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去甲苔藓蒽噻吩抑制血管生成作用的体外实验研究(英文) Chen Zhong;Xiangdong Zhou;Minghui Zhang;Yide Hu【期刊名称】《中德临床肿瘤学杂志：英文版》【年(卷),期】2011(10)2【摘要】Objective:The aim of the study was to investigate the effect of Demethyl bryoanthrathiophene(DBT) on proliferations of human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) and human lung adenocarcinoma cell line A549,and antiangiogenic effect of DBT on HUVECs in vitro.Methods:MTT assay was used to observe the effect of DBT on proliferations of HUVECs and A549 cells,flat plate scarification assay and tube formation in vitro test were used to observe the impact of DBT on migration and vaso-formed ability of HUVECs.The effects of DBT on apoptosis and cell cycle of HUVECs were calculated by flow cytometry.Results:MTT assay showed that treatment with DBT resulted in strong inhibition to the growth of HUVECs and A549 cells.The inhibition effects of DBT on HUVECs and A549 cells were related to dosage and times of dependency.In different doses of DBT(0.16,0.32 and 0.48 μmol/L) of flat plate scarification for 24 h,inhibition rates of DBT to migration of HUVECs were 14.70%,38.23% and58.82%,respectively.In dose of DBT from 0.04,0.20 to 0.40 μmol/L for 24 h in tube formation,there were significance differences(P < 0.01) in the decreasing number of angiogenesis and incomplete blood vessel compared with control groups.All results showed that DBT promoted theapoptosis rate of HUVECs,and the increase of concentration of DBT accompanied the acceleration of apoptosis rate.Conclusion:DBT could inhibit the proliferations of HUVECs and A549 cells,and effectively suppress angiogenesis in vitro.【总页数】7页(P63-69)【关键词】抗血管生成;体外增殖;DBT;血管内皮细胞;A549细胞;人脐静脉内皮细胞;细胞凋亡;MTT法【作者】Chen Zhong;Xiangdong Zhou;Minghui Zhang;Yide Hu【作者单位】Third Department of Oncology, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400037, China;Department of Pharmacochemistry of Third Military Medical University, Chongqing 400037, China【正文语种】中文【中图分类】Q78;S884.21【相关文献】1.去甲斑蝥素对胆囊癌细胞体外模拟血管生成拟态的抑制作用 [J], 孙伟;范跃祖;张文忠;葛春燕;赵凤娣;周婷婷;宁艳霞2.