乳糖牛肉膏蛋白胨培养基的制备与高压蒸汽灭菌

实验五牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；二实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。

试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等三实验原理：牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。

高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。

待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。

此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。

四实验步骤：1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备（1）称量准确称取各种成分。

一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放称量纸上称量，然后连同称量纸一起放入烧杯中。

（2）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，加热搅拌全溶后稍放冷。

（4）调pH值精密pH试纸测定其pH值，并用NaOH调至所需pH值（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。

注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。

如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。

（6）包扎试管扎成捆。

纸上表明培养基的名称、配制日期等。

（7）灭菌培养基用0.1Mpa高压蒸汽灭菌15~20min，五注意事项1.要严格按配方配制。

2.调pH不要过头。

3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。

配方：牛肉膏：1.5g 蛋白胨5.0g 氯化钠2.5g水500mL 琼脂 7.5g pH 7.2。

一、实验目的1. 了解细菌人工培养的基本原理和操作步骤。

2. 掌握培养基的制备、灭菌和接种方法。

3. 观察细菌在人工培养条件下的生长情况，分析影响细菌生长的因素。

二、实验原理细菌人工培养是指利用人工合成的培养基，为细菌提供生长所需的营养物质，使其在人工控制的环境中繁殖。

培养基通常含有碳源、氮源、无机盐、维生素和水等营养成分，以满足细菌的生长需求。

三、实验材料1. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖培养基、乳糖培养基等。

2. 灭菌器：高压蒸汽灭菌器、紫外线消毒灯等。

3. 接种工具：接种环、接种针、镊子等。

4. 实验仪器：培养皿、恒温培养箱、显微镜等。

5. 实验试剂：无菌水、酒精、盐酸、酚红指示剂等。

四、实验步骤1. 培养基制备（1）称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、乳糖等原料，按照比例加入去离子水，搅拌均匀。

（2）调节pH值至中性或微碱性。

（3）加热煮沸，持续30分钟，去除多余的水分。

（4）待培养基冷却至60℃左右，加入酚红指示剂，观察颜色变化。

（5）分装至无菌培养皿中，每皿10ml。

2. 培养基灭菌将培养皿放入高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌30分钟。

3. 接种（1）无菌操作，将接种环在火焰上灼烧，待冷却后，挑取适量细菌至培养皿中。

（2）用接种环均匀涂布于培养基表面。

4. 培养与观察将接种后的培养皿放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。

（1）观察细菌的生长情况，包括菌落形态、颜色、大小等。

（2）用显微镜观察细菌的形态。

5. 结果分析根据实验结果，分析影响细菌生长的因素，如培养基成分、温度、pH值等。

五、实验结果1. 菌落形态：实验中发现，不同细菌的菌落形态存在差异，如金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，表面光滑；大肠杆菌菌落呈粉红色，表面粗糙。

2. 菌落大小：实验中发现，不同细菌的菌落大小存在差异，如金黄色葡萄球菌菌落较大，直径可达1-2mm；大肠杆菌菌落较小，直径约为0.5-1mm。

3. 菌落颜色：实验中发现，不同细菌的菌落颜色存在差异，如金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色；大肠杆菌菌落呈粉红色。

无菌技术实验报告实验结果实验目的：本实验旨在通过无菌技术的操作，培养无菌条件下的微生物，以验证无菌技术的重要性和有效性，并掌握无菌操作的基本技能。

实验材料：1. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基2. 灭菌器材：高压蒸汽灭菌锅、酒精灯、接种环3. 无菌器材：无菌培养皿、无菌移液枪、无菌手套4. 微生物：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌实验方法：1. 培养基的制备与灭菌：按照标准配方配制牛肉膏蛋白胨培养基，使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。

2. 无菌操作环境的准备：使用酒精灯火焰消毒工作台，确保操作环境的无菌状态。

3. 接种：在无菌条件下，使用无菌移液枪将待测微生物接种到培养基中。

4. 培养：将接种后的培养皿置于恒温培养箱中，设定适宜的温度进行培养。

5. 观察与记录：定期观察培养皿中微生物的生长情况，并记录数据。

实验结果：1. 培养基灭菌后，未发现任何微生物生长，证明培养基灭菌彻底。

2. 在无菌操作条件下，接种后的培养皿中，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均表现出良好的生长特性，菌落形态和数量均符合预期。

3. 观察到大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、半透明，金黄色葡萄球菌菌落呈圆形、表面粗糙、黄色。

4. 通过对照组（未进行无菌操作的培养皿）与实验组的比较，发现对照组中出现了多种非目标微生物的污染，而实验组则未出现污染现象。

结论：通过本次无菌技术实验，验证了无菌技术在微生物培养中的重要性。

实验结果表明，在严格的无菌操作条件下，可以有效避免微生物培养过程中的污染，确保实验结果的准确性。

同时，实验也加深了对无菌操作技能的理解和掌握，为今后的微生物学研究打下了坚实的基础。

建议：1. 在进行无菌操作时，应严格遵守无菌操作规程，确保操作环境的无菌状态。

2. 定期对实验器材进行灭菌处理，以避免因器材污染导致的实验误差。

3. 在实验过程中，应详细记录实验条件和观察结果，以便对实验结果进行准确的分析和评估。

牛肉膏蛋白胨培养基的制备一、目的要求（1）明确培养基的配制原理。

（2）通过对培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。

二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用广泛和最普通的细菌基础培养基，又称普通培养基。

它含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供微生物生长繁殖之用。

基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。

其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCI提提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量的琼脂作为凝固剂。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至碱性，以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3.0gNaCI 5.og蛋白胨10.0g水1000mlpH 7.4～7.6三、操作器材（1）溶液与试剂牛肉膏，蛋白胨，NaCI,琼脂，1mol/LNaOH,1mol/LHCI。

