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第2课时实验操作及实验结果[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。
2.掌握大肠杆菌的纯化方法。
3.了解菌种保藏所用的方法。
知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。
(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□02火焰。
(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻盖上□03皿盖。
(4)待平板冷却凝固后，将平板□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1]下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B 正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。
[答案] A知识拓展(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。
(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
一、实验目的1. 了解牛肉膏蛋白胨培养基的成分和制备方法。
2. 掌握牛肉膏蛋白胨培养基的灭菌和接种技术。
3. 学会观察和记录实验结果。
二、实验原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌基础培养基，主要由牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂等成分组成。
牛肉膏提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨提供氮源和维生素，氯化钠提供无机盐，琼脂作为凝固剂。
在无菌条件下，将牛肉膏蛋白胨培养基倒入平板，接种细菌，培养一段时间后，观察细菌的生长情况。
三、实验材料与仪器1. 材料：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、细菌菌种、无菌平板、无菌移液器、酒精灯、火焰灯、高压蒸汽灭菌锅、三角瓶、烧杯、玻璃棒、电子天平、量筒、试管等。
2. 仪器：生物显微镜、细菌培养箱、电子天平、酒精灯、火焰灯、高压蒸汽灭菌锅、三角瓶、烧杯、玻璃棒、无菌平板、无菌移液器等。
四、实验步骤1. 培养基的制备（1）称取牛肉膏、蛋白胨、氯化钠，按照比例溶解于蒸馏水中。
（2）加入琼脂，搅拌均匀。
（3）将混合液煮沸，不断搅拌，防止琼脂凝固。
（4）待溶液冷却至50-60℃，倒入无菌平板中。
（5）待培养基凝固后，进行高压蒸汽灭菌。
2. 灭菌（1）将无菌平板放入高压蒸汽灭菌锅内。
（2）调节压力至100KPa，温度121℃，灭菌20分钟。
（3）关闭电源，待压力降至0KPa后，取出无菌平板。
3. 接种（1）将细菌菌种接种到无菌平板上。
（2）用无菌移液器吸取适量菌液，滴加到平板中央。
（3）用无菌玻璃棒轻轻涂布，使菌液均匀分布在平板上。
4. 培养（1）将接种后的平板放入细菌培养箱中。
（2）设置培养温度，一般细菌培养温度为37℃。
（3）培养时间为24-48小时。
5. 观察与记录（1）观察平板上细菌的生长情况，包括菌落大小、形状、颜色等。
（2）记录实验结果，包括菌落数量、生长速度等。
五、实验结果与分析1. 实验结果通过观察，发现接种的细菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好，形成了菌落。
微生物模块一、微生物的实验室：1.培养基(1)概念：人们按照微生物对的不同需求,配制出供其的营养基质。
(2)营养组成：一般都含有和。
此外，还需要满足微生物生长对、氧气以及的要求。
（3）分类培养基(含凝固剂); 培养基(不含凝固剂)（凝固剂是 : 中提取到物质，在下凝固，下熔化）2.无菌技术获得纯净培养物的关键：3.大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤：计算→称量→→→→问题：①.培养基灭菌后，需要冷却到左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？②.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？③.为什么将平板倒置？(2)纯化大肠杆菌的方法①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到的肉眼可见的，即可获得较纯的菌种。
②纯化大肠杆菌的关键步骤：，接种时要在旁，原因是。
③常用的微生物接种方法有两种a. 法：是通过在琼脂固体培养基表面的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
b. 法：是将菌液进行一系列的，然后将的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
问题：①在这两种接种方法中，计数时只能选哪种接种方法？②两种接种方法的目的是：问题①.划线时为什么要从上一次划线的末端开始？②.划线时不能划破培养基，如果划破了会怎样？③.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？④.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？(3)菌种的保存方法①对于频繁使用的菌种，可以采用的方法，接种在试管的培养基上，将试管放入保藏②对于需要长期保存的菌种，可以采用的方法。
4.实验室中筛选微生物的原理是。
二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.实验原理：(1)能合成的细菌才能分解尿素(2)配制以为唯一的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌，还要涂布一个牛肉膏蛋白胨培养基，以此说明。
