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实验五牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；二实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。
试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等三实验原理：牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
四实验步骤：1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备（1）称量准确称取各种成分。
一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放称量纸上称量，然后连同称量纸一起放入烧杯中。
（2）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，加热搅拌全溶后稍放冷。
（4）调pH值精密pH试纸测定其pH值，并用NaOH调至所需pH值（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
（6）包扎试管扎成捆。
纸上表明培养基的名称、配制日期等。
（7）灭菌培养基用0.1Mpa高压蒸汽灭菌15~20min，五注意事项1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
配方：牛肉膏：1.5g 蛋白胨5.0g 氯化钠2.5g水500mL 琼脂 7.5g pH 7.2。
一、实验目的1. 了解细菌人工培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握培养基的制备、灭菌和接种方法。
3. 观察细菌在人工培养条件下的生长情况，分析影响细菌生长的因素。
二、实验原理细菌人工培养是指利用人工合成的培养基，为细菌提供生长所需的营养物质，使其在人工控制的环境中繁殖。
培养基通常含有碳源、氮源、无机盐、维生素和水等营养成分，以满足细菌的生长需求。
三、实验材料1. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖培养基、乳糖培养基等。
2. 灭菌器：高压蒸汽灭菌器、紫外线消毒灯等。
3. 接种工具：接种环、接种针、镊子等。
4. 实验仪器：培养皿、恒温培养箱、显微镜等。
5. 实验试剂：无菌水、酒精、盐酸、酚红指示剂等。
四、实验步骤1. 培养基制备（1）称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、乳糖等原料，按照比例加入去离子水，搅拌均匀。
（2）调节pH值至中性或微碱性。
（3）加热煮沸，持续30分钟，去除多余的水分。
（4）待培养基冷却至60℃左右，加入酚红指示剂，观察颜色变化。
（5）分装至无菌培养皿中，每皿10ml。
2. 培养基灭菌将培养皿放入高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌30分钟。
3. 接种（1）无菌操作，将接种环在火焰上灼烧，待冷却后，挑取适量细菌至培养皿中。
（2）用接种环均匀涂布于培养基表面。
4. 培养与观察将接种后的培养皿放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（1）观察细菌的生长情况，包括菌落形态、颜色、大小等。
（2）用显微镜观察细菌的形态。
5. 结果分析根据实验结果，分析影响细菌生长的因素，如培养基成分、温度、pH值等。
五、实验结果1. 菌落形态：实验中发现，不同细菌的菌落形态存在差异，如金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，表面光滑；大肠杆菌菌落呈粉红色，表面粗糙。
2. 菌落大小：实验中发现，不同细菌的菌落大小存在差异，如金黄色葡萄球菌菌落较大，直径可达1-2mm；大肠杆菌菌落较小，直径约为0.5-1mm。
3. 菌落颜色：实验中发现，不同细菌的菌落颜色存在差异，如金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色；大肠杆菌菌落呈粉红色。
无菌技术实验报告实验结果实验目的：本实验旨在通过无菌技术的操作，培养无菌条件下的微生物，以验证无菌技术的重要性和有效性，并掌握无菌操作的基本技能。
实验材料：1. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基2. 灭菌器材：高压蒸汽灭菌锅、酒精灯、接种环3. 无菌器材：无菌培养皿、无菌移液枪、无菌手套4. 微生物：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌实验方法：1. 培养基的制备与灭菌：按照标准配方配制牛肉膏蛋白胨培养基，使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。
2. 无菌操作环境的准备：使用酒精灯火焰消毒工作台，确保操作环境的无菌状态。
3. 接种：在无菌条件下，使用无菌移液枪将待测微生物接种到培养基中。
4. 培养：将接种后的培养皿置于恒温培养箱中，设定适宜的温度进行培养。
5. 观察与记录：定期观察培养皿中微生物的生长情况，并记录数据。
实验结果：1. 培养基灭菌后，未发现任何微生物生长，证明培养基灭菌彻底。
2. 在无菌操作条件下，接种后的培养皿中，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均表现出良好的生长特性，菌落形态和数量均符合预期。
3. 观察到大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、半透明，金黄色葡萄球菌菌落呈圆形、表面粗糙、黄色。
4. 通过对照组（未进行无菌操作的培养皿）与实验组的比较，发现对照组中出现了多种非目标微生物的污染，而实验组则未出现污染现象。
