动物生理学实验讲义陈海燕 樊晓丽编10-407丽水学院生态学院二○一七年二月目录第一部分 解剖生理学实验常用器械及溶液配制 11 手术器械及活体解剖技术 12 生理学常用实验仪器及用品 153 常用生理溶液的配制 22 第二部分 必做实验内容第一章 人体的运动系统实验1 人体全身骨骼和骨骼肌系统（基础性） 23 第二章 细胞的兴奋性与生物电现象实验2 牛蛙坐骨神经腓肠肌标本制备（基础性） 25 第三章 神经系统与肌肉系统实验3 不同刺激强度和频率对骨骼肌收缩的影响（基础性） 28 第四章 感觉器官实验4 瞳孔反射和视野盲点测定 31 第五章血液与循环系统实验5血型鉴定；血涂片的制作（基础性）34 实验6 蛙心搏动观察、心室期前收缩和代偿间歇实验（基础性） 36 第五章 呼吸系统实验7 家兔呼吸运动的调节（综合性）39 第六章 循环系统实验8 家兔动脉血压的神经-体液调节（综合性）42 附录 主要参考文献 46第一部分 解剖生理学实验常用器械及溶液配制第一节 手术器械及活体解剖技术生理学实验是以活的动物或人体作为观察对象和实验材料的。
在动物实验中，活体解剖技术对生理学实验的成败起着至关重要的作用。
在实验过程中，学生应着重于学习、掌握些操作技术，以提高自己的动手能力。
生理学实验方法虽然多种多样，但一般可分为离体实验法和在体实验法两类。
离体实验法是将要研究的器官或组织从活的或刚处死的动物体上取出，置于接近正常生理条件的人工环境中，以观察、研究其生理机能。
如离体心脏的灌流、离体肠段的活动以及用坐骨神经-腓肠肌标本等实验。
在体实验法又可分为急性实验和慢性实验两种。
急性在体实验法是动物在麻醉或毁坏脑或脊髓的状态下，用手术的方法暴露某一器官，观察、研究其机能及变化规律。
如在体心脏活动的观察、肾脏泌尿机能的研究等。
只能在一定时间内进行观察研究，而且实验后动物不能存活。
慢性实验法是在特定条件下，以完整而清醒的动物为对象的实验方法，可以在较长的时间内，连续地反复观察动物的某一生理机能。
此法常需要先在动物体上施行某种无菌外科手术，如胃肠道瘘管术，或在机体的一定部位埋藏电极、或切除某一器官等，须待动物恢复健康后方可进行实验。
这种实验花费时间较长，动物需要特殊的护理，在基础生理学实验中较少安排。
一、手术器械及其用途（一）常用手术器械根据生理学实验的需要，常用手术器械包括手术刀、手术剪、金冠剪、手术镊、眼科剪、蛙类毁髓针、玻璃分针等。
1．手术刀主要用于切开皮肤或脏器。
常用手术刀为刀柄和刀片组合式，也有刀柄和刀片相连的。
根据手术的部位与性质，可以选用大小、形状不同的手术刀片。
常用的执刀方法有 4 种（1）执弓式这是一种常用的执刀方法，动作范围广而灵活，用于腹部、颈部或股部的皮肤切口。
（2）执笔式此法用力轻柔而操作精巧，用于切割短小而精确的切口，如解剖神经、血管，作腹膜小切口等。
（3）握持式常用于切割范围较广、用力较大的切口，如切开较长的皮肤、截肢等。
（4）反挑式此法多使用刀口向弯曲面的手术刀片，常用于向上挑开组织，以免损伤深部组织。
2．手术剪主要用于剪皮肤或肌肉等粗软组织。
此外，也可用来分离组织，即利用剪刀的尖端，插入组织间隙，分离无大血管的结缔组织等。
手术剪分尖头剪和钝头剪。
其尖端还有直、弯之别。
生理学实验中常习惯于用弯型手术剪剪毛。
另外，还有一种小型手术剪叫眼科剪，主要用于剪血管或神经等柔软组织。
眼科剪也有直头与弯头之分。
正确的执剪姿势如图 1-4 所示，即用拇指与无名指持剪，食指置于手术剪的上方。
3．手术镊主要用于夹持或牵拉切口处的皮肤或肌肉组织。
