免疫胶体金技术共35页

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实验仪器：离心机、电泳仪、显微 镜、移液器等
实验注意事项：避免污染、控制温 度、保持湿度等
实验步骤
准备实验材料： 制备胶体金溶 制备抗体溶液： 制备抗原溶液：
包括胶体金、 液：将胶体金 将抗体与缓冲 将抗原与缓冲
抗体、抗原、 与缓冲液混合， 液混合，搅拌 液混合，搅拌
缓冲液等
搅拌均匀
提高稳定性：通过优化实验条件、选择稳定的检测试剂等方法，提高检测结果的稳定性
提高自动化程度：通过开发自动化检测设备，提高检测效率和准确性
免疫胶体金技术的实验操作
实验准备
实验材料：胶体金、抗体、抗原、 缓冲液、洗涤液、显色剂等
实验步骤：样本处理、抗体孵育、 胶体金标记、洗涤、显色等
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云计算和大数据技术：实现 检测数据的实时分析和共享
检测灵敏度提升
技术进步：通过改进胶体金颗粒的制备工艺，提高检测灵敏度
应用领域：在生物医学、食品安全、环境监测等领域具有广泛应用前景
技术融合：与其他检测技术相结合，提高检测灵敏度和准确性
发展趋势：随着科技的发展，免疫胶体金技术的检测灵敏度将不断提高，应用范围也将不 断扩大。
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汇报人：
免疫胶体金技术
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单击输入目录标题 免疫胶体金技术概述 免疫胶体金技术的分类 免疫胶体金技术的优缺点 免疫胶体金技术的实验操作 免疫胶体金技术的应用实例
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免疫胶体金技术概述
定义和原理
免疫胶体金技术是一种基于免疫反应的检测技术 原理：利用抗原-抗体特异性结合，通过胶体金标记抗体，实现对目标抗原 的检测 特点：灵敏度高、特异性强、操作简便、快速

λmax
橙色
518nm
橙色
522nm
红色
525nm
紫红ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
535nm
TEM Images of Colloidal Au
Average particle size ~ 17nm
Good gold colloids and bad (unstable) gold colloids
. 劣质金外形不均一，且 非球形，有凝集景象， 颗粒间变异系数较大
➢Final conjugation (IgG)
Take 100ml of gold sol and adjust to Ph9 Adjust the dialyzed and centrifuged antibody solution
(0.1ug/ul) to pH9.2 Add the determined amount of antibody solution dropwise
胶体金与蛋白质的结合胜利与否，取决于pH值，普 通只需在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才干结 实地结合，因此，标志之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标志蛋白质的等电点略偏碱。
需求提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需求 降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH能 够损害pH测定计的探头，因此，普通用精细的pH试纸测 定其pH即可.
2. Adjust the antibody (0.1ug/ul) to the proper pH with 100nM K2CO3 or 100mM HC1.
3. Add the antibody to each tube in a series from 0150ul (ie 0-15ug in steps of 0, 1, 2, 3 ....15ug).

该技术适用于现场快速检测和应急响 应，为及时诊断和治疗提供了有力支 持。
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。

胶体金快速免疫诊断专业技术标准
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6、黄金时代是在我们的前面，而不在 我们的 后面。
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7、心急吃不了热汤圆。
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8、你可以很有个性，但某些时候请收 敛。
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9、只为成功找方法，不为失败找借口 (蹩脚 的工人 总是说 工具不 好)。
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10、只要下定决心克服恐惧，便几乎 能克服 任何身。-- 戴尔． 卡耐基 。
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利

最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生产的用于急性心 肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其精密度和准确性均符合 定量测定要求。
04
免疫胶体金技术的展望
免疫胶体金技术展望
01
提高胶体金的制备质量
04
实现多元化检测
采用多膜复合或单膜多元 受体固定的方式，是实现 多元检测的有效方法。
谢谢聆听
汇报人：詹积 学号：6160109017 专业：营养与食品卫生学
抗体和金颗粒的耦联
在适宜条件下，抗原和抗体与胶体金颗粒 反应产生聚集，达到一定的密度时，大量 聚集的标记物显示出肉眼可见的红色或粉 红色斑点。
胶体金的制备——化学还原法
基本原理：在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原成金原子。在适当条件下，还原的金原子
凝聚成一定大小的金颗粒，形成金溶胶。
Stop heating when a deep red color is obtained.
Hale Waihona Puke 3胶体金技术的种类及特点免疫胶体金快速诊断技术
快速免疫金渗滤法
免疫层析法 ( immunochromatogra-phy，ICA)
(immuogold filtration assay ，IGFA)
A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒
Add 100 mL of 1.0 % HAuCl4 to a 200 mL Erlenmeyer flask on a stirring hot plate. Add a magnetic stir bar and bring the solution to a boil.

