纸层析法分离氨基酸实验报告
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竭诚为您提供优质文档/双击可除氨基酸纸上层析实验报告篇一:实验六氨基酸的纸层析法氨基酸的纸层析法一.目的了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。
二、原理以滤纸为支持物的层析法,称为纸层析法。
纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。
展层时,水为静止相,他与滤纸纤维亲和力强;有机溶剂为流动相,它与滤纸纤维亲和力弱。
有机溶剂在滤纸上又下向上移动的,称为上行法;有上向下移动的,称为下行法。
将样品在滤纸上确定的原点处展层,由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配,且他们的分离系数各不相同,所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同,于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来,形成距原点不等的层析点。
在一定条件下(室温、展层剂的组成、滤纸的质量、ph 值等不变),不同的氨基酸有固定的移动速率(Rf值)Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。
用混合氨基酸做样品时,如果只用一种溶剂展层,由于某些氨基酸的移动速率相同或相近,就不能将它们分开,为此,当用一种溶剂展层后,可将滤纸旋转90度,以第一次所的层析点为原点,在用另一溶剂展层,从而达到分离的目的。
这种方法称为双向层析法。
本试验主要介绍的是单向层析法。
其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。
三、实验仪器1、新华滤纸2、层析缸3、细线4、点样管5、橡皮筋6、电吹风7、喷雾器四、实验试剂1、混合氨基酸(精氨酸,酪氨酸,苯丙氨酸)2、展层剂:正丁醇:12%氨水:95%乙醇:蒸馏水=13:3:3:1(v:v)3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液:0.5g茚三酮溶于100ml 无水丙酮,贮于棕色瓶中五、实验步骤1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张,在一端打孔,系一根细线,在另一端2~3cm处用铅笔画一横线,中间画一圆点(原点)。
2、取毛细管一支(回收),吸取氨基酸混合液,在原点处点样,样点直径不宜超过5mm,每点一次用吹风机吹干,点2~3次为佳。
3、点样后将滤纸放入层析缸中展层,注意点样线要高于层析液面,滤纸不要贴在层析缸璧上,当展层至另一端1~2cm处时,停止展层(大约2~3小时)。
(2023)纸层析法分离氨基酸实验报告(一)实验报告:纸层析法分离氨基酸实验目的通过纸层析法分离并鉴定氨基酸的类型及其浓度。
实验原理纸层析法是一种简单的分离技术,它的分离原理就是根据溶液成分在固定相上的不同运移速度而分离出各种化合物的方法。
氨基酸属于碱性氨基酸、酸性氨基酸和非极性氨基酸三类,它们在纸层析上的运移速度不同,可以通过将样品施加到起始线处,用溶剂上升将样品分离成单独的氨基酸,从而鉴定氨基酸的类型和浓度。
实验步骤1.准备好样品;2.准备纸层析板和移层溶剂;3.在纸层析板上留下起始线处,将样品点于起始线上;4.将纸层析板浸泡在移层溶剂中,注意不要使样品触及移层溶剂;5.待溶剂上升至足够高处后将纸层析板取出晾干;6.可选择用氨基酸定性试剂对氨基酸进行鉴定。
实验结果经过实验,分离出了6种氨基酸,它们是: 1. 苯丙氨酸 2. 丝氨酸3. 脯氨酸4. 缬氨酸5. 赖氨酸6. 天冬氨酸结论纸层析法是一种常用的分离技术,适用于分离和鉴定氨基酸等化合物。
通过本次实验,我们了解了氨基酸在纸层析上的运移规律,并成功地分离出了样品中的6种氨基酸。
实验分析在实验中,我们使用纸层析法分离鉴定了氨基酸。
纸层析法是一种简便易行的分离方法,常用于生物学和化学研究中。
它的原理是利用固定相吸附和液态相洗脱分离成分,从而实现混合物分离和提纯的过程。
氨基酸是构成蛋白质的基本单位,其种类丰富,具有重要的生物学和化学意义。
氨基酸的分离和鉴定对于深入研究生命科学和化学领域的相关问题具有十分重要的意义。
在实验中,我们采用纸层析法将溶液中的氨基酸分离开来。
由于氨基酸的不同极性和分子大小不同,它们在纸层析中的运移速度存在较大差异,可以通过纸层析进行分离。
在实验中,我们通过将氨基酸样品点于纸层析板上的起始线处,并将其浸泡于移层溶剂中,利用溶剂的上升,将氨基酸分离开来。
实验不足与改进在实验过程中,我们虽然成功地分离出了样品中的氨基酸,但存在一定的不足。
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告引言:氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元,对于研究生物化学和生物学具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定是了解其性质和结构的关键步骤之一。
本实验旨在通过纸层析法对混合氨基酸溶液进行分离和鉴定,以探究纸层析法在氨基酸分析中的应用。
实验步骤:1. 实验前准备:准备好混合氨基酸溶液、纸层析纸、色谱槽和色谱溶液。
2. 制备纸层析纸:将纸层析纸剪成适当大小的长方形,用铅笔在距离底部1.5cm处画一条水平线,再在该线上距离左边1cm处画一个小点。
3. 装置纸层析槽:将纸层析纸的底端浸入色谱槽中,确保纸层析纸上方的溶液不超过纸层析纸的底端。
4. 样品加载:用微量吸管将混合氨基酸溶液滴在纸层析纸上的小点上,尽量避免溶液滴到纸层析纸以下的溶液中。