血管生成抑制剂TNP-470抑制血管瘤血管内皮细胞增殖的体外实验研究 [J], 洪莉;肖现民3.去甲苔藓葸噻吩抑制血管生成作用的体外实验研究 [J], ChenZhong;Xiangdong Zhou;Minghui Zhang;Yide Hu4.血管生成抑制剂候选物——去甲苔藓蒽噻吩的设计合成 [J], 罗圣霖;覃容欣;周向东5.去甲二氢愈创木酸对活体血管生成作用的实验研究 [J], 孙慧勤;陈意生;史景泉;卞修武;邹仲敏;傅晓岚;章容因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血管生成生物标志物检测及其临床意义引言：血管生长是一种复杂的生物过程，涉及多种细胞、生理和生化因素的相互作用。
血管生成在许多疾病中起到关键作用，例如肿瘤的生长和转移，而且在组织再生和修复过程中也起到重要的作用。
因此，了解血管生成的机制以及发现可以用于监测和预测相关疾病的生物标志物具有重要的临床意义。
一、血管生成的机制和调控因素血管生成是指新的血管形成过程，它包括血管内皮细胞的增殖、迁移和管腔形成，以及血管周细胞（如平滑肌细胞和间充质细胞）的招募和分化。
血管生成的过程受到多种生理和病理因素的调控。
一种重要的调控机制是血管生成因子及其受体的信号通路。
血管内皮生长因子（VEGF）家族是调节血管生成最重要的因子之一。
VEGF 通过与其受体（如VEGFR-2）结合，激活下游信号通路促进内皮细胞的增殖和迁移。
除了VEGF家族外，其他因子如血小板源性生长因子（PDGF）、基础纤维生长因子（bFGF）等也参与血管生成的调控。
另一个重要的调控机制是血管生成抑制因子的作用。
如血管抑制蛋白1（Angiostatin-1）和血管抑制蛋白2（Angiostatin-2）通过干扰VEGF的信号通路，抑制血管内皮细胞的增殖和迁移，从而抑制血管生成过程。
二、血管生成生物标志物的分类和检测方法血管生成生物标志物是指可以用于检测和评估血管生成过程的生物标志物。
根据其来源和类型的不同，血管生成生物标志物可以分为细胞因子、激素、蛋白质、基因等多种类型。
最常用的血管生成生物标志物是细胞因子，如VEGF、PDGF、bFGF等。
这些细胞因子在血液和组织中的水平可以通过酶联免疫吸附实验（ELISA）或其他免疫检测方法进行测定。
这些方法具有高灵敏度和特异性，可以用于评估血管生成的活性以及疾病的进展和预后。
除了细胞因子，一些激素如雌激素和甲状腺素在血管生成中也发挥重要作用。
对这些激素的水平进行检测可以了解其对血管生成的调节作用。
蛋白质是细胞生物学中的重要参与者，在血管生成过程中也发挥着重要的作用。
稿号：02-09-29 待发表化疗药物抗肿瘤血管作用的研究进展尹鸣综述陈龙邦审校南京军区南京总医院肿瘤科，南京210002关键词：化疗药；肿瘤；血管形成中图分类号：R734.2 文献标识码：A 文章编号：1、引言肿瘤生长是血管依赖的，肿瘤通过分泌某种因子促进了内皮细胞的增殖和毛细血管的形成，而新生血管通过营养控制影响着肿瘤的生长。
在缺乏新生血管的情况下，肿瘤将被限制于2-3mm大小的静止状态。
不仅如此，肿瘤血管在肿瘤从良性向恶性的转变，癌细胞进入血液循环，转移灶的发展和破裂中都起着重要作用。
血管生成涉及肿瘤从形成到转移的全过程(1)。
当前，抗肿瘤血管生成正成为抗肿瘤治疗新的研究热点，已报道的具有血管生成抑制活性的物质有数百种，并且数量还在不断增加。
令人感兴趣的是一些已在临床广泛应用的化疗药物也具有血管生成抑制活性，并且在研究中取得了显著的血管抑制效果.大量研究结果表明：化疗药物可以成为肿瘤血管床的有效抑制剂，将开辟化疗药物新的应用领域。
2、化疗药物抗血管生成的研究方法及其评估标准.在过去的10年中，血管生成的研究经历了从细胞培养、动物模型到人体应用3个阶段。
概括的说，可分为体外实验和体内实验。
体外实验(2)：主要是分离和培养内皮细胞，观察其在外源因素作用下的增殖、迁移和功能变化。
这些实验包括：观察细胞迁移状况的Boyden盒分析法和组织培养皿、胶原基质分析法及观察细胞存活情况的细胞计数、胸腺嘧啶的掺入、免疫组化标记等方法。
体外实验简单、便宜而迅速，能够进行有效的实验控制和便于观察，但不同实验室使用的试剂、内皮细胞的种类、实验条件和技术的不同加大了横向比较的困难，更重要的是体外实验结果往往不能有效的推广到体内，因此只适用于初筛。
体内实验：体内实验更为直接的观察生理条件下药物对血管生长的作用,它首先需要一个合适的宿主,能够较好的观察微血管的生长状况;其次,这一生长部位还应较少受到宿主本身各种理化因素的影响,以便于实验结果的归纳和讨论;第三,在需要时,应能方便的进行各项操作,如试剂的添加、肿瘤的嫁接等。
血管生成实验步骤及方法
一、技术简介