⑶可以用加了的培养基进行鉴别，培养基变2.实验流程：土壤取样→配制土壤溶液和制备培养基→→涂布平板与培养→菌落计数3.统计菌落数目的方法方法一：（活菌计数法）；至少要涂布个平板，最后求取值，还要设置一个平板作为对照，以说明一般选择菌落数在的平板进行计数。
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化
，必须原创
牛肉膏蛋白胨（Bacto-Proteose-Peptone，由蛋白质和多种水解物组成）培养基是分
离和纯化微生物的优质培养基，它可为微生物提供养分、气味和增强细胞代谢的稳定性，
有利于微生物的成长和繁殖，因此被广泛应用于细菌的鉴别、分离、纯化研究。
本实验介
绍牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。
1、配制牛肉膏：将牛肉的去油干片以40倍的水为底料，煮沸约30min，冷却至室温
后用离心设备至0.75—1％的浊度；
2、添加蛋白质：分别将卵白袋、硝酸蛋白、胱蛋白分别以大约6:2:2的比例添加到
牛肉膏液中，再将二次离心液收集并稀释成1:200；
3、添加添加剂：用 0.1N 的 NaOH 调盐，加入 0.2 ％的 Na2CO3、1.0 ％的 K2HPO4 和 0.007 ％的 MnCl2，使液体 pH 值为7.2 ± 0.2。
二、微生物的分离与纯化：
1、微生物的分离：将牛肉膏蛋白胨作为培养介质，以碗杯离心法将培养基放在26-28℃的恒温器中培养24-48h；
2、筛选：用滤筛得到培养液粒子，将其留在高性能液相色谱仪（HPLC）上；
3、纯化：用不同浓度的氯化钾，盐酸混合溶液或二乙醇胺溶液去除悬浮粒子，再用
离子交换树脂法去除其他污染物，萃取物可用电泳分离成单体；
4、鉴定：根据抗原或抗体鉴定微生物，将其分类编号。
三、结论：
经过牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化实验，成功地实现了牛肉膏蛋
白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。
通过该实验，我们可以进一步学习、提高分离
微生物的能力，为临床抗感染药物的研究提供有力的支持。
实验法二牛肉膏蛋白胨培养基的制备
实验目的：
本实验的目的是制备牛肉膏蛋白胨培养基，以备后续在培养菌种时使用。
实验原理：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种富含氮源和碳源的培养基，可以用来培养多种微生物，包括细菌、真菌和酵母菌等。
其主要成分为牛肉膏、蛋白胨和氧化还原指示剂。
牛肉膏是从牛肉中提取的肉汁，是一种富含植物蛋白、维生素和微量元素的营养液，蛋白胨是酶解的蛋白质，是一种常用的氮源。
氧化还原指示剂可以用来检测微生物的代谢活动，当微生物代谢产生酸性代谢产物时，其颜色将变为黄色。
实验步骤：
1.准备牛肉膏蛋白胨培养基的成分：牛肉膏、蛋白胨和氧化还原指示剂；
2. 将牛肉膏和蛋白胨分别加入到约800ml的去离子水中，加热至融化，然后煮沸5分钟，搅拌至完全溶解；
3. 将氧化还原指示剂加入到煮沸后的液体中，并用酒精灯进行灭菌处理，使溶液冷却至室温；
4. 将培养基装入无菌烧杯中，经过高温高压灭菌处理，即可得到无菌牛肉膏蛋白胨培养基。
注意事项：
1.在加热牛肉膏和蛋白胨的过程中，需不断搅拌，以防止附着在底部的物质烧焦。
2. 培养基的所有成分和制备过程均需无菌操作，以保证培养基的纯度和无菌性。
3. 每次使用前应检查培养基是否有明显异味或异色，如有异常情况则应弃用。
4. 操作过程中要注意安全，避免受到高温、高压、灭菌等因素的伤害。
实验结果：
制备牛肉膏蛋白胨培养基后，应详细记录制备过程中的操作步骤、配方和注意事项，以备后续使用时参考。
制备好的培养基应无明显异味或异色，并保持无菌状态，以保证培养菌种的纯度和生长。
实验一牛肉膏蛋白胨培养基的制备及高压蒸汽灭菌一、目的要求1．明确培养基的配制原理。
2．通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
3．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。
4．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl 提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl5g 琼脂15—20g 水1000mlpH7.4—7.6三、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH，1mol/L HCl；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5—9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1．称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
蛋白胨很容易吸潮，在称取时动作要迅速。
另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
牛肉膏蛋白胨培养基的制备一、目的要求（1）明确培养基的配制原理。
（2）通过对培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用广泛和最普通的细菌基础培养基，又称普通培养基。
它含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供微生物生长繁殖之用。
基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。
其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCI提提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量的琼脂作为凝固剂。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至碱性，以利于细菌的生长繁殖。