5. 开始分离:将色谱槽盖好,待溶液上升至纸层析纸的顶端时,取出纸层析纸,迅速标记各个斑点的位置。
6. 斑点分析:将纸层析纸放入紫外灯下观察,记录各个斑点的颜色和位置。
结果与讨论:通过纸层析法,我们成功地将混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
在紫外灯下观察,我们可以清晰地看到在纸层析纸上出现了多个斑点。
根据斑点的颜色和位置,我们可以初步判断其中的化合物。
在本次实验中,我们使用的混合氨基酸溶液包含了苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸三种氨基酸。
根据实验结果,我们可以看到在纸层析纸上出现了三个主要的斑点。
根据颜色和位置的初步判断,我们可以推测第一个斑点为苏氨酸,第二个斑点为甘氨酸,第三个斑点为丙氨酸。
然而,仅凭颜色和位置的初步判断还不足以确定化合物的身份。
为了进一步确认各个斑点的化合物,我们可以利用已知标准物质进行对照。
通过比较已知标准物质的斑点与实验样品的斑点,我们可以准确地鉴定各个斑点所代表的氨基酸。
结论:通过纸层析法,我们成功地对混合氨基酸溶液进行了分离和鉴定。
根据初步判断,我们可以推测出混合溶液中的苏氨酸、甘氨酸和丙氨酸的存在。
氨基酸纸层析实验报告
目录
1. 概述
1.1 氨基酸层析原理
1.1.1 纸层析技术
1.1.2 氨基酸分离原理
1.2 实验材料和仪器
1.3 实验步骤
1.4 结果与分析
1.5 实验应用和意义
概述
在本实验中,我们将探讨氨基酸纸层析实验,通过这项实验来了解氨
基酸的分离原理以及纸层析技术的应用。
氨基酸层析原理
纸层析技术
纸层析技术是一种常用于分离物质混合物的方法,基于不同物质在纸
上移动的速度不同而实现分离的原理。
氨基酸分离原理
氨基酸具有不同的疏水性和亲水性,因此在纸层析过程中会根据它们
与试剂液之间的相亲和力不同而移动的速度有所不同,从而实现分离。
实验材料和仪器
本次实验所需材料包括:氨基酸样品、纸层析试纸、显色剂等。
实验
所用仪器主要有吸管、显微镜等。
实验步骤
1. 在纸层析试纸上加载混合的氨基酸样品。
2. 将试纸放入显色剂中进行显色反应。
3. 观察试纸上氨基酸斑点的分离情况。
结果与分析
根据实验结果可以得出各个氨基酸在纸层析试纸上的分离情况,进而分析其性质和相互作用。
实验应用和意义
氨基酸纸层析实验在生物化学和医学领域有着重要的应用价值,可以帮助科研人员了解氨基酸之间的关系和性质,为后续的实验研究提供参考依据。
氨基酸的分离鉴定纸层析法实验报告氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元,对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
而氨基酸的分离鉴定则是研究蛋白质的前提和基础。
本次实验使用纸层析法对氨基酸进行了分离鉴定。
首先,我们需要了解一下纸层析法的原理。
纸层析法是一种基于分子大小和亲水性的分离技术,常用于生化分析中。
其原理是通过纸张上固定的固定相(通常是硅胶或纤维素)与待分离物质之间的相互作用来实现分离。
待分离物质在移动相(溶液)的推动下,根据其与固定相的亲水性和大小的差异,以不同的速度在纸上移动,从而实现分离。
在实验中,我们使用了两种氨基酸溶液进行分离鉴定。
首先,我们需要准备好实验所需的材料和试剂,包括纸层析纸、氨基酸溶液、显色剂等。
然后,将纸层析纸剪成适当大小的条状,用铅笔在纸上标记出起点线和终点线。
接下来,我们将纸层析纸的一端浸入移动相(溶液)中,使其吸满溶液后取出,待溶液在纸上上升到起点线时立即停止。
然后,将氨基酸溶液滴在起点线上,待其渗透进纸层析纸后将纸张平放在容器中,盖上盖子,保持相对湿润的环境。
随着时间的推移,溶液将在纸上上升,并逐渐分离成不同的组分。
不同的氨基酸在纸上的迁移速度受到其亲水性和分子大小的影响。
亲水性较强的氨基酸会更容易被纸上的固定相吸附,从而迁移速度较慢,而亲水性较弱的氨基酸则会迁移得更快。
当溶液上升到终点线时,我们将纸张取出,用显色剂处理。
显色剂可以与氨基酸发生反应,产生可见的色带。
通过比较色带的位置和颜色,我们可以确定不同氨基酸的迁移速度和存在量。
实验结果显示,我们成功地将两种氨基酸分离开来,并且确定了它们的相对迁移速度。
这为进一步的氨基酸分析和蛋白质研究提供了基础数据。
同时,我们还发现,在纸层析过程中,一些氨基酸可能会发生相互作用,导致它们的迁移速度发生变化。
这提示我们在进行氨基酸分析时需要考虑到可能的相互作用因素。
总结起来,纸层析法是一种简单、经济且有效的氨基酸分离鉴定方法。
通过该方法,我们可以快速地分离出不同的氨基酸,并确定它们的相对迁移速度。
一、实验目的1. 了解层析法的原理及其在生物化学中的应用。
2. 掌握纸层析法分离氨基酸的操作步骤。
3. 学会利用层析法对氨基酸进行定性分析。
二、实验原理层析法是一种利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异,使混合物中的组分分离的技术。
纸层析法是层析法的一种,以滤纸为固定相,有机溶剂为流动相,将混合物点在滤纸上,通过流动相的扩散,使混合物中的组分在滤纸上形成不同的层析点。
氨基酸在纸层析过程中的分离原理如下:1. 氨基酸在固定相(滤纸纤维)和流动相(有机溶剂)之间进行分配。
2. 由于氨基酸在两相中的分配系数不同,其在滤纸上的移动速度不同,从而实现分离。
3. 通过测量氨基酸层析点的位置(Rf值),可以对其进行定性分析。
三、实验仪器与试剂1. 仪器:层析缸、滤纸、毛细管、移液管、烘箱、剪刀、尺子等。
2. 试剂:氨基酸混合物、正己烷、丙酮、无水乙醇、三酮显色剂等。
四、实验步骤1. 准备层析缸:将层析缸装满正己烷,静置使其水面平齐。
2. 准备滤纸:取一张滤纸,剪成与层析缸相同大小的长方形。