血管生成（Angiogenesis）是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉新的毛细血管性血管的生长。
无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1-2 mm，都会有血管生成。
这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。
小管形成实验是测量在体外血管生成一种快速的，可量化的方法。
二、实验流程
1. 第一天matrigel（BD，354230）放入4℃冰箱过夜。
2. 第二天待matrigel冻融后，离心数分钟。
3. 冰上操作（matrigel不能凝固）。
matrigel用预冷枪头混匀，EP管提前预冷，每500μl分装。
4. 96孔板提前预冷，每孔加入50μl matrigel，避免产生气泡。
在37℃孵箱放置45分钟。
5. 当细胞长满70-80%时，消化下来，并用含10%FBS的DMEM重悬，每孔加入50μl重悬液，浓度为10000-60000/孔细胞，重复三孔。
6. 37℃孵育，四小时后可见血管形成。
2.性能指标
2.1外观和性状
2.1.1试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；包装标签应清晰，准确、牢固。
2.1.2试剂盒内组分(磁性微球溶液除外) 应为清澈透明的液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。
2.2净含量
净含量应符合表1的要求。
表1 净含量要求
辅助试剂：1. 0.30 M EDTA 二钾溶液（抗凝剂）一瓶，5.5 mL /瓶。
2.0.34 M 8-羟基喹啉硫酸盐溶液（酶抑制剂）一瓶，5.5 mL/瓶。
3.0.5 M PH 缓冲液（调节剂）一瓶，20.0 mL/瓶。
4.0.32 M 二巯基丙醇溶液一瓶，3.0 mL/瓶。
2.3精密度
2.3.1批内精密度
批内变异系数(CV)应≤10%。
2.3.2批间精密度
批间变异系数(CV)应≤15%。
2.4准确度
回收率应在90%～110%范围内。
2.5空白限
空白限应小于0.1 ng/mL。
2.6线性
在(0.4-24.0) ng/mL 浓度范围内，线性相关性系数（r）应大于0.9800。
2.7质控品准确度
测量结果在质控范围（可接受区间）内。
2.8质控品均一性
瓶间重复性CV%应≤10%。
1 /1。
实验名称：材料成血管实验实验日期：2023年X月X日实验地点：实验室实验目的：探讨材料在血管生成中的应用，通过体外实验验证材料诱导血管生成的能力。
实验原理：血管生成是生物体内重要的生理过程，对维持组织器官的代谢和生长具有重要意义。
近年来，材料科学在生物医学领域取得了显著进展，血管生成材料作为一种新型生物材料，具有广阔的应用前景。
本实验旨在通过体外实验验证材料诱导血管生成的能力。
实验材料与仪器：1. 实验材料：（1）材料A：一种新型血管生成材料；（2）材料B：一种对照材料；（3）小鼠成纤维细胞（L929）；（4）小鼠内皮细胞（MVECs）；（5）胎牛血清（FBS）；（6）DMEM培养基；（7）青霉素、链霉素；（8）透明质酸酶；（9）血管内皮生长因子（VEGF）。
2. 实验仪器：（1）细胞培养箱；（2）CO2培养箱；（3）倒置显微镜；（4）酶标仪；（5）流式细胞仪；（6）凝胶成像系统。
实验方法：1. 细胞培养：（1）将小鼠成纤维细胞（L929）和小鼠内皮细胞（MVECs）分别接种于6孔板，置于细胞培养箱中培养；（2）待细胞生长至对数生长期，用0.25%胰蛋白酶消化细胞，按1:10的比例传代；（3）分别将材料A和材料B与L929细胞共培养，以研究材料对成纤维细胞的影响；（4）将L929细胞与MVECs共培养，并在培养体系中加入VEGF，以研究材料对血管生成的影响。
2. 材料诱导血管生成实验：（1）将材料A和材料B分别与L929细胞共培养，观察材料对成纤维细胞的影响；（2）将L929细胞与MVECs共培养，并在培养体系中加入VEGF，分别将材料A和材料B添加到培养体系中，观察材料对血管生成的影响；（3）通过倒置显微镜观察细胞形态变化，记录血管生成情况；（4）通过酶标仪检测细胞增殖情况；（5）通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况；（6）通过凝胶成像系统观察血管生成情况。
实验结果：1. 材料A和材料B对成纤维细胞的影响：材料A和材料B均能促进成纤维细胞的增殖，但材料A的促进作用更明显。
ibidi血管生成实验分析软件Tube Formation Image Analysis - WimTube一个基于网络的研究血管生成实验的定量成像分析软件产品特点：1.全面解决血管生成实验-从样品准备到成像分析仅需几步；2.客观性和可重复性实验分析；3.简单快速的数据处理-几分钟出结果；4.不需要额外的硬件和软件。