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3.0gNaCI 5.og蛋白胨10.0g水1000mlpH 7.4～7.6三、操作器材（1）溶液与试剂牛肉膏，蛋白胨，NaCI,琼脂，1mol/LNaOH,1mol/LHCI。
（2）仪器及其他用具试管，锥形瓶，烧杯，量筒，玻璃棒培养基分装器，，天平，高压蒸汽灭菌器，PH试纸，棉花，牛皮纸，麻绳，纱布等。
四、操作步骤1、称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCI放入烧杯中。
2、融化在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀。
然后加热使其溶解。
各试剂完全溶解后，补充水到所需的总体积。
配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。
3、调pH用试纸测培养基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/LNaOH,边滴边搅拌，并随时用pH试纸测其pH,直至pH达7.6。
反之，用1mol/LHCI进行调节。
4、分装和加塞将配制的培养基分装入试管内，在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。
5、包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一根麻绳扎好。
用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
6、灭菌将上述培养基以1210C,20min,0.103MPa高压蒸汽灭菌。
第2课时实验操作及实验结果[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。
2.掌握大肠杆菌的纯化方法。
3.了解菌种保藏所用的方法。
知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。
02火焰。
(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻03皿盖。
盖上□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。
(4)待平板冷却凝固后，将平板□1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1] 下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是( )A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。
答案 A知识拓展(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。
(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
实验操作及实验结果[基础对点]知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.在培养基的配制过程中，具体有如下步骤，其正确顺序为( )①溶化②调pH ③加棉塞④包扎⑤分装⑥称量A．①②⑥⑤③④ B．⑥①②⑤③④C．⑥①②⑤④③ D．①②⑤④⑥③答案 B解析上述步骤中，培养基的配制顺序为称量→溶化→调p H→分装→加棉塞→包扎，B 正确。
2．下列有关倒平板操作的叙述，错误的是( )A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置答案 C解析整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵，因此灭过菌的培养皿应放在火焰旁，A正确；打开的锥形瓶瓶口应迅速通过火焰，B正确；培养皿应打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不能将培养皿盖完全打开，C错误；平板冷却凝固后需要倒过来放置，D正确。
3．下列关于制备牛肉膏蛋白胨培养基的叙述，错误的是( )A．培养基应先调pH再进行灭菌B．培养基应先灭菌再分装到培养皿C．熔化琼脂时要不断用玻璃棒搅拌D．使用高压蒸汽灭菌锅时直接将灭菌锅密封加热答案 D解析把灭菌锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排出后，将锅密闭，继续加热使锅内气压逐步上升。
知识点二纯化大肠杆菌4.下列有关平板划线接种法的操作错误的是( )A．将接种环放在火焰上灼烧B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液C．沾取菌液和划线要在火焰旁进行D．接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划线相连答案 D解析为了避免杂菌污染，沾取菌液和划线要在火焰旁进行，C正确；每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，A正确；灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高，杀死菌种，B正确；在平板划线时不要将最后一区的划线与第一区相连，D错误。
5．如图为纯化大肠杆菌的一个操作环节，下列相关叙述中，错误的是( )A．该操作步骤是接种，方法是平板划线法B．除第一次划线外，以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端C．图中细菌密度最小的是5处D．每次划线前要用酒精灯灼烧接种环，接着进行下次划线答案 D解析每次划线前都要灼烧接种环灭菌，然后等其冷却后进行下次划线，D错误。
牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌一、实验目的：1、学习并掌握培养基配制的原理，掌握配制牛肉膏蛋白胨培养基的方法和步骤。
2、学习并了解高压蒸汽灭菌的原理和操作技术。
二、实验原理：（一）微生物分离与纯化1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
三、实验仪器和试剂1、仪器：分析天平；锥形瓶；移液管；高温电炉；容量瓶；烧杯；无菌培养皿；pH试纸；胶头滴管；玻璃试管；酒精灯；高压蒸气锅；玻璃棒；2、试剂：牛肉膏；蛋白胨；NaCl ；琼脂；蒸馏水；四、实验步骤：（一）分离纯化制备试验菌种的菌悬液1、培养基的配置配置牛肉膏蛋白胨的液体培养基，待培养基冷却后进行分装。
将分装完毕后的培养基进行高压蒸汽灭菌；①称量：按试验用微生物培养基配方，逐一称取各种药品放入烧杯中。
液体培养基配方：②溶解：将去蒸馏水加入到上述烧杯中使各种成分溶解，难溶的物质，例如蛋白胨、加热促进其溶解，待全部溶解后，加水补足加热蒸发的水量。
制备固体培养基，加热融化琼脂时要不断的搅拌，避免琼脂糊底烧焦。
③调节pH值；初配好的培养基往往不能符合所需要的pH值，故需用pH试纸检测，并以一定浓度的盐酸溶液和氢氧化钠溶液调节培养基溶液pH值至7—8。
④分装：将调节好pH值的培养基分装于十支试管和两个锥形瓶中(注意防止培养基沾污管口或瓶口，避免浸湿橡皮塞塞引起杂菌污染)。
分装液体培养基时，每支试管装的量为试管高度的1/3～1/2，锥形瓶中各加入250—300ml培养基。
第2课时实验操作及实验结果题型一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是()A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板[答案] C[解析]制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。
2．在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关于琼脂的说法错误的是()A．不被所培养的微生物分解利用，对所培养的微生物无毒害作用B．在微生物生长温度范围内保持固体状态C．琼脂凝固点低，利于微生物的生长D．琼脂在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强[答案] C[解析]琼脂不会被微生物利用且对微生物无毒害作用，在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强，A、D正确；琼脂在水中加热至95 ℃时开始熔化，温度降至40 ℃时才开始凝固，微生物生长最适宜的温度范围一般为16～30 ℃，所以在微生物生长温度范围内保持固体状态，B正确；琼脂的凝固点相对于微生物生长的温度较高，一般不是微生物的营养成分，只起固化作用，对微生物的生长不会产生作用，C错误。
3．下列叙述错误的是()A．右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近B．倒平板整个过程应在火焰旁进行C．打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖D．为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置[答案] C[解析]右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近，A正确；为了防止杂菌污染，倒平板整个过程应在火焰旁进行，B正确；操作方法为用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，C错误；为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置，D正确。
4．检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是()A．将未接种的培养基放在实验桌上培养B．将未接种的培养基放在窗台上培养C．将未接种的培养基放在恒温箱中培养D．将已接种的培养基放在恒温箱中培养[答案] C[解析]检验培养基有没有被杂菌污染，可将未接种的培养基放在恒温箱中培养。
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2.掌握大肠杆菌的纯化方法。
一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1．用文字和箭头写出制备流程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
2．倒平板是制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的重要环节，如图为倒平板的操作示意图。
(1)请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。
(2)甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。
(3)丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。
二、纯化大肠杆菌1．接种微生物的方法最常用的有平板划线法和稀释涂布平板法。
2．下图中甲为平板划线法中最重要的环节，乙为操作的结果。
每一次划线后要将接种环灼烧，除第一次划线外，每一次划线的起点是上一次划线的末端，最后一次划线不要和第一区域相连。
3．稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。
只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个的菌落。
三、菌种的保藏 对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏法；对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏法。