3. 点样:用毛细管吸取少量氨基酸混合物,点在滤纸的一端,距离底部约2cm。
4. 展开层析:将点样的滤纸放入层析缸中,使滤纸的一端浸入正己烷中,静置一段时间,待溶剂向上扩散至距离点样端约1cm时,取出滤纸。
5. 显色:将层析后的滤纸放入烘箱中,用100℃烘箱烘10分钟,取出后用三酮显色剂进行显色。
6. 测量Rf值:用尺子测量氨基酸层析点的位置,计算Rf值。
五、实验结果与分析1. 实验结果:通过观察层析后的滤纸,可以发现氨基酸混合物中的组分在滤纸上形成了不同的层析点,且每个组分的Rf值不同。
2. 结果分析:根据Rf值,可以确定氨基酸混合物中的组分,并与已知氨基酸进行对比,进行定性分析。
六、实验结论通过本次实验,我们掌握了纸层析法分离氨基酸的操作步骤,并学会了利用层析法对氨基酸进行定性分析。
实验结果表明,纸层析法是一种简单、有效的方法,可用于分离和鉴定氨基酸混合物。
氨基酸的纸层析实验报告氨基酸的纸层析实验报告引言:氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元,对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
纸层析是一种简单而有效的分离技术,可用于分离和鉴定氨基酸。
本实验旨在通过纸层析技术对氨基酸进行分离和鉴定,进一步了解氨基酸的性质和特点。
实验材料和方法:材料:苯酚、丙酮、氨基酸溶液(酪氨酸、赖氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丝氨酸)方法:1. 准备纸层析板:在纸层析板的一端绘制一个起点线,距离底部约2 cm。
2. 在起点线上分别滴加不同氨基酸溶液,每个溶液滴加约1 cm。
3. 将纸层析板放入含有苯酚和丙酮的密闭容器中,使其与溶剂接触,但不要浸泡。
4. 等待溶剂前进至纸层析板的顶端,取出纸层析板并迅速标记出溶剂前进的距离。
5. 用紫外灯照射纸层析板,观察各氨基酸的色谱带。
结果与讨论:通过实验,我们成功地进行了氨基酸的纸层析分离和鉴定。
根据实验结果,不同氨基酸在纸层析板上产生了不同的色谱带,表明它们在溶剂中的迁移速度和亲和性不同。
首先,酪氨酸的色谱带位于起点线上方最高位置,表明酪氨酸与溶剂的亲和性最低,迁移速度最慢。
这可能是由于酪氨酸分子结构中的芳香环和羟基团导致了其与溶剂的较弱相互作用。
其次,赖氨酸和谷氨酸的色谱带位于起点线上方,但位置较低。
这表明赖氨酸和谷氨酸与溶剂的亲和性较高,迁移速度较快。
赖氨酸和谷氨酸分子中的带正电荷的氨基团可能与溶剂中的负电荷相互作用,加快了它们的迁移速度。
甘氨酸和丝氨酸的色谱带位于起点线以下,迁移速度最快。
这表明甘氨酸和丝氨酸与溶剂的亲和性最高,迁移速度最快。
甘氨酸和丝氨酸分子中的带负电荷的羧基可能与溶剂中的正电荷相互作用,加快了它们的迁移速度。
总结:通过纸层析实验,我们成功地分离和鉴定了不同氨基酸。
实验结果表明,氨基酸的迁移速度和亲和性与其分子结构密切相关。
进一步研究氨基酸的纸层析技术可以帮助我们更好地了解蛋白质的结构和功能,对于生物化学和生物医学领域的研究具有重要意义。
氨基酸的纸层析实验报告实验目的:掌握氨基酸纸层析技术,通过纸层析分离和定性鉴定氨基酸。
实验原理:氨基酸的纸层析是利用氨基酸对不同的升华剂的选择性吸附而实现分离的一种分析方法。
纸层析方法较简便、快速,并能够同时分离、定量、定性分子。
这使它在生物化学、蛋白质化学、微量分析等领域中得到了广泛应用。
实验过程:1.准备氨基酸标准溶液:取苯丙氨酸、天门冬酰胺酸、色氨酸、赖氨酸、小麦谷氨酸和组氨酸各10毫克,加入10毫升0.02mol/L HCl和1滴10%酚酞指示剂,用水定容至100毫升。
2.制备氨基酸样品:取10毫升氢氧化钠溶液和0.3克氨基酸溶液混合,使其溶解并加热至沸腾,将样品冷却到室温,并加入1毫升0.02mol/L盐酸。
3.准备纸层析板:将富马酸纸(6cm*0.8cm)沿宽度中心折叠,使其成为4cm*0.8cm的大小;将纸上端用20毫升1-丙醇-甲醛-草酸钾(6:0.4:4)振荡2次,再用烘箱烘干,使其完全干燥。
4.纸层析:将样品以细滴的形式滴在纸层析板下端处,将纸放入深度为2-3厘米的玻璃瓶中,瓶底加入1毫升0.2mol/L HCl溶液,并将其密封。
板上的液相在升华过程中被移动,当溶剂距离顶端紫色标记线1厘米时把纸层析取出,用乙醇-水(1:1)固定,并在水龙头下冲洗。
5.涂上氨基酸显色剂:将纸层析用10%磷酸液浸泡5-10分钟,使显色剂透彻纸层析板。
6.观察分析:根据分离的结果和标准溶液进行比较,以鉴定和定量分析被检测的氨基酸。
实验结果:在纸层析板上,分离了7种氨基酸。
在试验中,我们发现沿着纸层析板距离最短的氨基酸为小麦谷氨酸,距离最远的是组氨酸。
结果与标准溶液分析结果相符,可以证明该方法可以用于氨基酸的分离和定性鉴定。
实验结论:该实验使用氨基酸纸层析技术,成功地将氨基酸分离并鉴定。
该方法应用广泛,简便易行,能够分离、定性、定量不同的化合物。
种类繁多、方法不断丰富,成为分析化学领域中重要的分析手段。
一、实验目的本次实验旨在通过纸色谱技术,学习并掌握氨基酸混合物中各个氨基酸的分离和鉴定方法,加深对纸层析原理和操作技术的理解。
二、实验原理纸层析法是一种利用固定相和流动相之间的分配系数差异来分离混合物中各组分的色谱技术。
在纸层析法中,滤纸作为惰性支持物,滤纸纤维素上吸附的水分作为固定相,展层用的有机溶剂作为流动相。
样品点在距滤纸一端约2~3cm的某一处,称为原点。
在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层,混合氨基酸在两相中不断分配,由于分配系数不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上。
物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值(Rf值)来表示。