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【黄芪甲苷对人外周血内皮祖细胞体外血管生成能力的影响】外周血内皮祖细胞摘要：目的观察黄芪甲苷对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）数量及增殖、迁移、黏附功能、血管生成能力的影响。
方法密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞，FITC标记荆豆凝集素Ⅰ（xxxxI）、DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白（DiIacLDL）荧光双染鉴定，流式细胞仪检测细胞表面标志。
单个核细胞培养4d后进行实验分组，分为对照组和黄芪甲苷干预组。
干预组加入不同浓度的黄芪甲苷（分别为10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL）培养72h。
分别采用四氮唑溴盐比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定来观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力；体外血管生成试剂盒来观察EPCs体外血管生成能力。
结果与正常对照组比较，黄芪甲苷组EPCs数量增加，EPCs的黏附、迁移、增殖和体外血管形成能力增强，且黄芪甲苷20μg/mL时作用最显著。
结论黄芪甲苷可增加体外培养的EPCs数量，改善EPCs增殖、迁移、黏附和体外血管生成能力等生物学功能。
关键词：黄芪甲苷；内皮祖细胞；血管生成能力中图分类号：R329.2R289.5文献标识码：A文章编号：1672内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells，EPCs）是一类能增殖并分化为血管内皮细胞，但尚未表达成熟血管内皮细胞表型，也未形成血管的前体细胞[1]。
有研究显示，EPCs不仅参与人胚胎血管生成，同时也参与出生后血管新生和内皮损伤后的修复过程[2]。
目前，EPCs介导的治疗性血管再生及损伤血管修复已经成为心血管疾病治疗的研究热点之一。
血管生成能力是EPCs最重要的功能之一。
黄芪甲苷（astragalosideⅣ）也称黄芪皂苷甲、黄芪皂苷Ⅳ，是从中药黄芪中分离得到的一种具有多种药理活性的皂苷类化合物，具有调节机体免疫力、保护组织器官、降低血糖、抗细胞凋亡和抗炎、抗病毒等多方面的药理作用。
艾美捷内皮血管生成检测试剂盒的多种特点血管生成（Angiogenesis）是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉的新的毛细血管性血管的生长。
内皮血管生成是一个极其复杂的过程。
通常新生血管是在原有的血管基础上延伸扩展而形成的，其过程类似于典型的伤口愈合和胚胎形成过程。
在血管生成因子和趋化因子的作用下，血管内皮细胞分泌尿激酶型纤溶酶原激活物和抑制因子等蛋白酶，并穿过血管下基质膜向肿瘤组织迁移。
一般包括包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮细胞增殖、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。
对于血管生成的研究，已建立有多个体内（in vivi）模型。
如鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型，在体基质胶塞分析(Matrigel Plug Assay)、角膜血管再生分析(Corneal Angiogenesis Assay)等模型均能很好的评估血管生成应答和再生能力。
然后这些体内模型都具有共同的缺陷：耗时耗力，并且需要成熟的技术和试验经验。
艾美捷内皮血管生成检测试剂盒：Angiogenesis AssayCatalog Number：CBA-200Size：50 assaysDetection：Light Microscopy艾美捷内皮血管生成检测试剂盒特点：1.评估体外血管生成管的形成2.使用ECM基质凝胶3.类似体内基底膜环境艾美捷内皮血管生成检测试剂盒相关研究：CytoSelect™ 96-Well Hematopoietic Colony Forming Cell AssayCytoSelect™ Leukocyte Transmigration Assay细胞选择™ 96孔造血集落形成细胞测定细胞选择™ 白细胞迁移试验。
