酵母菌的染色原理

实验二酵母菌的死活染色及放线菌的形态观察赵奕玲 121180169一．实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖。

2掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。

3.掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。

二．实验原理1.酵母菌形态及出芽方式观察的基本原理：酵母菌的死活染色通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

2.酵母菌子囊孢子观察的基本原理：子囊类酵母菌是以接合产生形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖的。

它们一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过质、核配和减数分裂形成4或8个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这些一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。

能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。

酵母菌形成子囊孢子需一定条件，其中麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。

因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。

在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。

3.放线菌形态观察的基本原理：放线菌在固体培养基上呈辐射状生长而得名。

放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。

菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。

酵母菌的形态观察, 死活细胞鉴别,微生物测量技术,显微镜直接计数法一、实验目的1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

2．了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法.3. 了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。

二、实验原理染色：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。

因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。

测量：微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。

用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。

测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

计数：每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。

在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。

下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数因1ml=1cm3=1000mm3，三、实验仪器1 菌种: 培养48h的酵母菌．２染色液和试剂：0.05%、0.1%吕氏碱性美蓝．3 器材：显微镜、血球计数板、目镜测微尺、镜台测微尺、盖玻片、吸水纸、计数器、移液器、擦镜纸。

实验二酵母菌的死活染色及放线菌的形态观察赵奕玲 121180169一．实验目的1.观察酵母菌的形态及出芽生殖。

2掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。

3.掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。

二．实验原理1.酵母菌形态及出芽方式观察的基本原理：酵母菌的死活染色通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

2.酵母菌子囊孢子观察的基本原理：子囊类酵母菌是以接合产生形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖的。

它们一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过质、核配和减数分裂形成4或8个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这些一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。

能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。

酵母菌形成子囊孢子需一定条件，其中麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。

因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。

在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。

3.放线菌形态观察的基本原理：放线菌在固体培养基上呈辐射状生长而得名。

放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。

菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。

实验六、酵母菌染色和细菌的革兰氏染色一、实验目的1、学习并掌握革兰氏染色法。

2、了解革兰氏染色原理二、实验原理革兰氏染色法可讲细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。

前者细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘—结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘—结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。

而后者细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘—结晶紫复合物容易洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂（番红）染色后又变为复染剂染色。

三、实验材料1、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌2、溶液和试剂：草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液等。

3、仪器和其他用品：酒精灯、载玻片、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、试管架、镊子、滤纸、滴管和无菌生理盐水等。

四、实验方法与步骤(1)革兰氏染色步骤：1、制片取菌种按常规方法涂片（不宜过厚）、干燥、固定。

2、初染滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1min后倾去染液，水洗至流出无色。

3、媒染先用卢戈氏碘液冲去残留水迹象，再用碘液覆盖1min，倾去碘液4、95%酒精脱色在白色背景下用滴管流加95%乙醇脱色（一般25-30s），当流出液无色时立即用水洗去乙醇。

4、复染将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色1min，水洗，吸去残水晾干。

5、镜检将制好的片在显微镜下观察。

6、混合涂片染色在载玻片同一区域用大肠杆菌和枯草芽孢杆菌混合涂片，其他步骤同上，显微镜下观察。

（2）酵母菌的普通染色1、制片取菌种按常规方法涂片（不宜过厚）、干燥、固定。

2、染色滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1min后倾去染液，水洗至流出无色。

3、显微镜下观察五、思考题1、革兰氏染色法操作下的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在显微镜下的颜色是怎么样的，他们分别属于什么菌（G+ 、G﹣）。

试验酵母形态的观察及细胞总数、出芽率和死亡率一、目的要求1、明确血球计数板计数的原理2、掌握测定酵母细胞总数、出芽率和死亡率的技术二、实验原理镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。

菌体较大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫〃霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。

两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。

血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方格网。

每个方格网共分9大格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。

计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。

但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即每个大方格都由400个小方格组成。

每个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，每个小方格的面积为1／400mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.1mm，所以每个计数室(大方格)的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为l／4000mm3。

使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格(或中方格)中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。

血球计数扳的构造血球计数板计数网的分区和分格三、实验器材啤酒酵母菌悬液，显微镜，血球计数板，载玻片，电吹风，盖玻片，接种环，0.1%吕氏美蓝染色液。

四、方法步骤1、菌悬液的制备为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含5-10个酵母宜，可采用10倍系列稀释法。

2、镜检计数室在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。

如有污物，则需清洗，用点吹风吹干后才能进行计数。

3、加样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余菌液。

酵母菌形态观察及死活鉴别
一、实验目的
1.认识并观察酵母菌的形态特征，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理
1、酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

2、本实验是通过美蓝染液浸片和碘液浸片来观察酵母的形态
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞
三、实验器材
酵母悬液、美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液、显微镜、载玻片、盖玻片
四、实训步骤
1、水-碘浸片观察
在载玻片中央滴一滴碘液，取一滴酵母悬液放在碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