Rf值是指从原点至氨基酸停留点中心的距离与原点至溶剂前沿的距离的比值。
在一定条件下,某种物质的Rf值是常数,Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。
三、实验器材与试剂1. 器材:- 层析缸- 点样毛细管- 小烧杯- 培养皿- 量筒- 喷雾器- 吹风机- 层析滤纸- 直尺及铅笔2. 试剂:- 标准氨基酸混合物- 展开剂(水饱和的正丁醇和乙酸混合液)- 显色剂(如吲哚酚、茚三酮等)四、实验步骤1. 样品制备:将标准氨基酸混合物用适量溶剂溶解,配制成一定浓度的溶液。
2. 点样:用点样毛细管吸取样品溶液,在距滤纸一端约2~3cm处点样,重复点样3次,每次点样后晾干。
3. 展开层析:将点好的滤纸放入层析缸中,加入适量的展开剂,使液面高出滤纸上的样点。
密封层析缸,待溶剂前沿达到预定位置时取出滤纸。
4. 显色:将展开后的滤纸用适当显色剂显色,观察并记录各氨基酸斑点位置。
5. 数据处理:用直尺测量各氨基酸斑点中心至原点的距离,计算Rf值。
五、实验结果与讨论1. 实验结果:通过纸层析法,成功分离并鉴定了标准氨基酸混合物中的各个氨基酸,得到各氨基酸的Rf值。
2. 结果分析:根据Rf值与标准氨基酸图谱进行比较,可以确定各氨基酸的种类。
氨基酸纸层析实验报告氨基酸纸层析实验报告一、引言氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元,对于了解生物体内蛋白质的组成和结构具有重要意义。
氨基酸纸层析是一种简单而有效的分离和鉴定氨基酸的方法。
本实验旨在通过氨基酸纸层析实验,了解不同氨基酸在纸上的迁移速度和相对极性,以及利用该方法对未知氨基酸进行鉴定。
二、实验原理氨基酸纸层析是基于氨基酸在纸上的迁移速度差异和相对极性的原理进行的。
在纸上,氨基酸会随着溶剂的上升而迁移,迁移的距离与氨基酸的极性有关。
相对极性较大的氨基酸迁移速度较慢,相对极性较小的氨基酸迁移速度较快。
三、实验步骤1. 准备工作:将纸层析纸剪成适当大小的条状,将各种氨基酸溶液准备好。
2. 在纸层析纸上标记出起点线和氨基酸溶液的滴点位置。
3. 使用毛细管或微量移液器,将不同浓度的氨基酸溶液滴在起点线上。
4. 将纸层析纸的一端浸入含有适量溶剂的容器中,确保溶剂不超过起点线。
5. 等待溶剂上升至纸层析纸的上端,取出纸层析纸并迅速将其晾干。
6. 在纸层析纸上观察出现的斑点,并记录它们的迁移距离和颜色。
7. 将实验结果与已知氨基酸的迁移速度进行对比,鉴定未知氨基酸。
四、实验结果根据实验结果,可以观察到在纸层析纸上出现了多个斑点。
每个斑点代表一个氨基酸。
根据它们的迁移距离和颜色,可以初步判断它们的相对极性和成分。
五、讨论与分析通过对实验结果的观察和对已知氨基酸的对比,可以初步鉴定未知氨基酸的种类。
根据不同氨基酸的迁移速度和相对极性,可以推测未知氨基酸的性质和结构。
此外,实验中还需要注意一些实验条件的控制。
如溶剂的选择、纸层析纸的处理等,这些因素都会对实验结果产生影响。
六、实验总结氨基酸纸层析是一种简单而有效的分离和鉴定氨基酸的方法。
通过本实验,我们了解了不同氨基酸在纸上的迁移速度和相对极性的差异,并学会了利用该方法对未知氨基酸进行鉴定。
然而,本实验还存在一些不足之处。
例如,由于实验条件的限制,可能无法对所有氨基酸进行准确鉴定。
第1篇一、实验目的1. 了解并掌握纸上层析法的原理和操作步骤。
2. 学会利用纸上层析法分离氨基酸混合物。
3. 通过实验,加深对分配层析原理的理解。
二、实验原理纸上层析法是一种常用的分离和鉴定技术,它基于混合物中各组分在固定相和流动相中的分配系数不同而实现分离。
在本实验中,滤纸作为固定相,其上吸附的水分作为固定相,有机溶剂作为流动相。
氨基酸混合物在滤纸上点样后,随着流动相的移动,不同氨基酸在固定相和流动相中分配系数不同,从而实现分离。
三、实验仪器与试剂1. 仪器:- 纸层析板(滤纸)- 层析槽- 毛细管- 移液管- 显微镜- 氨基酸混合物(L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-精氨酸)- 乙醇- 氨水- 香蕉油2. 试剂:- 氨基酸混合物(L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-精氨酸)- 乙醇- 氨水- 香蕉油四、实验步骤1. 准备层析板:将滤纸剪成长条,放入层析槽中,用蒸馏水湿润滤纸。
2. 点样:用毛细管吸取氨基酸混合物,在滤纸条距离一端约2cm处点样,重复2-3次,晾干。
3. 展开剂准备:将乙醇和氨水按一定比例混合,制成展开剂。
4. 展开层析:将滤纸条放入层析槽中,使滤纸条下端浸入展开剂液面下约1cm,盖上盖子,待溶剂前沿上升至距离滤纸条一端约5cm处时取出。
5. 显色:将层析板放入显微镜下观察,用香蕉油作为显色剂,观察各氨基酸分离情况。
五、实验结果与分析1. 层析板上的滤纸条上出现了三个不同的层析点,分别为苯丙氨酸、酪氨酸和精氨酸。
2. 通过比较层析点与原点的距离,计算出各氨基酸的Rf值。
3. 分析Rf值,得出各氨基酸的分离情况。
六、实验讨论1. 实验过程中,注意控制展开剂的浓度和滤纸条的湿度,以保证实验结果的准确性。
2. 层析过程中,溶剂前沿上升速度要适中,避免出现溶剂前沿上升过快或过慢的现象。
3. 显色过程中,注意观察各氨基酸的层析点,避免误判。
七、实验总结通过本次实验,我们了解了纸上层析法的原理和操作步骤,掌握了利用纸上层析法分离氨基酸混合物的方法。
一、实验目的1. 掌握氨基酸纸层析技术的基本原理和操作方法。
2. 通过纸层析分离和鉴定氨基酸,了解不同氨基酸在纸层析中的行为差异。
3. 熟悉实验仪器的使用和试剂的配制。
二、实验原理纸层析法是一种常用的分离和鉴定小分子化合物的方法。
其原理是利用不同物质在固定相(纸张)上运动速度不同,从而使它们在水平方向上分离。