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本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。
多次重复检测结果表明，最小检出量为4.75pg/ml，与EGF、GM-CSF、MIP-1α、MIP-1β、TGF-α、TGF-β1，小鼠 EGF、GM-CSF、MIP-1α等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
人血管生成素(Angiogenin, ANG)是一种分子量为14kDa的单链非糖基化蛋白，属于核糖核酸酶中RISBASE家族。
该家族成员不仅具有核糖核酸酶活性，还具有一些特殊的生物学功能。
ANG氨基酸长度为123，包括3个链内二硫键。
人ANG与小鼠ANG具有75%的氨基酸同源性，且具有一定的种间交叉反应。
能够表达ANG的细胞主要有血管内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、结肠柱状上皮细胞、淋巴细胞和部分肿瘤细胞。
ANG主要参与血管的形成过程。
基底膜的降解是血管新生过程中内皮细胞发生迁移的先决条件。
ANG首先与肌动蛋白结合，随后肌动蛋白-ANG复合物发生裂解，激活组织血纤维蛋白溶酶原。
这一过程产生的血纤维蛋白溶酶会降解基底膜中的层粘连蛋白和纤连蛋白。
易必迪ibidi μ-Slide Angiogenesis体外血管生成实验产品特点：ibidi血管生成系列产品，包括μ-Slide Angiogenesis和μ-Plate Angiogenesis 96 well，是ibidi 公司根据血管生成实验的要求的改进型设计。
它较之传统的血管生成实验，有以下优点：1、节省基质凝胶--Gel matrix（自行准备），比传统96孔板实验节省9/10（传统实验用量100ul，ibidi血管生成板—ibidi μ-Slide Angiogenesis 用量10ul）；2、特殊的双层孔洞设计，可形成厚度均匀（0.8mm）的平整Gel matrix表面，使细胞落于同一层物镜对焦平面，细胞形态更易观察；3、紧密的上盖设计，有效的减缓液体蒸发；4、适用多通道微量分注器；注：配合ibidi 加热与孵育系统，可以进行清晰、长期的活细胞显微拍摄。
ibidi “Well-in-a-Well” 和普通标准孔的对比：订购信息：产品规格: µ-Plate Angiogenesis 96 well 1. Planar air-liquid interface:good phase contrast all over theobservation area 2. Planar gel surface:all cells are in one optical planV olume of Matrigel: 10 µlStandard well1. Meniscus on air-liquid interface:poor phase contrast in most of the observation area2. Mensicus on the gel surface: notpossible to focus on all cells simultaneouslyV olume of Matrigel: 100 µl技术特征:1. 标准的玻片规格2. 紧密的结合盖可以减少蒸发3. 4mm内孔在5mm外孔里的设计4. 均匀的厚度为0.8mm的胶层5. 细胞生长均匀6. 染色和固定兼容性好7. 优良的光学显微特性8. 兼容多通道分注器9. 生物相容性的塑料材料制成的——无胶水，无泄漏10. 适合各种类型的胶，例如；Matrigel™, 胶原蛋白, and 琼脂糖*11. 同样适合96孔板：µ-Plate Angiogenesis 96 well*Matrigel不是产品的一部分产品介绍：1.样品准备/Sample Preparation「ibidi血管生成板」的应用非常广泛1242.显微成像/Microscopy可配合ibidi加热&孵育系统进行长时间的显微摄影。
ImageJ插件Angiogenesis Analyzer对血管网络进行定量分析血管形成实验（Tube formation assay）是体外研究血管生成（Angiogenesis）的经典方法，其优点是可快速确定参与血管生成的基因或通路。
血管生成实验在肿瘤医学的研究与治疗中一直是实验热点，肿瘤血管生成是一个极其复杂的过程，包括血管内皮细胞基质降解、内皮细胞移行、增殖、管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。
研究表明无论无论是原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成。
