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实验结果:
丙氨酸 苯丙氨酸 天冬氨酸
L/㎝ d/㎝ Rf
原点到溶剂前沿距离为L,原点到层析点中心距离为d
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氨基酸的定量分析 —甲醛滴定法
一、目的:
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
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二、实验原理
水溶液中的氨基酸为兼性离子,因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基 。甲醛可与氨 基酸上的 —N+H3结合,形成 —NH—CH2OH、—N(CH2— OH)2 等羟甲基衍生物,使N+H3上的H+游离出来,这样就可以用碱滴定 N+H3放出H+,测出氨基氮,从而计算氨基酸的含量。
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五、计算
标准甘氨酸氨基氮的回收率=
VNaoH*0.0200mol/L 理论计算值
*14.008
理论计算值:取用氨基酸的体积乘以浓度,再乘以14.008 VNaoH 两次测定所用氨基酸的体积的平均值
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每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为
式中:V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积(ml); V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积(ml); MNaOH 标准NaOH溶液的摩尔浓度
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思考题
1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么? 2、根据滴定结果,总结分析此法在实际应用中的
优缺点。 3、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—N+H3基上
的H+,不能用一般的酸碱指示剂?
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若样品中只含有单一的已知氨基酸,则可由此法滴定的结果算出氨基 酸的含量。若样品中含有多种氨基酸(如蛋白质水解液),测不能由 此法算出氨基酸的含量。 脯氨酸与甲醛作用后,生成的化合物不稳定,导致滴定后结果偏低; 酪氨酸含酚基结构,导致滴定结果偏高。