（2）仪器及其他用具试管，锥形瓶，烧杯，量筒，玻璃棒培养基分装器，，天平，高压蒸汽灭菌器，PH试纸，棉花，牛皮纸，麻绳，纱布等。

四、操作步骤1、称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCI放入烧杯中。

2、融化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀。

然后加热使其溶解。

各试剂完全溶解后，补充水到所需的总体积。

配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。

3、调pH用试纸测培养基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/LNaOH,边滴边搅拌，并随时用pH试纸测其pH,直至pH达7.6。

反之，用1mol/LHCI进行调节。

4、分装和加塞将配制的培养基分装入试管内，在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。

5、包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一根麻绳扎好。

用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。

6、灭菌将上述培养基以1210C,20min,0.103MPa高压蒸汽灭菌。

实验一牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一、目的要求1．明确培养基的配制原理。

2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。

3．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。

4．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。

二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。

其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl 提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。

琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。

琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。

固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl5g 琼脂15—20g 水1000mlpH7.4—7.6三、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH，1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5—9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。

四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。

牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。

也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。

蛋白胨很容易吸潮，在称取时动作要迅速。

另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。

2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。

牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌一、实验目的：1、学习并掌握培养基配制的原理，掌握配制牛肉膏蛋白胨培养基的方法和步骤。

2、学习并了解高压蒸汽灭菌的原理和操作技术。

二、实验原理：（一）微生物分离与纯化1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。

其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。

琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。

琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

三、实验仪器和试剂1、仪器：分析天平；锥形瓶；移液管；高温电炉；容量瓶；烧杯；无菌培养皿；pH试纸；胶头滴管；玻璃试管；酒精灯；高压蒸气锅；玻璃棒；2、试剂：牛肉膏；蛋白胨； NaCl ；琼脂；蒸馏水；四、实验步骤：（一）分离纯化制备试验菌种的菌悬液1、培养基的配置配置牛肉膏蛋白胨的液体培养基，待培养基冷却后进行分装。

将分装完毕后的培养基进行高压蒸汽灭菌；①称量：按试验用微生物培养基配方，逐一称取各种药品放入烧杯中。

液体培养基配方：②溶解：将去蒸馏水加入到上述烧杯中使各种成分溶解，难溶的物质，例如蛋白胨、加热促进其溶解，待全部溶解后，加水补足加热蒸发的水量。

制备固体培养基，加热融化琼脂时要不断的搅拌，避免琼脂糊底烧焦。

③调节pH值；初配好的培养基往往不能符合所需要的pH值，故需用pH试纸检测，并以一定浓度的盐酸溶液和氢氧化钠溶液调节培养基溶液pH值至7—8。

④分装：将调节好pH值的培养基分装于十支试管和两个锥形瓶中(注意防止培养基沾污管口或瓶口，避免浸湿橡皮塞塞引起杂菌污染)。

分装液体培养基时，每支试管装的量为试管高度的1/3～1/2，锥形瓶中各加入250—300ml培养基。

牛肉膏蛋白胨培养基配方
配方：
1.牛肉膏粉：10克
2.蛋白胨：10克
3.氯化钠：5克
4.水：1000毫升
制备过程：
1.将牛肉膏粉、蛋白胨和氯化钠加入烧杯中。

2.加入适量的水，充分搅拌，直到完全溶解。

3.将溶液转移到一个大容量瓶中。

4.加入适量的水，使总体积达到1000毫升。

5.用盖子或气密塞封闭瓶口，避免细菌的污染。

6.将培养基在121摄氏度的高压灭菌器中高压灭菌20分钟。

7.灭菌后，将培养基冷却至室温，并存储在4摄氏度的冰箱中。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种富含营养物质的培养基，适用于广泛的细菌种类。

牛肉膏提供了蛋白质、胆碱和其他有机物质，支持细菌的生长。

蛋白胨是由动物和植物的蛋白质消化得到的营养物质，富含氨基酸，可提供能量和生长因子。

氯化钠提供细菌所需的离子平衡。

制备好的牛肉膏蛋白胨培养基可用于分离和培养广谱细菌。

在培养细菌时，可以向培养基中添加其他适当的抗生素或指示剂来选择特定的细菌
菌种。

此外，还可以向培养基中添加其他营养物质，如血清、糖类、氨基酸等，以增强培养基的适用性，满足特定细菌的生长需求。

总结：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基，它以富含营养的牛肉膏和蛋白胨为基础，提供了细菌所需的能量、氨基酸和生长因子。

配方简单，制备过程相对简单，适用于广泛的细菌菌种的培养。

根据具体的实验需求，可以对配方进行适当的修改和补充，以提高培养基的适用性和选择性。