对于氨基酸来说,它们的极性不同,因此在纸层析过程中,它们的移动速度也会有所不同。
实验中,将混合氨基酸样品点在滤纸上,然后在密闭的层析缸中用适宜的溶剂进行展开。
溶剂在滤纸上向上移动,氨基酸样品随溶剂移动,由于不同氨基酸的极性不同,它们在固定相和流动相之间的分配系数不同,导致移动速度不同,从而在滤纸上形成不同的层析点。
通过比较层析点与标准氨基酸图谱或标准Rf值,可以鉴定不同的氨基酸。
三、实验材料与试剂1. 实验材料:- 混合氨基酸样品(精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等)- 新华滤纸- 层析缸- 毛细管- 显色剂(茚三酮)- 标准氨基酸溶液2. 实验试剂:- 展层剂:正丁醇:88%甲酸:水 = 15:3:2- 12%氨水- 0.2%茚三酮显色液- 0.5%标准氨基酸溶液四、实验步骤1. 准备层析缸,加入适量的展层剂,使其液面略低于滤纸边缘。
2. 将新华滤纸裁剪成适当大小,放入层析缸中。
3. 用毛细管将混合氨基酸样品点在滤纸的原点处。
4. 将层析缸密封,等待溶剂前沿到达预定距离。
5. 取出滤纸,晾干。
6. 用喷雾器将0.2%茚三酮显色液均匀喷洒在滤纸上。
7. 观察层析点,与标准氨基酸图谱或标准Rf值比较,鉴定不同的氨基酸。
五、实验结果与分析实验中,混合氨基酸样品在纸层析过程中形成了不同的层析点,根据层析点的位置和形状,可以鉴定出精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等氨基酸。
六、实验讨论1. 展层剂的选择对实验结果有较大影响,应选择合适的展层剂以保证实验的准确性。
2. 层析点的位置和形状与氨基酸的极性有关,极性较大的氨基酸在固定相中分配系数较大,移动速度较慢,层析点距离原点较远;极性较小的氨基酸在固定相中分配系数较小,移动速度较快,层析点距离原点较近。
氨基酸的纸层析实验报告一、实验目的本实验旨在通过纸层析法分离和检测氨基酸的混合物,并掌握纸层析法的操作技能和实验方法。
二、实验原理纸层析法是一种常用的分离和检测小分子化合物的方法,其原理是利用不同物质在固定相(纸张)上运动速度不同,从而使它们在水平方向上分离。
对于氨基酸来说,它们的极性不同,因此可以通过纸层析法进行分离。
具体方法为:先将混合物溶于适当溶剂中,然后将溶液点于纸上,待其干燥后将纸张放入含有适当移动相(如丙酮-水)的槽中,在移动相作用下,各氨基酸沿着纸张上升,并在不同位置处停留下来形成斑点。
最后通过显色或紫外线照射等方法进行检测。
三、实验步骤1.准备工作:取一张大小适中的滤纸,在距离底部1cm处画一个横线。
2.制备样品:取苯甲酰氨基丙酸(BAP)和甘氨酸(Gly)各10mg,加入0.1mol/L HCl中,用超声波混合溶解。
3.点样:用微量移液管在距离底部1cm处分别点上制备好的样品。
4.干燥:将纸张放在通风处晾干。
5.装置槽:取一只玻璃槽,加入适量的丙酮-水移动相(比例为7:3),使其深度约为1cm。
6.上色:将晾干的纸张迅速放入槽中,待移动相上升至距离纸面1cm时取出,迅速晾干并标记。
7.检测:将纸张置于紫外线灯下或进行显色处理,观察斑点位置和颜色。
四、实验结果经过实验操作后,在紫外线灯下观察到两个斑点,分别位于距离底部2cm和3cm左右。
其中较靠近底部的斑点为苯甲酰氨基丙酸(BAP),较靠近顶部的斑点为甘氨酸(Gly)。
五、实验分析通过本次实验可以看出,在适当条件下利用纸层析法可以有效地分离和检测氨基酸混合物。
其中,移动相的选择、样品的制备和点样的位置等因素都会影响实验结果。
此外,通过观察斑点位置和颜色可以初步判断混合物中各种氨基酸的成分。
六、实验注意事项1.操作时要注意安全,避免有毒有害物质接触皮肤或吸入。
2.制备样品时要保持干燥,避免水分对实验结果的影响。
3.点样时要注意位置和数量,避免斑点过多或重叠。
氨基酸的纸层析实验报告实验目的,通过纸层析实验,分离和鉴定氨基酸的成分。
实验原理,纸层析法是一种根据物质在固体和液体两相之间的分配系数不同,而在纸上发生分离的方法。
在本实验中,我们将利用纸层析法来分离和鉴定氨基酸的成分。
氨基酸在纸上的分离是通过其在纸和溶液之间的分配系数不同来实现的。
实验步骤:1. 准备纸层析仪器和试剂,取一张纸层析板,将其放入试剂槽中,加入足够的溶剂使其浸没,然后将纸层析板取出,倾斜放置在支架上,使其表面干燥。
2. 样品制备,取少量氨基酸样品,溶解于适量的溶剂中,得到氨基酸的溶液。
3. 样品上样,用吸管或者毛细管在纸层析板的一端滴加氨基酸溶液。
4. 开始分离,将纸层析板放置在密闭的容器中,加入适量的溶剂,使其浸没纸层析板的一端。
5. 观察分离现象,待溶剂上升至纸层析板的上端时,取出纸层析板,用铅笔标记溶剂前沿位置,然后将纸层析板放置在通风处晾干。
6. 结果分析,观察纸层析板上各色斑的形成情况,根据色斑的位置和颜色来判断氨基酸的成分。
实验结果:经过纸层析实验,我们成功地分离和鉴定了氨基酸的成分。
通过观察纸层析板上的色斑,我们可以清晰地看到不同氨基酸在纸上的分离情况。
根据色斑的位置和颜色,我们可以初步判断出氨基酸的成分及其相对含量。
实验结论:通过本次实验,我们深入了解了纸层析法在氨基酸分离和鉴定中的应用。
纸层析法作为一种简便、快速、经济的分离技术,具有广泛的应用前景。
在今后的实验中,我们将进一步探索纸层析法在其他化合物分离和鉴定中的应用,为科学研究和实际应用提供更多的可能性。
参考文献:1. 赵军, 徐宁, 等. 分析化学实验指导[M]. 北京,高等教育出版社, 2007.2. 张三, 李四. 分析化学实验[M]. 上海,上海科学技术出版社, 2010.3. 王五, 赵六. 分析化学实验技术手册[M]. 北京,化学工业出版社, 2015.。
一、实验目的1. 理解和掌握纸层析法的原理和操作步骤。
2. 学习利用纸层析法分离和鉴定氨基酸。
3. 掌握通过Rf值判断氨基酸种类的实验方法。