眼科镊用于夹持细软组织。
手术镊有圆头、尖头两种，又有直头和弯头，有齿和无齿之别，而且长短不一，大小不等，可根据手术需要选用。
通常，有齿镊主要用于夹持较坚韧或较厚的组织，如皮肤、筋膜、肌腱等；无齿镊主要用于夹持较细软的组织，如血管、粘膜等。
正确的执镊姿势如图1－5 所示，类似于执笔式，较为灵活方便。
4．金冠剪金冠剪尖端短粗，易于着力。
可用于剪皮肤、肌肉、内脏、骨髓以及结线等。
执剪姿势与一般手术剪相同。
5．毁髓针专门用来毁坏蛙类脑髓和脊髓的器械。
分为针柄和针部，持针姿势一般采用执笔式（图1-6）。
6．玻璃分针专用于分离神经与血管的工具。
尖端圆滑，直头或弯头，分离时不易损伤神经或血管。
玻璃分针尖端容易碰段，使用时要小心，如尖端破碎时会损伤组织，不可再使用。
持玻璃分针的姿势同执笔式。
（二）哺乳类动物用手术器械1．止血钳主要作用是分离组织和止血，不同类型的止血钳又有不同的用途。
执止血钳的姿势均与执剪刀的姿势相同（图 1-8）。
常用止血钳有以下三种。
（1）直止血钳分长短两种类型，又有有齿和无齿之别。
无齿止血钳主要用以夹住浅层出血点，以便止血，也可用于浅部的组织分离。
有齿止血钳主要用于强韧组织的止血，提起皮肤等。
（2）弯止血钳与直型的大同小异，也分长短两种，主要用于深部组织或内脏出血点的止血。
（3）蚊式止血钳（蚊嘴钳）此种止血钳头端细小，又叫小止血钳，适用于细嫩组织的止血和分离，不宜钳夹大块或坚硬组织。
2．持针器主要用于夹持缝针，缝合组织。
持针器的头端较短，口内有槽。
使用时，用持针器的尖端夹持缝针近尾端 1/3 处。
（图 1-9）。
3．咬骨钳主要用于咬切骨组织，如打开颅腔或骨髓腔等，咬骨钳分为剪刀式和小蝶式两种，前者适用于咬断骨质，后者适用于咬切骨片。
4．颅骨钻5. 缝针用于缝合各种组织。
缝针有圆针和三棱针两种，又有直型和弯型之别，而且其大小不一。
圆针多用于缝合软组织，三棱针用于穿皮固定缝合，弯针用于缝合深部组织。
6．动脉夹主要用于短期阻断动脉血流，如插动脉插管时使用。
二、活体解剖技术（一）动物的选择常用的实验动物有狗、猫、兔、大白鼠、小白鼠、豚鼠、鸽、鸭、蟾蜍或蛙等。
无论选用哪种动物，均需健康。
一般地说，健康的哺乳动物毛色光泽，两眼明亮、眼和鼻无分泌物、鼻端潮而凉、反应灵活、食欲良好。
健康的蛙或蟾蜍则皮肤湿润、喜爱活动，静止时后肢蹲坐、前肢支撑、头部和躯干挺起等。
动物种类的选择需根据实验内容而定，使其解剖和生理特点适合于预定实验的要求。
如研究主动脉弓减压神经传入冲动的作用时，常选用兔作为实验对象，因为兔的减压神经在颈部自成一束，与迷走神经伴行，易于寻找和分离。
在研究心脏特殊传导组织的电活动时，常选用狗的浦肯野氏纤维及兔的窦房结作为实验材料，因为狗的浦肯野氏纤维在心室内较为粗大，很容易解剖分离。
在生理学的研究中，特别是基础理论研究中，合理地选择实验动物，常常是实验成败的关键，但并非愈是高等动物愈好。
在选择实验动物时，应根据实验需要，因地制宜地加以考虑。
（二）动物的麻醉在慢性实验或急性在体实验中，施行手术之前必须将动物麻醉。
麻醉可使动物在手术或实验过程中减少疼痛，保持安静，保证实验的顺利进行。
麻醉剂的种类繁多，作用原理不尽相同。
除了麻痹中枢神经系统以外，还会引起其它生理机能的变化，因此，在应用时需根据动物的种类以及实验或手术的性质慎重加以选择。
麻醉必须适度，过深或过浅均会给手术或实验带来不良影响。
麻醉的深浅可从呼吸，某些反射的消失，肌肉的紧张程度和瞳孔的大小加以判断。