结论：通过本次无菌技术实验，验证了无菌技术在微生物培养中的重要性。
实验结果表明，在严格的无菌操作条件下，可以有效避免微生物培养过程中的污染，确保实验结果的准确性。
同时，实验也加深了对无菌操作技能的理解和掌握，为今后的微生物学研究打下了坚实的基础。
建议：1. 在进行无菌操作时，应严格遵守无菌操作规程，确保操作环境的无菌状态。
2. 定期对实验器材进行灭菌处理，以避免因器材污染导致的实验误差。
3. 在实验过程中，应详细记录实验条件和观察结果，以便对实验结果进行准确的分析和评估。
牛肉膏蛋白胨培养基的制备一、目的要求（1）明确培养基的配制原理。
（2）通过对培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用广泛和最普通的细菌基础培养基，又称普通培养基。
它含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供微生物生长繁殖之用。
基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。
其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCI提提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量的琼脂作为凝固剂。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3.0gNaCI 5.og蛋白胨10.0g水1000mlpH 7.4～7.6三、操作器材（1）溶液与试剂牛肉膏，蛋白胨，NaCI,琼脂，1mol/LNaOH,1mol/LHCI。
（2）仪器及其他用具试管，锥形瓶，烧杯，量筒，玻璃棒培养基分装器，，天平，高压蒸汽灭菌器，PH试纸，棉花，牛皮纸，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1、称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCI放入烧杯中。
2、融化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀。
然后加热使其溶解。
各试剂完全溶解后，补充水到所需的总体积。
配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。
3、调pH用试纸测培养基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/LNaOH,边滴边搅拌，并随时用pH试纸测其pH,直至pH达7.6。
反之，用1mol/LHCI进行调节。
4、分装和加塞将配制的培养基分装入试管内，在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。
5、包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一根麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
6、灭菌将上述培养基以1210C,20min,0.103MPa高压蒸汽灭菌。
实验一牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一、目的要求1．明确培养基的配制原理。
2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
3．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。
4．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl 提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl5g 琼脂15—20g 水1000mlpH7.4—7.6三、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH，1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5—9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很容易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌一、实验目的：1、学习并掌握培养基配制的原理，掌握配制牛肉膏蛋白胨培养基的方法和步骤。
2、学习并了解高压蒸汽灭菌的原理和操作技术。
二、实验原理：（一）微生物分离与纯化1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
三、实验仪器和试剂1、仪器：分析天平；锥形瓶；移液管；高温电炉；容量瓶；烧杯；无菌培养皿；pH试纸；胶头滴管；玻璃试管；酒精灯；高压蒸气锅；玻璃棒；2、试剂：牛肉膏；蛋白胨； NaCl ；琼脂；蒸馏水；四、实验步骤：（一）分离纯化制备试验菌种的菌悬液1、培养基的配置配置牛肉膏蛋白胨的液体培养基，待培养基冷却后进行分装。
将分装完毕后的培养基进行高压蒸汽灭菌；①称量：按试验用微生物培养基配方，逐一称取各种药品放入烧杯中。
液体培养基配方：②溶解：将去蒸馏水加入到上述烧杯中使各种成分溶解，难溶的物质，例如蛋白胨、加热促进其溶解，待全部溶解后，加水补足加热蒸发的水量。
制备固体培养基，加热融化琼脂时要不断的搅拌，避免琼脂糊底烧焦。
③调节pH值；初配好的培养基往往不能符合所需要的pH值，故需用pH试纸检测，并以一定浓度的盐酸溶液和氢氧化钠溶液调节培养基溶液pH值至7—8。
④分装：将调节好pH值的培养基分装于十支试管和两个锥形瓶中(注意防止培养基沾污管口或瓶口，避免浸湿橡皮塞塞引起杂菌污染)。
分装液体培养基时，每支试管装的量为试管高度的1/3～1/2，锥形瓶中各加入250—300ml培养基。
牛肉膏蛋白胨培养基配方
配方：
1.牛肉膏粉：10克
2.蛋白胨：10克
3.氯化钠：5克
