖浓度测定对比试验，考察分析两法的相关性及其优缺点，为将来改进教学实验及临床应用提供参考。

实验结果表明，回归方程表达出系统误差不明显，相关系数r=0.985，两法相关性比较密切。

关键词血糖；GOD法；O-T法；相关分析Contrast test on determination of blood sugar withmethods of glucose-oxidase (GOD) and o-toluidine(O-T)Nong SongDept. of Biochemistry, Youjiang Medical college for National Minorities (Bose 533000)Abstract Contrast test was made with GOD(contrast method) and O-T(candidate solution method) for determining blood sugar contents. The correlation and advantages and disadvantages of the two methods were observed and analyzed for the reference of improving teaching experiments and clinical application. Results showed that the systematic error expressed by regression equation was not obvious, correlation coefficient r=0.985. Correlation of the two methods was comparatively closed. Key words blood sugar; GOD method; O-T method; correlation analysis血糖测定法大体分为四种：无机化学方法、有机化学方法、生物化学方法及近代科学技术，各存在不同的优缺点。

题目激素对血糖浓度的影响及血糖浓度的测定系部医学院专业临床班级临床1004学号200909155140姓名刘兴志指导教师赵雪花完成日期2011 年9 月16日【摘要】目的:（1）掌握血糖测定的原理和方法。

（2）掌握血糖正常的范围和意义。

（3）熟记胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响，并解释其作用机制。

方法：取正常家兔两只，饥饿14-16小时，各空腹取血10ml，在相同的实验条件下，其中一只注射胰岛素（5单位/公斤），另一只注射肾上腺素（0.5mg/只），半个小时后再次取血。

测量血糖浓度。

结果：注射胰岛素的家兔，血糖浓度降低，注射肾上腺素的家兔，血糖浓度升高。

结论：胰岛素可以降低血糖，肾上腺素可以升高血糖。

【关键词】胰岛素，肾上腺素，血糖浓度。

材料与方法1.实验材料与试剂正常家兔两只。

肾上腺素（1mg/ml）,胰岛素（5单位/ml）,碘酒，消毒酒精，棉球，饱和硼酸溶液（6g溶于100ml蒸馏水中摇匀后放置过夜后过滤即可），邻甲苯胺-硼酸，5%三氯醋酸溶液，饱和苯甲酸溶液，标准葡萄糖贮存液，标准葡萄糖应用液。

2.实验对象正常家兔3.实验方法步骤3.1取正常家兔两只。

实验前预先饥饿14-16h，称其体重并记录（2-3公斤为宜）。

3.2药前取血。

先用剪刀剪去家兔耳缘的兔毛，然后用酒精擦拭，使其耳缘静脉充血，再用干棉球擦干。

碘酒，酒精消毒后用7号针头穿刺耳缘静脉，然后用盛有抗凝剂（草酸钠，2mg/ml血）的小烧杯收集10ml左右的血液。

收集时注意摇匀以防血液凝固。

取血完毕，用干棉球压迫止血。

3.3 注射胰岛素和肾上腺素。

取血完毕后，给其中一只家兔注射胰岛素（5单位/公斤为宜），另一只注射肾上腺素（0.5mg/只为宜）。

注射完毕后，稳定家兔情绪，放回兔笼。

3.4药后取血。

药后半小时，再次从耳缘静脉取血。

方法同3.2。

3.5制备无蛋白学滤液。

用微量加样器取抗凝血0.4ml，滤纸擦净粘附于吸管尖端外表的血液，缓慢注入洁净小试管。

实验十血糖的测定实验十血糖的测定实验十血糖的测定实验十血糖的测量血液中的葡萄糖称血糖。

正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol／l～6．1mmol／l 之间。

血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。

其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。

因此，血糖的测量就是临床生化检验实验室的常规检测项目。

血糖测量按其发展过程及反应原理的相同，大致分后三类：水解还原法，变小合法（主要存有西南边甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。