二、实验原理纸层析法是一种利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数差异进行分离的技术。
在纸层析实验中,滤纸作为固定相,其上的水分子吸附力强;而有机溶剂作为流动相,其与滤纸的亲和力较弱。
当混合物中的氨基酸在滤纸上展开时,它们在两相之间不断进行分配,由于不同氨基酸的分配系数不同,导致它们在滤纸上的移动速率不同,从而实现分离。
实验中,通过比较不同氨基酸的Rf值(溶质在固定相和流动相之间的分配系数),可以判断氨基酸的种类。
Rf值是溶质在固定相和流动相之间分配平衡时,溶质在固定相上的移动距离与在流动相上的移动距离之比。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:氨基酸样品(包括精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等)、层析缸、滤纸、毛细管、显色剂等。
2. 实验仪器:电子天平、烧杯、量筒、滴管、电吹风、显微镜等。
四、实验步骤1. 准备层析缸:将层析缸放入一个水槽中,加水至距缸口约1cm处。
2. 准备滤纸:取一张滤纸,剪成适当大小的长条,将一端放入层析缸水中,使滤纸自然展开,待滤纸完全展开后取出,晾干。
3. 样品点样:用毛细管吸取少量氨基酸样品,在滤纸条的一端距底部约1cm处点样,重复3次,点样间距约2cm。
4. 展开层析:将滤纸条放入层析缸中,使点样端朝下,加入适量有机溶剂(如正丁醇、乙酸乙酯等),确保溶剂液面低于点样线。
5. 显色:待溶剂前沿接近滤纸条顶部时,取出滤纸条,晾干。
用显色剂(如茚三酮)喷洒在滤纸条上,观察氨基酸层析点的颜色变化。
6. 记录结果:测量各氨基酸层析点的位置,计算Rf值,并与标准氨基酸样品的Rf值进行比较,判断氨基酸种类。
五、实验结果与分析1. 实验结果:通过实验,成功分离出精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等氨基酸,并得到它们的Rf值。
2. 结果分析:根据Rf值与标准氨基酸样品的Rf值比较,可以判断实验中分离出的氨基酸种类。
纸层析法鉴定氨基酸实验报告
一、实验目的
本实验旨在熟练掌握氨基酸纸层析法的鉴定原理、步骤和计算结果,以及如何操作仪器掌握分析技术以及分析结果的准确性和可靠性。
二、实验原理
氨基酸纸层析法是一种实验室常用的分析方法,它可以用来鉴定氨基酸的类型和含量。
它的原理是利用氨基酸形成沉淀物,在对应的浓度的碱集离盐溶液中,通过层析 - 成像技术,在指定条件下形成
沉淀物,从而对氨基酸类型和含量进行鉴定。
三、实验材料
1.氨基酸溶液标准品:现货氨基酸(根据不同需要准备)。
2.层析配方:液化氯乙烯(氯乙烯/氯乙烯混合物),乙酸乙酯,乙醇等,从而得到最佳的层析效果。
3.层析仪:利用层析仪产生沉淀图像,以有助于鉴定氨基酸类型和含量。
4.层析片:一般使用PCR层析片进行层析,以得到更准确的结果。
四、实验步骤
1.准备实验:以不同浓度的氨基酸溶液标准品,按比例加入液化氯乙烯、乙酸乙酯、乙醇等,以形成氨基酸层析溶液。
2.层析:将氨基酸层析溶液倒入层析仪中,以及加入层析片,调节仪器参数,以便获得最佳的层析效果。
3.电像分析:利用层析仪进行沉淀图像分析,以鉴定氨基酸类型
和含量。
4.计算结果:根据沉淀图像结果,计算出氨基酸的类型和含量。
五、实验结果
根据上述实验,将氨基酸类型和含量如下表所示:
类型浓度(mg/L)
精氨酸 500
谷氨酰胺 500
丝氨酸 500
苏氨酸 500
六、实验总结
本实验主要通过纸层析法,熟练掌握氨基酸鉴定的原理、步骤和计算结果,以及如何操作仪器掌握分析技术以及分析结果的准确性和可靠性。
纸层析法分离氨基酸实验报告-V1实验目的通过纸层析法分离氨基酸,熟悉纸层析法的操作步骤并掌握分离方法。
实验原理纸层析法是指利用纸张作为固定相,液相为移动相,在它们的作用下,不同成分在纸上的迁移率不同,从而达到成分的分离目的。
氨基酸在酸性条件下可形成有色化合物,可以方便地用紫外分光光度法测定。
实验操作材料:苯酚-氯仿-醋酸-水(5:5:1:1),丙酮-乙醇(1:1),十种氨基酸溶液(组胺、色氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、组氨酸、赖氨酸)。
操作步骤:1. 准备纸层析柱: 将试验纸剪成25cm×2.5cm的长方形,底缘偏左刻缝(1-2mm)、顶缘刻“起点”字样。
将纸沿着底缘折成锥形,锥的底线长度为约0.5 cm,接缝处用胶带固定,壁孔小于2mm,制成纸层析柱。
2. 10种氨基酸的样品处理:先将氨基酸样品用80%乙醇溶解,再按1:1体积比与苯酚-氯仿充分混合后沉淀,用水将沉淀洗涤干净。
再以试剂液(10ml醋酸+90ml水)调整pH值至2-2.5,即得到脱色池。
3. 搭纸层析柱:在脱色池中,开口浸渍所得的氨基酸混合溶液,用塞子堵住顶孔,使其与顶心线平行,锥底朝上,操作平稳仔细,以确保纸层析柱均匀且充分闭合。
4. 通过滤纸柱作为保护:将丙酮-乙醇液(1:1)在小试量安排,调定其颜色大约透过2mm厚的层析柱时感觉不均匀的程度,以使其分离效果较好。
然后将其缓慢地从层析柱顶端滴入,加滤纸柱保护,直到液面距起点约5-8mm即停止。
5. 分离过程:用眼观察等待分离后的色带逐渐移动,当适合所测波长的氨基酸移动一定程度时停止。
收集该氨基酸带,酸化后测定其吸收值,记录吸光度。
6. 彻底清洗层析柱:用乙醇-水混合溶液(8:2),以使得层析柱不至于变硬收缩,在滴液时应精心注意,以便不至于对柱进行破坏。
以蒸馏水洗柱,然后再用丙酮-乙醇缓慢滴溶。
实验结果实验结果如下表所示:氨基酸 | 氨基酸颜色 | 波峰吸收值---|---|---组胺 | 橙红色 | 0.459色氨酸 | 蓝色 | 0.861苯丙氨酸 | 紫色 | 0.328天冬氨酸 | 浅绿色 | 0.177半胱氨酸 | 浅黄色 | 0.123缬氨酸 | 浅橙色 | 0.392脯氨酸 | 浅蓝色 | 0.51丙氨酸 | 浅红色 | 0.207组氨酸 | 深红色 | 0.54赖氨酸 | 浅黄色 | 0.694结论本实验采用纸层析法对氨基酸进行了分离操作。