4.水：1000毫升
制备过程：
1.将牛肉膏粉、蛋白胨和氯化钠加入烧杯中。
2.加入适量的水，充分搅拌，直到完全溶解。
3.将溶液转移到一个大容量瓶中。
4.加入适量的水，使总体积达到1000毫升。
5.用盖子或气密塞封闭瓶口，避免细菌的污染。
6.将培养基在121摄氏度的高压灭菌器中高压灭菌20分钟。
7.灭菌后，将培养基冷却至室温，并存储在4摄氏度的冰箱中。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种富含营养物质的培养基，适用于广泛的细菌种类。
牛肉膏提供了蛋白质、胆碱和其他有机物质，支持细菌的生长。
蛋白胨是由动物和植物的蛋白质消化得到的营养物质，富含氨基酸，可提供能量和生长因子。
氯化钠提供细菌所需的离子平衡。
制备好的牛肉膏蛋白胨培养基可用于分离和培养广谱细菌。
在培养细菌时，可以向培养基中添加其他适当的抗生素或指示剂来选择特定的细菌
菌种。
此外，还可以向培养基中添加其他营养物质，如血清、糖类、氨基酸等，以增强培养基的适用性，满足特定细菌的生长需求。
总结：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基，它以富含营养的牛肉膏和蛋白胨为基础，提供了细菌所需的能量、氨基酸和生长因子。
配方简单，制备过程相对简单，适用于广泛的细菌菌种的培养。
根据具体的实验需求，可以对配方进行适当的修改和补充，以提高培养基的适用性和选择性。
实验名称：灭菌效率研究实验日期：2023年11月15日实验地点：微生物实验室实验目的：1. 探究不同灭菌方法的效率。
2. 评估高压蒸汽灭菌、紫外线灭菌和化学消毒剂灭菌在微生物灭活方面的效果。
3. 确定最佳灭菌方法适用于不同类型的微生物和实验需求。
实验材料：- 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基- 灭菌方法：高压蒸汽灭菌、紫外线灭菌、化学消毒剂灭菌- 仪器：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灯、消毒剂、移液器、培养皿、显微镜等- 微生物样本：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌实验方法：1. 高压蒸汽灭菌：将已制备好的培养基分装至灭菌瓶中，使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌参数为121°C，20分钟。
2. 紫外线灭菌：将待灭菌的物品放置在紫外线灯下，距离30厘米，照射时间为30分钟。
3. 化学消毒剂灭菌：将培养基浸泡在含有有效氯浓度为500mg/L的消毒剂中，浸泡时间为30分钟。
4. 灭菌效果检测：灭菌后，取适量灭菌后的培养基进行接种培养，观察细菌生长情况。
实验步骤：1. 培养基制备：按照实验要求制备牛肉膏蛋白胨培养基。
2. 灭菌：分别采用高压蒸汽灭菌、紫外线灭菌和化学消毒剂灭菌三种方法对培养基进行灭菌。
3. 灭菌效果检测：将灭菌后的培养基进行接种培养，观察细菌生长情况，以评估灭菌效果。
4. 数据记录与分析：记录不同灭菌方法下的细菌生长情况，分析灭菌效果。
实验结果：- 高压蒸汽灭菌：灭菌后的培养基中无细菌生长，灭菌效果良好。
- 紫外线灭菌：灭菌后的培养基中大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长良好，白色念珠菌生长受抑制。
- 化学消毒剂灭菌：灭菌后的培养基中大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长良好，白色念珠菌生长受抑制。
实验分析：1. 高压蒸汽灭菌是一种高效、可靠的灭菌方法，适用于各种微生物的灭活。
2. 紫外线灭菌对细菌有一定杀灭作用，但对白色念珠菌的杀灭效果较差。
3. 化学消毒剂灭菌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有一定杀灭作用，但对白色念珠菌的杀灭效果较差。
简述牛肉膏蛋白胨培养基制备的基本流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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培养基的制备与灭菌实验报告详细集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）N源：包括无机氮和有机氮。
（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。
微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
一、实验目的1. 掌握培养基的配制原理和方法。
2. 了解培养基在微生物培养中的应用。
3. 熟悉灭菌和消毒的方法及注意事项。
二、实验原理培养基是微生物生长繁殖所必需的营养物质混合物。
根据微生物种类和实验目的，培养基的配方和种类有所不同。
本实验以牛肉膏蛋白胨培养基为例，介绍培养基的配制、灭菌和消毒方法。
三、实验材料与试剂1. 材料：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、pH试纸等。
2. 试剂：1M HCl、1M NaOH、无菌水等。
四、实验步骤1. 培养基配制（1）称取牛肉膏10g、蛋白胨10g、氯化钠5g，加入1000ml蒸馏水；（2）加入琼脂15g，搅拌均匀；（3）将混合液煮沸，溶解琼脂；（4）用pH试纸检测培养基pH值，调节至7.0-7.2；（5）将培养基冷却至50-60℃，过滤去除杂质；（6）分装至灭菌试管中，每管10ml。
2. 灭菌（1）将装有培养基的试管放入高压蒸汽灭菌锅中；（2）关闭锅盖，加热至压力达到0.1MPa，维持15-20分钟；（3）待压力降至0时，打开锅盖，取出灭菌试管。
3. 消毒（1）将灭菌后的试管置于超净工作台；（2）用无菌镊子取出试管，放入无菌培养皿中；（3）用酒精灯对试管进行消毒；（4）将培养皿放入培养箱中，待培养基凝固。