下边了解两种方法供选择。

一、葡萄糖氧化酶法1.介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能够展开血糖测量的操作方式。

2.掌控血糖测量的临床意义。

【原理】葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，god)能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。

后者在过氧化物酶(peroxidase，pod)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即trinder反应。

其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。

反应式如下：葡萄糖+o2+2h2o2h2o22h2o2+4-氨基安替比林+酚红色醌类化合物试管、液体、试管架、恒温水浴箱、分光光度计【试剂】1.0.1mol/l磷酸盐缓冲液（ph7.0）称取浓硫酸磷酸氢二钠8.67g及浓硫酸磷酸二氢钾5.3g溶800ml蒸馏水中，用1mol/l氢氧化钠（或1mol/l盐酸）调节ph至7.0，然后用蒸馏水吸收至1l。

2.酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/lnaoh调ph至7.0，加磷酸缓冲液至100ml。

复置冰箱留存，4℃可以平衡3个月。

邻甲苯胺法测定血糖实验报告
一、实验目的
实验旨在使用邻甲苯胺法测定血糖水平。

二、实验原理
邻甲苯胺法是一种常用的血糖测定方法，它是一种光敏催化方法，可以用来测定和分析人血液中的血糖含量。

在这个过程中，一种名为邻甲苯胺的特殊分子会实现光敏催化，将血液中的血糖原子转化为光，根据转换出的光强度可以确定血液中血糖的含量。

三、实验材料
（1）血液标本；
（2）50mL蒸馏水；
（3）邻甲苯胺；
（4）吸光度测量仪；
（5）20mL分离管。

四、实验步骤
（1）将20mL分离管中放入50mL蒸馏水，加热至100℃；
（2）在分离管内加入4mg邻甲苯胺，搅拌均匀；
（3）将血液标本以1:1的比例加入分离管中，然后搅拌均匀；
（4）将分离管中的混合液放入吸光度测量仪，在660nm波长下进行测定；
（5）根据测量出的光强度可以计算出血液中的血糖浓度。

五、实验结果
根据测量出的光强度，可以计算得出血液中的血糖浓度为6.0 mmol/L。

六、实验结论
本次实验使用邻甲苯胺法测定血液中的血糖浓度，结果显示血液中的血糖浓度为6.0 mmol/L，结果合理有效。

胰岛素对血糖浓度的影响实验报告实验五胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响实验六胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响实验五葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖课程名称：生物化学与分子生物学实验课年级：2004专业、层次：临床医学本科授课教师：汪宗桂职称：助教学时：3学时基本教材：自编《生物化学与分子生物学实验指导》教学目的与要求：1、观察胰岛素和肾上腺素对家兔血糖浓度的影响。

2、掌握血糖浓度的测定方法。

3、掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理和方法。

4、掌握血糖浓度的正常参考值，了解血糖测定的临床意义。

大体内容与时间安排：1、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的原理5min2、胰岛素和肾上腺素对血糖浓度影响的注意事项5min3、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理5min4、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的操作改动及注意事项5min5、学生做实验100min教学方法：讲授式+启发式教学重点、难点：重点：1、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理2、葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项难点：葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的注意事项一、实验原理（一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响激素是调节机体血糖浓度的重要因素。

胰岛素能降低血糖，肾上腺素等激素能升高血糖。

本实验给两只家兔分别注射胰岛素或肾上腺素，取注射前、后兔的静脉血，测定血糖含量，观察注射前后血糖浓度变化，从而了解胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响。

（二）葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖本实验是葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化物酶(POD) 相偶联发生的偶联反应。

第一步：葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。

第二步：过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物(苯醌亚胺非那腙)。

二、操作步骤（一）胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响1、动物准备：取正常家兔两只，实验前预先饥饿16小时，称体重(—般为2-3kg)。

生化实验试题参考生物化学实验二、填空题：1. 测定蛋白质含量的方法有(双缩脲法)， (紫外吸收法)，( Folin-酚试剂法（或Lowry法） )和（考马斯亮蓝G-250染色法）。

2. CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以（以一定时间内分解的H2O2量）来表示，当CAT与H2O2反应结束，再用（碘量法）测定未分解的H2O2。

3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以（聚丙烯酰胺凝胶）作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由（Acr）和交联剂（Bis）在催化剂作用下聚合而成。

化学聚合法一般用来制备（分离）胶，其自由基的引发剂是（Ap），催化剂是（TEMED）；光聚合法适于制备大孔径的（浓缩）胶，催化剂是（核黄素）。

4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：（吸附层析），（分配层析），（离子交换层析），（凝胶层析）和（亲和层析）。

5. 使用离心机离心样品前，必须使离心管（等重）且对称放入离心机。

6. 米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S 的亲合力愈（大），Km愈大，表示E对S的亲合力愈（小）。

7. 分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须__（打开）____（打开、合上）样品池翻盖。

8. CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的（抗逆性）密切相关。

9. 纸层析实验中，____________形成固定相，____________流动相。

10. 聚丙烯酰胺凝胶是是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成的，在具有自由基团体系时，两者就聚合。

引发产生自由基的方法有两种：（化学法）和（光聚合法）。

11. 层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：（柱层析），（纸层析），（薄层层析）和（薄膜层析）。

参考答案：生物化学实验一、名词解释：1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。

2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。

1. 了解血糖调节的生化过程。

2. 掌握血糖测定的原理和方法。

3. 熟悉胰岛素和胰高血糖素对血糖浓度的影响。

4. 通过实验验证血糖调节机制。

二、实验原理血糖调节是人体维持正常生理功能的重要环节。

胰岛素和胰高血糖素是调节血糖的主要激素。

胰岛素能降低血糖浓度，而胰高血糖素则升高血糖浓度。

血糖浓度的变化可通过血糖测定实验进行检测。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：正常家兔两只、胰岛素（5单位/公斤）、肾上腺素（0.5mg/只）、碘酒、消毒酒精、棉球、血糖测定仪等。

2. 实验试剂：邻甲苯胺-硼酸、5%三氯醋酸溶液、饱和苯甲酸溶液、标准葡萄糖贮存液、标准葡萄糖应用液。

四、实验步骤1. 预先饥饿正常家兔14-16小时，记录体重并称重。

2. 对一只家兔进行胰岛素注射（5单位/公斤），另一只家兔进行肾上腺素注射（0.5mg/只）。

3. 注射后30分钟，分别从两只家兔体内抽取血液。

4. 使用血糖测定仪检测两只家兔的血糖浓度。

5. 对比注射胰岛素和肾上腺素前后血糖浓度的变化。

五、实验结果1. 注射胰岛素的家兔血糖浓度明显降低，注射肾上腺素的家兔血糖浓度明显升高。

2. 注射胰岛素的家兔血糖浓度降低至正常范围内，注射肾上腺素的家兔血糖浓度升高至正常范围以上。

1. 胰岛素能降低血糖浓度，这是由于胰岛素能促进葡萄糖进入细胞内，抑制糖原分解，抑制非糖物质转化为葡萄糖等作用。

2. 胰高血糖素能升高血糖浓度，这是由于胰高血糖素能促进糖原分解，促进非糖物质转化为葡萄糖等作用。

3. 实验结果验证了血糖调节机制，即胰岛素和胰高血糖素在血糖调节中的重要作用。

七、实验讨论1. 本实验通过注射胰岛素和肾上腺素，模拟了人体血糖调节过程，验证了胰岛素和胰高血糖素在血糖调节中的重要作用。

2. 实验结果表明，胰岛素能降低血糖浓度，而胰高血糖素能升高血糖浓度。

3. 本实验结果与血糖调节的生化过程相符，为理解血糖调节机制提供了实验依据。

八、实验小结1. 本实验成功验证了血糖调节机制，即胰岛素和胰高血糖素在血糖调节中的重要作用。