2、美蓝浸片观察
（1）在载玻片中央加一滴美蓝染色液，滴加一滴酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）将制片放置约3min 后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

五、实验报告
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征
六、注意事项
1、染色液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量的气泡，影响观察。

2、盖片时斜着放不易产生气泡。

1。

实验二微生物染色一、实验目的1、进一步熟悉和掌握显微镜的操作方法；2、学习用压滴法制作标本片；3、学习微生物染色的原理；4、学习微生物涂片、染色的基本技术。

二、实验仪器和材料显微镜、香柏油（或液体石蜡）、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载玻片、酒精灯；美蓝染液，草酸铵结晶紫染液、革氏碘液、95%乙醇、蕃红染液；酵母菌、大肠杆菌、枯草杆菌。

三、染色原理微生物（尤其是细菌）的机体小且是无色透明的，在活体细菌内又含有大量的水分。

因此，对光线的吸收和反射与水溶液相差不大。

当把细菌悬浮在水滴内，放在显微镜下观察时，由于与周围背景没有明显的明暗差，难以看清它们的形状，更谈不上识别其细微结构。

通常用染料将菌体染上颜色以增加反差，在显微镜下观察。

微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其它化合物组成的，所以微生物细胞表现出两性电解质的性质。

两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性，带正电；在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性，带负电。

经测定，细菌的等电点pI在pH=2~5之间，故细菌在中性（pH=7）、碱性（pH > 7）或偏酸性（pH=6~7）溶液中，细菌等电点均低于上述溶液的pH值，所以细菌带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱性染料染色的居多。

碱性染料并不是碱而是一种盐，电解时染料离子带正电，易与带负电荷的细菌结合，而使细菌着色。

碱性染料有美蓝、甲基紫、结晶紫、龙胆紫、碱性品红、中性红、孔雀绿和蕃红（沙黄）等。

微生物体内各结构与染料结合力不同，故可用各种染料分别染微生物的各结构以便观察。

四、染色方法1、简单染色法简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。

此法操作简便，适用于菌体一般形态的观察。

常用的简单染色染料有美蓝、结晶紫、碱性复红、番红（沙黄）等。

2、革兰氏染色法革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。

它是1884年由丹麦医师Gram创立的。

革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：革兰氏阴性细菌（G－）和革兰氏阳性细菌（G+）。

酵母菌的染色原理(一)酵母菌的染色酵母菌是微生物界中十分重要的存在。

在科学研究和工业生产中，酵母菌都扮演着重要的角色。

为了更好地观察和研究酵母菌，需要进行染色处理。

下面就让我们从浅入深地解释酵母菌染色的相关原理。

酵母菌染色的基本原理酵母菌染色是利用染色剂与细胞内的化合物发生特异性反应，使细胞呈现不同的颜色和形态，以方便观察。

常见的酵母菌染色方法有两种：涂片法和液体染色法。

涂片法涂片法是将酵母菌培养液滴于草片上，待其干燥后再滴上染色剂，用载片盖盖好，使染色剂与酵母菌充分接触，待染色剂渗透入细胞内后，用显微镜观察。

液体染色法液体染色法是将酵母菌培养液离心沉淀后，去掉上层液体，用染色液重悬沉淀，使染色剂与酵母菌充分接触，待染色剂渗透入细胞内后，用显微镜观察。

酵母菌染色的具体步骤酵母菌染色方法的具体步骤如下：1.准备好细胞样品，在草片或载片上涂上一层酵母菌悬液。

2.将草片或载片置于烤箱中，让其自然干燥。

3.滴上适当的染色剂，如甲苯胺绿、格氏染色液等。

4.取出载片盖盖好草片或载片。

5.注视显微镜下进行观察。

酵母菌染色的重要性酵母菌染色在科学研究和工业生产中十分必要。

通过染色可以观察到酵母菌的形态、大小、数量和活力等重要信息，对于酵母菌的分类、研究和利用有重要意义。

总之，酵母菌染色是对酵母菌进行观察和研究的必要手段。

只有了解了染色的基本原理和具体步骤，才能更好地进行实验研究，促进酵母菌在科学研究和工业生产中的发展。

酵母菌染色常用的染色剂的类型和作用甲苯胺绿甲苯胺绿是一种碱性染料，它的分子中含有两个氨基和两个苯基。

它通常用来染细胞壁和细胞质，能够联结细胞壁和细胞质的胶体颗粒，形成颗粒团，并能使不同颜色的细胞结构分明。

格氏染色液格氏染色液是一种碱性染料，是由基础染色剂、碘、碱性用品和水组成的溶液。

它主要用于染色后固定细胞壁，并使核糖体的存在显现出来。

格氏染色液用于观察细菌、酵母菌、病原菌和衣原体等微生物。

甲醛甲醛常用作固定剂，可以使细胞壁的纤维素、木质纤维和细胞膜的脂质变硬，保存细胞形态。