前景展望
1 2 3
不断改进技术
随着科学技术的不断发展，免疫胶体金技术将不 断改进和完善，提高检测的灵敏度和特异性。
拓展应用领域
免疫胶体金技术的应用领域将不断拓展，不仅限 于医学诊断，还可应用于食品安全、环境监测等 领域。
实现自动化和智能化
未来免疫胶体金技术将与自动化、智能化技术相 结合，提高检测的效率和准确性，为临床诊断和 科学研究提供更好的服务。
用。
04
免疫胶体金技术具有操作简便、特异性高、稳定性好 等优点，但也存在一些限制，如检测灵敏度相对较低， 对某些低浓度目标物质检测效果不佳。
对未来研究的建议
01
深入研究免疫胶体金技 术的反应机制和影响因 素，为优化技术提供理 论支持。
02
探索新型的标记物和信 号放大策略，提高检测 灵敏度和特异性。
成熟发展
90年代至今，免疫胶体金 技术不断优化，应用范围 逐渐扩大。
02
免疫胶体金技术的制备方法
胶体金的制备
制备原理
利用氯金酸的水溶液在碱性条件下加热产生聚合物颗粒，通过控制反应条件如 温度、pH值和反应时间，可控制胶体金的粒径大小。
制备步骤
将氯金酸水溶液加热至沸腾，加入氢氧化钠调节pH值至碱性，继续加热至溶液 变为橙红色，冷却后即可获得胶体金溶液。
免疫抗原的制备
抗原选择
选择具有特异性识别能力的抗原，如抗体、多肽等，确保与 目标分子有高亲和性。
抗原制备
将抗原与载体蛋白结合，形成抗原-载体蛋白复合
结合原理
利用抗原-抗体之间的特异性结合反应，将免疫抗原与胶体金结合，形成胶体金 标记的免疫复合物。
结合方法
免疫胶体金技术(转)ppt课 件
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备方法 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的优缺点及前景展望 • 结论

（13）加0.05mol/l pH7.4 TBS稀释PAG（1：40）。
（14）0.05mol/l pH7.4 TBS振洗10＇×2。
（15）双蒸水振洗5min。
（16）1%戊二醛10min。
（17）双蒸水振洗5min。
（18）0.01% 伊文思蓝2min，甘油封片。
你现在学习的是第17页，课件共33页
结果：光镜下观察，小肠粘膜内含有嗜银颗粒的细胞胞浆呈红 色，阳性颗粒位于细胞核底部，比单纯用PAG染色深度得到加 深，阳性结果得到放大。
原理：抗A蛋白抗体Fab段、Fc段均可与PAG上的A蛋白结合， 因此，聚集更多的胶体金颗粒。
PAG放大法的优点： ① 使用试剂单一； ② 敏感性高； ③ 背景干净。
常用的方法:2种
(1)柠檬酸三钠还原法
制备程序很简单，胶体金的颗粒大小较一致，广为采用。 制备胶体金时金颗粒的大小与柠檬酸三钠用量成反比。 操作步骤： 1）1ml l％氯化金加入100ml蒸馏水中，煮沸。 2）迅速加入4mll％柠檬酸钠，保持沸腾状态，搅动至出现透明的橙红色。
3）自来水冲洗烧瓶，冷却。
2）小于10nm颗粒的胶体金用超速离心机离心，在4℃离心1h左右，弃上 清，将沉淀以TBS溶解，重复离心2～3次，沉淀溶于TBS中。4℃保存备 用。
为了得到颗粒均匀一致的免疫金试剂，上述粗提制剂可用10-30%蔗糖或甘油 溶液作密度梯度离心，分带收集。
你现在学习的是第12页，课件共33页
2) 凝胶过滤法
你现在学习的是第19页，课件共33页
1 硝酸银显影液的配制
(1) 10％明胶液 + 枸橼酸缓冲液 + 对苯二酚+蒸馏水， 混合，磁力搅拌均匀(注意避光) ，用前加入硝酸银水溶液

2. 调节PH: 根据所标记蛋白质的等电点来调节 胶体金的
PH
第17页/共33页
常用几种蛋白质标记时胶体金的 PH
蛋白质
PH
抗体
SPA
过氧化物酶
低密度脂蛋白
9.0 6.0
8.0 5.5
第18页/共33页
3. 磁力搅拌下, 逐滴加入蛋白质溶液, 作用 5～15min 4. 继续磁力搅拌, 加入5％牛血清白蛋白, 使其终浓度为1％, 搅拌10min；也
一. 概述
(一) 发展历史
u 1971年 Faulk和Taylon 用兔抗沙门氏菌抗血清与胶体 金颗粒结合, 制备成金标抗体, 检测细菌表面抗原的分布
u 1975年 Horisberger等 把胶体金技术推广应用于扫描 电镜、透射电镜及冰冻蚀刻电镜的研究
u 1978年 Geoghegan 平的应用
发表了胶体金标记物在光镜水
第21页/共33页
2.凝胶过滤法
u 将探针溶液装入透析袋内, 4℃ , 置于硅胶或聚乙 二醇中浓缩至原体积的1 4～1 5 u 离心 1500 r min, 20min 弃沉淀 u 经Sephacryl（丙烯葡聚糖）S400层析柱分离纯化 。用0.02mol/L TBS(0.1%BSA)洗脱 TBS的PH根据蛋白质种类而定 u 按红色深浅分管收集 洗脱液
第8页/共33页
（四）制备胶体金的注意事项
1.玻璃器皿的清洁
玻璃器皿清洗→清洁液浸泡24h →流水冲→蒸馏
2. 试水剂反配复制洗涤→晾干
应尽量使用分析纯试剂
3.影各响种胶水体溶金液颗必粒须用大三小蒸的水因或素去离子水配制
加入还原剂的速度 搅拌是否均匀
制备胶体金所用的烧瓶大小
第9页/共33页

42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
胶体金快速免Байду номын сангаас诊断技术标准
56、死去何所道，托体同山阿。 57、春秋多佳日，登高赋新诗。 58、种豆南山下，草盛豆苗稀。晨兴 理荒秽 ，带月 荷锄归 。道狭 草木长 ，夕露 沾我衣 。衣沾 不足惜 ，但使 愿无违 。 59、相见无杂言，但道桑麻长。 60、迢迢新秋夕，亭亭月将圆。
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹

53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
39、没有不老的誓言，没有不变的பைடு நூலகம் 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
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36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。