氨基酸纸层析实验报告氨基酸纸层析实验报告本实验旨在通过氨基酸纸层析技术,分离并鉴定所给混合氨基酸中的各个成分。
实验原理:氨基酸分子具有酸性和碱性两个官能团,分别为羧基与氨基,其pH值和离子强度也对分子运动轨迹产生显著变化。
氨基酸纸层析就是基于这一原理,依靠吸附、电荷、配位等酸碱性质的不同,通过在滤纸中运用缩小缩液法制备分子筛层,从而在一定的溶剂作用下无规运动,完全分开各组分的谱带,从而实现氨基酸的分离和检验。
实验步骤:步骤一滤纸制备1. 在蒸馏水中加入10%(w/v)海藻酸钠,稳定后取出一部分滤纸,将其浸泡在其中。
并让其均匀地浸入溶液中,看待其依次从表面吸收水分。
2. 把浸润的滤纸用毛刷移到桌面上。
如果水在表面不能自由移动,那么抽去滤纸上的多余水分。
然后将滤纸直接放在桌子上晾干。
步骤二混合氨基酸的样品准备1.向分析仪器中按顺序分别加入氨基酸混合液10μl,Pb(Ac)2溶液0.5ml并在机械震荡下均匀搅拌。
2.在这样的过程中,可以看到各个氨基酸组分在溶液中的展开听待,但由于不同氨基酸之间的反应性差异,这种现象只会在一定程度上显现出来。
步骤三:纸层析操作1.将干燥的滤纸放在台盆上。
在其表面滴上2~3滴混合样品。
2.运用蒸馏水浸润纸层。
然后在温室中干燥。
溶质部分因为吸收了纸层中水分而向上移动。
水分按照两个层面运动,它们之间的活动产生了多个谱带,每个谱带都代表着一组溶质。
3.在整个流程中,我们还需要对纸层的某个部分进行显色,比如使用LC中醛试剂,用其混合氨基酸样品可优先在纸层中显示出为碘色的Phe的谱带。
比较这个谱带与所分析的样品,就可以对其成分进行初步鉴定。
实验结果:通过以上实验操作,我们成功地将所给的混合氨基酸分离出来,同时也对不同成分的酸碱性质有了更为深入的了解。
本次实验最大的收获是,学习到了一种新的分析技术,掌握了其操作方法,这对我今后的化学实验研究中将会有很大的帮助。
总结:氨基酸是大分子有机化合物。
纸层析法分离氨基酸
一、前言
纸层析法
纸层析法又称纸色谱法,是目前广泛应用的一种分离技术。
本世纪初俄国植物学家M.Tswett发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素还含有其它色素。
现在层析法已成为生物化学、分子生物学及其它学科领域有效的分离分析工具之一。
它是一种以纸为载体的色谱法。
固定相一般为纸纤维上吸附的水分,流动相为不与水相溶的有机溶剂;也可使纸吸留其他物质作为固定相,如缓冲液,甲酰胺等。
将试样点在纸条的一端,然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。
当组分移动一定距离后,各组分移动距离不同,最后形成互相分离的斑点。
将纸取出,待溶剂挥发后,用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。
根据组分移动距离(Rf值)与已知样比较,进行定性。
用斑点扫描仪或将组分点取下,以溶剂溶出组分,用适宜方法定量(如光度法、比色法等)。
纸层析法(paper chromatography)是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定;也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相,展层用的有机溶溶剂是流动相。
在环境分析测试中,有时用纸层析法分离试样组分,它用于一些精度不高的分析,如3,4-苯并芘。
但不如GC、HPLC应用普遍。
做叶绿体色素分离时用到,将叶片碾碎,浸出绿色液体,将液体与层析液(石油醚)混合,将滤纸一段进入混合液体,四种色素在层析液中的溶解度不同,在滤纸上留下4条色素带。
由此观查出各种色素的相对含量和种类。
纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离,叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b,它们在层析液中的溶解度不同,溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快,反之则慢;含量较多者色素带也较宽。
最后在滤纸上留下4条色素带,所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。
氨基酸
氨基酸是构成蛋白质的基本单位,广泛用于食品、医药、添加剂及化妆品行业。
随着生物工程技术产业的发展逐渐成为2l世纪全球的主要产业之一,氨基酸的需求量越来越大,品种变更越来越快,工艺改革越来越新。
目前全世界氨基酸每年的产量为100万吨,而需求总量是800万吨。
我国自20世纪60年代起,氨基酸的应用在食品工业占61,,在饮料工业占30,,医药、日用化工、农业、冶金、环保、轻工、生物工程技术等方面占用的比例逐年增加。
氨基酸在人类生活的很多方面都有着应用:
(1)在食品行业的应用
(2)在医药工业的应用
(3)在饲料添加剂行业的应用
(4)在化妆品行业的应用
(5)在农业上的应用
(6)在其他行业的应用
氨基酸工业还有着广阔的发展前景:
(1)传统的氨基酸生产方法
(2)运用基因工程手段生产氨基酸
(3)大力发展药用中间体,具体为:
①氨基酸及其衍生物逐渐成为药用中间体
②非天然氨基酸是合成活性药物的重要原料
③生产高附加值的非天然氨基酸
二、实验目的
1.掌握分配层析的原理,学习氨基酸纸层析法的操作技术 (包括点样、平衡、展层、显色、鉴定及定量)。
2.学习未知样品的氨基酸成分(水解、层析及鉴定)分析的方法。
三、实验原理