五、实验结果与分析1. 培养基配制：按照实验步骤，成功配制了牛肉膏蛋白胨培养基。
2. 灭菌：高压蒸汽灭菌法能够有效杀死培养基中的微生物，保证培养基的无菌状态。
3. 消毒：酒精灯消毒可以进一步降低培养基的污染风险。
六、实验讨论1. 在培养基配制过程中，应注意控制pH值，以保证微生物的正常生长。
2. 灭菌和消毒是保证培养基无菌的关键环节，应严格按照操作规程进行。
3. 实验过程中，应注重无菌操作，避免外界微生物的污染。
七、实验结论通过本次实验，掌握了培养基的配制、灭菌和消毒方法，为微生物培养提供了基础条件。
在实验过程中，应严格遵守无菌操作规程，确保实验结果的准确性。
实验二培养基的配制与湿热灭菌一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2.学习常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法。
3.进一步熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。
二、实验材料1.药品及试剂： NaOH，琼脂，牛肉膏，蛋白胨，NaCl2.仪器及其它：试管、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(5、5-9、0) 、牛皮纸、记号笔、麻绳、培养皿、涂布棒、枪头、玻璃珠三、实验内容和方法（一）实验内容配制牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、水1000ml、琼脂 15-25g、 pH 7.0-7.2 （二）方法步骤1.称量按培养基配方比例依次准确地称取药品，混匀后加入琼脂。
2.熔化在沸水浴锅中加热熔化。
3.调pH 用1mol/L NaOH调pH至7.0-7.2。
4.分装将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，注意管口不要沾上培养基。
液体分装装量不超过试管的1/4。
5.加棉塞培养基分装完毕后，在试管口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能，然后包扎一层牛皮纸。
试管应先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。
6.灭菌将培养基放入高压蒸汽灭菌锅内，121℃,20min湿热灭菌。
7.摆斜面灭菌完毕，将试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞搁在玻棒（或木棍）上，搁成斜面，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。
冷却后备用。
8、倒平板将消后培养基冷却到55-56℃，倒入无菌的培养皿中（无菌操作），平置于桌面上，冷却后即为平板。
9.检验灭菌效果将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48h，以检查灭菌是否彻底。
四、思考题1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养菌是无菌的？2.加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？3.管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？为什么？。
高压蒸汽灭菌实验实验目的：了解高压蒸汽灭菌的基本原理、应用范围及其注意事项，熟练掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。
实验原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加热灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
实验材料：牛肉膏蛋白胨培养基，培养基，试管，三角瓶，移液管。
实验仪器：高压蒸汽灭菌锅。
实验步骤：1.加水：将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水使水面与三角搁架相平为宜。
2.装锅：放回内层锅，并装入待灭菌物品。
3.加盖：并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。
再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
4.加热、排气：打开放气阀，同时接通电源，进行加热，待锅内水沸腾并有大量水蒸气自放气阀冒出时，维持3-5min以排除锅内的冷空气。
待冷空气完全排尽后，关上放气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。
5.保温保压：当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。
6.出锅：灭菌所需的时间到后，关闭电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表降至”0”时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
7.保养：灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，以保持内壁及内胆干燥，盖好锅盖。
8.无菌检查：将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h，经检查若无菌生长，即可待用。
注意事项：1.切勿忘记加水，同时加水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。
2. 灭菌完后，锅内仍有余温，注意防烫；3.在使用高压蒸汽灭菌锅时, 灭菌锅内冷空气的排除与否极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度；4.压力一定要降到”0”时，才能打开排气阀，开盖取物。