判断正误：(1)在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，所用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法( )(2)将培养基从干热灭菌箱内取出立即就可以倒平板( )(3)平板划线法和稀释涂布平板法都要在固体培养基上操作( )[答案] (1)× (2)× (3)√一、培养基的制备1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算：依据牛肉膏蛋白胨培养基配方比例计算配制100 mL 的培养基时，各种成分的用量↓称量：牛肉膏比较黏稠，可用玻璃挑取，称量纸称取，牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖↓溶化：牛肉膏和称量纸＋水――→加热取出称量纸―→加蛋白胨和氯化钠―→加琼脂(注意：不断用玻璃棒搅拌防止糊底而导致烧杯破裂)―→补加蒸馏水至100 mL ↓灭菌⎩⎨⎧（1）培养基：高压蒸汽灭菌（2）培养皿：干热灭菌↓倒平板：待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板2．注意事项(1)用天平称量时，注意放等大的称量纸，防止牛肉膏粘在托盘上。
专题2课题1微生物的实验室培养
一、课题目标
1.知识目标
a.了解有关培养基的基础知识。
b.了解消毒和灭菌方法。
2.能力目标
a.进行无菌技术操作。
b.进行微生物培养。
3.情感目标
形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神。
二、课题重点
无菌技术操作。
三、课题难点
无菌技术操作。
四教学流程
水、碳源、氮源、无机盐
问题2：从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？
C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。
【小结】共同归纳培养基的基本成分和主要来源。
（2）特殊成分和条件
提醒学生培养基还需要满足不同微生物生长对PH、氧气、特殊营养物质的要求：如乳酸杆菌时需要添加维生素，霉菌需要将培养基pH调节为酸性，细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。
（二）无菌技术
讲解：无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
强调无菌操作是培养微生物成功的关键。
1.主要方面
讲解无菌技术主要方面：
（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；
（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；
（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。
2.消毒与灭菌的比较
列表让学生进行比较。
牛肉膏蛋白胨培养基制备实验报告
学习制备牛肉膏蛋白胨培养基的方法，了解牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂等的作用和用途。
实验原理：
牛肉膏：牛肉膏是从生牛肉中提取的富含营养物质的肉汁，富含氨基酸、矿物质和其他生长因子。
蛋白胨：是一种从鸡蛋中提取的高营养物质，富含多种必需氨基酸和维生素。
氯化钠：是必须添加到培养基中以提供细菌和其他细胞所需的盐类和离子。
琼脂：是一种由红藻属海藻制成的胶质，用于固化液态培养基并在固态培养基上生长细胞。
实验材料：
牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、三角瓶、试管等。
实验步骤：
1. 倒入500毫升的去离子水至三角瓶中。
2. 加入5克牛肉膏和5克蛋白胨，用玻璃棒搅拌均匀。
3. 加入5克氯化钠和2克琼脂，再次搅拌均匀。
4. 将三角瓶放入水浴中，加热至琼脂完全溶解。
5. 关闭火源，将溶液冷却至50℃左右。
6. 倒入培养基到试管中，每个试管约5毫升。
7. 放置试管直至琼脂凝固。
实验结果与分析：
制备完成的牛肉膏蛋白胨培养基呈明亮的黄色透明液体，琼脂凝固后成为浅黄色的固态培养基。
该培养基富含多种必需的营养物质，可满足多种细菌和其他微生物生长的需要，可用于多种微生物培养和研究。
实验中需要注意的问题：
1. 避免使用破损的琼脂；
2. 加热时要注意温度的控制；
3. 做好无菌操作，防止细菌和其他微生物的污染。
配置牛肉膏蛋白胨培养基的操作步骤
嘿，朋友们！今天咱就来讲讲怎么配置牛肉膏蛋白胨培养基，这可是个很有趣的事儿呢！
先准备好各种材料，就像厨师做菜前要把食材都备好一样。
你得有牛肉膏，这可是培养基的重要成分，就像菜里的盐，少了它可不行。
还有蛋白胨，那也是宝贝呀，能给微生物提供丰富的营养。
然后就是氯化钠，就像是给培养基加点味道。
再加上琼脂，这琼脂啊，就像是给微生物搭个小房子，让它们能舒舒服服地待着。
接下来，就是动手操作啦！把这些材料按照一定的比例放到水里，就像是调一碗特别的汤。
这可不是随便搅和搅和就行的，得仔细点，不然比例不对，培养基可就不完美啦。
然后，把这锅“汤”放到火上加热，让它们慢慢融合在一起。
看着它们咕嘟咕嘟地冒泡，你是不是觉得很有意思呀？就好像在看着一群小精灵在跳舞。
等它们都融合好了，就可以分装啦。
把这热乎乎的培养基分到一个个小瓶子或者培养皿里，可别洒出来哦，就像给小朋友分糖果一样，要公平公正。
然后把它们盖好盖子，就等着它们冷却凝固啦。
凝固后的培养基，就像是一个个小蛋糕，等待着微生物们来大快朵颐。
你想想，那些小小的微生物在上面快乐地生长，是不是很神奇？
这配置牛肉膏蛋白胨培养基呀，说难也不难，说简单也不简单。
就好像骑自行车，一开始可能会摇摇晃晃，但多练几次就熟练啦。
你只要认真去做，肯定能成功的。
而且当你看到自己配置的培养基培养出了好多微生物，那种成就感，简直没法形容！
所以呀，别害怕，大胆去尝试吧！让我们一起在微生物的世界里遨游，感受科学的魅力！。