这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。
多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速，抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。
于是体外模拟血管生成的过程对研究血管形成机制、发现促进或抑制血管生成药物十分重要。
今天咱们就来看看已经成功形成了血管的实验结果应该有哪些量化指标与分析步骤吧！我们常用的量化指标有：number of tubes; number of loops/meshes; number of branch sites/nodes; length of tubes。
文献中常用的分析指标是branch points与capillary length。
Angiogenesis下载地址：https:///ij/macros/toolsets/图片来源ImageJ网站1、点击打开需要的插件：复制内容；在image J安装目录下的macros/toolsets文件夹创建一个Angiogenesis Analyzer.txt2、重启ImageJ，然后点击ImageJ工具栏的>>按钮，找到插件位置，单击后在新工具栏中出现Angiogenesis Analyzer分析界面：3、点击扳手形状选择Settings可设置测量参数：点击Network analysis分析界面，Angiogenesis Analyzer插件可以分析小管形成明场图片（Phase Contrast）或荧光图片（Fluo）：备注：在进行图像处理前可以使用ps对图片进行一个对比度的调整和锐化处理。
人血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒使用步骤使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中血管生成素1(ANG-1)含量。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
体外血管生成实验原理
体外血管生成实验原理是一种利用细胞培养技术模拟血管生成过
程的实验方法。
这项实验技术应用于心血管疾病、肿瘤等领域的分子
生物学研究中，以探索血管生成的相关分子机制，为疾病诊断和治疗
提供理论基础。
该实验方法分为以下几个步骤：
一、基质涂层
用一定浓度的基质溶液涂在培养基底部，包括：胶原、纤维蛋白等成
分的蛋白质基质，ECM（细胞外基质）、生物专用性基质等等。
二、种植细胞
将细胞悬液离心去上清液，留下体积约10 mL的混悬液，然后将混悬
液中的每个细胞用显微镜筛选、计数并放入传统的96孔、48孔、96
孔High-Content、24 96/384孔多孔板等中。
将细胞培养在培养基中，直至细胞出现半满多孔板（即调查到细胞成簇的数量时停止）。
三、涂层基质钙化
当细胞成簇时，使用0.24 mM钙离子浓度处理培养簇，离心上清液，
并加入基质涂层，然后进行钙化处理。
四、分析细胞学成分
利用分析表格对细胞规模、形态、颜色进行定量分析，比较不同状态
细胞的相似性和差异性。
五、采用透析法进行血管形成分析
在血管生成细胞培养基中加入α-VEGF抗体，阻止血管生成。
根据基
础的亚硝基颜色评价设计，评作研究特性进行分类及评价。
总之，体外血管生成实验通过基底涂层、种植细胞、钙化、分析
细胞学成分和采用透析法进行血管形成分析等步骤，能够固定细胞、
探索血管生成的相关分子机制，从而提供理论支持和临床应用价值。
血管生成机制血管生成是一个复杂的生物学过程，它涉及到多种细胞、分子和信号通路的相互作用。
这一过程在胚胎发育、伤口愈合、组织修复以及多种疾病（包括癌症）的病理过程中都扮演着至关重要的角色。
本文将深入探讨血管生成的机制，从分子层面到细胞行为，再到整个生物体的宏观表现，力求为读者提供一个全面而深入的理解。
一、血管生成的基本概念血管生成（Angiogenesis），指的是从已有的血管中生长出新的血管网络的过程。
这一过程与血管发生（Vasculogenesis）不同，后者是指从原始的间充质细胞中形成原始血管网络的过程。
在成年生物体中，血管生成主要发生在伤口愈合、组织修复和某些病理条件下，如肿瘤的生长和转移。
二、血管生成的分子机制1. 血管内皮生长因子（VEGF）家族VEGF家族在血管生成过程中发挥着核心作用。
这些生长因子能够促进血管内皮细胞的增殖、迁移和存活，从而推动新血管的形成。
VEGF的表达受到多种因素的调控，包括缺氧、生长因子、细胞因子和激素等。
2. 血管生成素（Angiopoietin）与Tie受体血管生成素通过与Tie受体（Tie1和Tie2）结合，在血管生成过程中发挥重要作用。