人们常用刺激角膜以观察角膜反射，夹捏后肢股部肌肉以观察其反应的简易方法了解动物的麻醉深度。
适宜的麻醉状态是呼吸深慢而平稳，角膜反射与运动反应消失，肌肉松弛。
1．常用麻醉剂的种类及用法麻醉剂可分为局部麻醉剂和全身麻醉剂两种。
局部麻醉剂常用 0.5-1.0% 盐酸普鲁卡因或 2%盐酸可卡因作皮肤或粘膜表面麻醉。
在生理实验中，多采用全身麻醉剂，如挥发性的乙醚、氟烷和非挥发性的巴比妥类、氨基甲酸乙酯等，以下分别加以介绍。
（1）乙醚（ether）是一种呼吸性麻醉剂，适用于各种实验动物。
在用乙醚麻醉猫、兔、或鼠类时，可将动物放在特制的玻璃钟罩内，同时放入浸有乙醚的脱脂棉，动物在吸入后的15-20min 开始发挥作用。
在麻醉狗时，可用特制的麻醉口罩套在动物嘴上，慢慢将乙醚滴在口罩上进行麻醉。
麻醉时需注意动物的保定。
乙醚对呼吸道有刺激粘液分泌的作用，为防止呼吸道堵塞，可用硫酸阿托品（0.1-0.3mg/kg 体重）皮下或肌肉注射。
乙醚麻醉易于掌握，比较安全，作用时间短，麻醉后容易苏醒；但要专人管理麻醉，以防过早苏醒或麻醉过量。
（2）戊巴比妥纳（pentobarbital sodium）适用于各类实验动物。
常配制成 5%的水溶液，一般由静脉或腹腔注射。
戊巴比妥钠作用开始快，一次给药的麻醉有效时间约 2-4h，不需要特殊照顾。
如在实验中需要补充注射时，可再由静脉注射 1/5 剂量，仍可维持 1-2h。
在麻醉过量时，可产生严重的呼吸和循环抑制，导致动物的死亡。
（3）硫喷妥纳（pentothal sodium）为淡黄色粉末，水溶液不稳定，一般需使用前配制，常用浓度为 2.5-5%，静脉注射，不宜作皮下或肌肉注射。
静脉注射后作用较快，但苏醒也快，麻醉时间较短，一般约1.5h。
实验过程中可重复注射，以维持麻醉的深度。
（4）氨基甲酸乙酯（ethyl carbamate）又名乌拉坦或脲酯。
氨基甲酸乙酯易溶于水，常用浓度为 20-25%。
适用于多数动物：狗、猫、兔多用静脉或腹腔注射，鸟类多用肌肉注射，蛙类用皮下淋巴囊注射。
（5）氯醛糖（chloralose）溶解度较小，常用浓度为 1%，使用前须加热促其溶解，但不可煮沸。
常采用静脉或腹腔注射，可维持麻醉状态 3-4h。
与氨基甲酸乙酯合并常用于电生理实验中。
非挥发性麻醉剂使用简便，维持时间较长，实验中无需专人照管，麻醉深度也较易掌握，因此为大多数实验室采用。
其缺点是苏醒缓慢。
2．麻醉剂的给药途径及方法非挥发性麻醉剂的给药途径为注射给药法，主要有静脉、腹腔、肌肉、皮下和淋巴囊注射。
分述如下：（1）静脉注射常用静脉注射麻醉狗、兔。
狗在麻醉前必须妥善保定，特别是生狗，以防伤人。
保定的方法多为捆绑狗的嘴鼻部。
即用粗棉带从下颌绕到上颌打一结，然后绕向下颌再打一结，再将棉带引至头后，在颈部背面打第三结，最后再打一活结（图 1-10）。
另外，也可用特制的长柄大铁钳将狗颈部钳住，钳夹后将钳头固定于墙角或地面，此时头部不能自由活动，但不影响呼吸。
狗最常用于注射和采血的静脉为前肢内侧的头静脉和后肢小腿外侧的小隐静脉。
注射前需在注射部位剪毛，用手握压静脉向心端处，使血管充血膨胀。
将注射针头顺血管方向先刺入血管旁的皮下，然后再刺入血管，此时可见回血。
注射者一手固定针头，一手缓缓进行推注（图 1-11）。
兔静脉注射兔的常用部位为耳缘静脉。
兔耳的外缘血管为静脉，中央的血管为动脉。
注射前最好将动物放入兔体固定箱内，使兔头露于箱外，以防注射时挣扎。
先除去注射部位的被毛，用左手食指和中指夹住耳缘静脉近心端，使其充血（亦可用动脉夹夹住），并用左手拇指和无名指固定兔耳。