微生物的实验室培养(二)基础过关知识点一制备牛肉膏蛋白胨培养基1．以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序正确的是( ) A．计算→称量→倒平板→溶化→灭菌B．计算→称量→溶化→倒平板→灭菌C．计算→称量→溶化→灭菌→倒平板D．计算→称量→灭菌→溶化→倒平板2．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，关于倒平板的具体描述正确的是( )①等培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰④用左手的拇指和食指打开皿盖⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖⑥等待平板冷却 5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上A．①②③④B．④⑤⑥C．③⑤D．①②④⑥3．下列有关倒平板操作错误的是( ) A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置知识点二纯化大肠杆菌4．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。
原因是( ) A．平板上的一个菌落就是一个细菌B．菌落中的细菌数是固定的C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌D．此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同5．能够测定样品活菌数的方法是( ) A．稀释涂布平板法B．重量法C．直接计数法D．比浊法6．在接种操作的过程中，不正确的是( ) A．要将接种环灼烧灭菌B．取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌C．将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位D．接种后还要将管口灭菌加塞7．有关稀释涂布平板法的说法中，错误的是( ) A．用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移液管的橡皮头，吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀B．移液管需经过灭菌C．试管口与移液管应在离火焰1～2 cm处D．涂布时可转动涂布器，使菌液涂布均匀8．为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是( ) A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C．临时保藏的菌种容易被污染或产生变异D．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温－4 ℃保藏的方法能力提升9．在平板划线操作中，错误的是( ) A．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红B．将烧红的接种环在火焰旁边冷却C．接种环在平板上的划线位置是随机的D．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰10．微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是( ) A．细菌的大小、形状、颜色B．菌落的大小、形状、颜色C．有无鞭毛D．培养基的不同11．在培养基的配制过程中，具有如下步骤，其正确顺序为( )①溶化②调pH ③加棉塞④包扎⑤分装⑥称量A．①②⑥⑤③④B．⑥①②⑤③④C．⑥①②⑤④③D．①②⑤④⑥③12．微生物培养是微生物工程中的基础技术。
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化实验目的：掌握培养基的配制原则与方法；掌握划线分离纯化微生物的原理与方法熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项；实验材料：器材：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。
试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等实验原理：培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。
培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素、能源和水。
根据微生物的种类和实验目的不同，培养基要选择合适的配比关系；选择合适的理化性质；配后要及时灭菌。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法等实验内容：1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备（1）计算根据配方计算出实验中各种药品所需要的量，然后再分别称量。
（2）称量准确称取各种成分。
一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸纸上称量，然后连同硫酸纸一起放入烧杯中。
（3）溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，取出硫酸纸弃去。
加热搅拌全溶后稍放冷。
（4）调pH值用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。
一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。
（5）分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内（附图1-1）。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