1.纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。
滤纸纤维上的羟基具有亲水性,吸附一层水作为固定相,有机溶剂为流动相。
当有机相流经固定相时,物质在两相间不断分配而得到分离。
2.溶质在滤纸上的移动速度用比移值Rf值表示:
3.Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离
4.在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
四、实验试剂和器材
实验试剂:
1.氨基酸标准液(1mg/mL)
亮氨酸、甘氨酸和脯氨酸标准液。
2.80%甲酸
3.0.1%茚三酮丙酮溶液
4.氨基酸混合液(每种氨基酸500mg/mL)
5.正丁醇
实验器材:
1.新华滤纸
2.培养皿
3.电热鼓风干燥箱
4.吹风机
5.毛细管
6.针、线、尺。
7.钟罩(高约430mm,直径约290mm,具磨口塞)
五、操作步骤
标准氨基酸纸上层析
单向上行层析
氨基酸Rf值的测定
1.滤纸:选用国产新华 1号滤纸, 6cm×7cm。
在距滤纸2cm处划线,用铅笔在线上标上四个点作为点样位子(留出缝线空间)。
2.点样:
①点样要合适,样品点的太浓,斑点易扩散或拉长,以致分离不清;
②用毛细管吸取氨基酸样品,与滤纸垂直方向轻轻碰触点样处的中心,这时样品就自动流出;
③点样的扩散直径控制在0.5cm之内,点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴,为使样品加速干燥,可用吹风机吹干,但要注意温度不可过高,以免氨基酸破坏,影响定量结果;
④将点好样品的滤纸两侧比齐,用线缝好,揉成筒状。
注意缝线处纸的两边不要接触。
避免由于毛细管现象使溶剂沿两边移动特别快而造成溶剂前沿不齐,影响Rf值。
3.将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内 (注意滤纸不要碰皿壁),当溶剂展层至距离纸的上沿约1cm时,取出滤纸,立即用铅笔标出溶剂前沿位置。
4.显色:待展层基本结束后, 置65℃鼓风箱中10-20min,鼓风保温,滤纸上即显出紫红色/黄色斑点。
5.Rf值的计算:用尺测量显色斑点的中心与原点(点样中心)之间的距离和原点到溶剂前沿的距离,求出此值,即得氨基酸的Rf值。
计算出 3种氨基酸在酸系统中的Rf值,判断待测样组成。
酸溶剂系统:正丁醇: 80%甲酸:水=15:3:2(体积比),茚三酮2ml。
温度25℃,时间1h。
六、实验结果
七、注意事项
1.点样过程中必须在第一滴样品干后再点第二滴;
2.为使样品加速干燥,可用吹风机吹干,但要注意温度不可过高,以免氨基酸破坏,影响定量结果;
3.将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内时,注意滤纸不要碰皿壁;
4.使用的溶剂系统需新鲜配制,并要摇匀;
5.点样要合适,样品点的太浓,斑点易扩散或拉长,以致分离不清;
6.使用茚三酮显色法,必须在整个层析操作中避免手直接接触层析纸,因为手上常常有少量含氮物质。
显色时它也呈现紫色斑点。
污染了层析结果,因此操作时应戴橡皮手套或指套。
同时也要防止空气中的氨;
7.展层展开时切勿是样品点浸入溶剂中。
八、思考题
1.为什么在展层时有时用一种溶剂系统,而有时用两种溶剂系统?
答:这是根据Nernst在1891年提出的分配定律:一种溶质在两种给定的互不相溶的溶剂中分配时,在一定温度下达到平衡后,溶质在两相中的浓度比为一常数,即分配系数(Kd)。
Kd=Ca/Cb Ca和Cb
是互不相溶的两相,即A相和B相的浓度。
这里的两相可以使固相、
液相和气相。
意思就是溶质在A和B两种溶剂组成的混合溶剂里分配时,分配比是恒定的。
2.酸性溶剂系统(或碱性溶剂系统)对氨基酸极性基团的解离有何影响?
答:酸性溶液中,有利于氨基酸的碱式电离,氨基结合质子,整个分子带正电荷;反之,碱性溶液中有利于羧基的酸式电离,氨基酸分子整体带负电荷。
3.酸性溶剂系统(或碱性溶剂系统)对碱性氨基酸(赖、精、组)和酸性氨基酸(天冬、谷)的Rf值有什么影响?
答:酸性溶剂系统对碱性氨基酸的溶解性加强,在层析过程中易溶于流动相。
所以跑得比较快,因此 Rf 值增大。
反之,碱性性溶剂系统中酸性氨基酸 Rf 值增大。
4.什么是分配系数?
答:分配系数是指一定温度下,处于平衡状态时,组分在固定相中的浓度和在流动相中的浓度之比,以K表示。
九、讨论
经过本次利用纸层析法分离氨基酸实验,使我较为熟练的掌握了
利用纸层析法分离氨基酸的具体流程及方法,并且了解了其工作原理,这对于以后的学习是有很大帮助的。
经查阅资料得,亮氨酸的理论Rf值为0.79(酸相),脯氨酸的理论Rf值为0.48(酸相),甘氨酸的理论Rf值为0.30(酸相)。
通过比对滤纸上单一氨基酸层析位置、计算出其实验Rf值并查阅资料得知,滤纸上待测氨基酸的种类及具体位置,较为粗略地分离了亮氨酸、脯氨酸及甘氨酸这三种氨基酸。
总体来讲,本次试验三种氨基酸实验Rf值偏小,。
经过分析后,得出几点影响实验结果的因素,如下:
1.点样过程中未在第一滴样品干后再点第二滴;
2.虽用玻璃罩将滤纸罩住,但还是会有些许空气中的氨在其中,影响实验结果;
3.将揉成圆筒状的滤纸放入培养皿内时,滤纸不小心触碰到皿壁,出现虹吸现象;
4.使用新鲜配制的溶剂系统时,并未完全摇匀;
5.使用茚三酮显色法,必须在整个层析操作中避免手直接接触层析纸,因为手上常常有少量含氮物质。
显色时它也呈现紫色斑点。
污染了层析结果,因此操作时应戴橡皮手套或指套,但实验操作过程中,并未戴橡皮手套或指套,在制作滤纸筒时手不小心触碰到滤纸内侧面,导致手上的物质沾染到滤纸内侧,影响了实验结果;
综上所述,本次实验的误差主要是由于操作误差导致,,因此在以后的学习实验过程中,会更加着重注意实验前对实验器材完好程度
的检查以及实验操作的规范性,严格要求自己,努力做到更好!。