Ang1主要促进血管的稳定和成熟，而Ang2则在血管重塑和出芽过程中发挥作用。
Tie2受体主要表达于血管内皮细胞，是Ang1和Ang2的主要作用靶点。
3. 其他信号分子除了VEGF和血管生成素外，还有许多其他信号分子参与血管生成过程，如血小板衍生生长因子（PDGF）、转化生长因子β（TGF-β）、成纤维细胞生长因子（FGF）等。
这些信号分子通过复杂的信号转导网络，共同调控血管内皮细胞的增殖、迁移和分化。
三、血管生成的细胞机制1. 血管内皮细胞的增殖和迁移在血管生成过程中，血管内皮细胞受到生长因子等信号分子的刺激，发生增殖和迁移。
这些细胞通过形成细胞间连接和基质降解等方式，从原有的血管中出芽生长，逐渐形成新的血管网络。
2. 周细胞的招募和分化周细胞（Pericyte）是包裹在血管内皮细胞外的一层细胞，对于维持血管的稳定性和功能至关重要。
易必迪ibidi μ-Slide Angiogenesis
体外血管生成实验
产品特点：
ibidi血管生成系列产品，包括μ-Slide Angiogenesis和μ-Plate Angiogenesis 96 well，是ibidi 公司根据血管生成实验的要求的改进型设计。
它较之传统的血管生成实验，有以下优点：
1、节省基质凝胶--Gel matrix（自行准备），比传统96孔板实验节省9/10（传统实验用量100ul，ibidi血管生成板—ibidi μ-Slide Angiogenesis 用量10ul）；
2、特殊的双层孔洞设计，可形成厚度均匀（0.8mm）的平整Gel matrix表面，使细胞落于同一层物镜对焦平面，细胞形态更易观察；
3、紧密的上盖设计，有效的减缓液体蒸发；
4、适用多通道微量分注器；
注：配合ibidi 加热与孵育系统，可以进行清晰、长期的活细胞显微拍摄。
ibidi “Well-in-a-Well” 和普通标准孔的对比：
订购信息：
产品规格: µ-Plate Angiogenesis 96 well 1. Planar air-liquid interface:
good phase contrast all over the
observation area 2. Planar gel surface:
all cells are in one optical plan
V olume of Matrigel: 10 µl
Standard well
1. Meniscus on air-liquid interface:
poor phase contrast in most of the observation area
2. Mensicus on the gel surface: not
possible to focus on all cells simultaneously
V olume of Matrigel: 100 µl
技术特征:
1. 标准的玻片规格
2. 紧密的结合盖可以减少蒸发
3. 4mm内孔在5mm外孔里的设计
4. 均匀的厚度为0.8mm的胶层
5. 细胞生长均匀
6. 染色和固定兼容性好
7. 优良的光学显微特性
8. 兼容多通道分注器
9. 生物相容性的塑料材料制成的——无胶水，无泄漏
10. 适合各种类型的胶，例如；Matrigel™, 胶原蛋白, and 琼脂糖*
11. 同样适合96孔板：µ-Plate Angiogenesis 96 well
*Matrigel不是产品的一部分
产品介绍：
1.样品准备/Sample Preparation
「ibidi血管生成板」的应用非常广泛
1
2
4
2.显微成像/Microscopy
可配合ibidi加热&孵育系统进行长时间的显微摄影。
ibidi加热&孵育系统为您提供稳定的CO2，温度和湿度条件。
3.成像分析/Image Analysis
显微镜用于评价血管形成的过程。
根据您的兴趣，不仅可以使用显微视频拍摄（持续的影像），还可以定点进行成像观察（例如：6h 和12h 后）。
人脐静脉内皮细胞在基质凝胶上培育12h 后的「ibidi_易必迪血管
生成板」一个孔中的图像 人脐静脉内皮细胞的特征图，
用Calcein 染色
4. 定量和统计分析/Quantitative and Statistical Analysis 从样品制备到图像分析只需要四步。
数据分析
小管形成成像分析是血管生成的关键步骤。
Wimasis ，ibidi 提供高品质成像分析的认证合作伙伴，已经开发出分析解决方案Wim Tube 用于细胞神经网络的生成的定量评价。
首先，使用ibidi 血管生成板进行你的小管形成实验和显微图像的获得。
然后，只需要上传图片到图像分析平台并通过邮件接收您的分析结果。
分析数据包括：
小管长度，数量和平均值 细胞覆盖面积
环状结构的数量，区域和周长 分叉点的数量。
