实验2 过氧化氢酶活性测定

第1页/共2页 高中生物实验知识：过氧化氢酶活性的测定

过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中，能将过氧化氢分解为氧和水，可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。用氧电极法测量放氧速度，方法灵敏而快速。放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。

仪器药品

氧电极仪 记录仪

电磁搅拌器 超级恒温水浴

注射器、 微量注射器 容量瓶

反应杯 亚硫酸钠

过氧化氢酶

50mmol/L磷酸缓冲液，pH7.0(见附表2)。

50mmol/L过氧化氢溶液：取1.4ml30%H2O2用磷酸缓冲液定容至250ml即得。

标准过氧化氢酶溶液：称取过氧化氢酶(Sigma)1.0mg(110U/mg)，溶于50mmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)11ml中，使酶浓度为10U/ml。

操作步骤

1.仪器的标定

按实验88步骤进行仪器的标定，以求得记录纸上每小格相当的含氧量。 第2页/共2页 2.绘制酶活性标准曲线

(1)在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液，开启电磁搅拌器搅动10分钟，插入电极，吸去溢出在电极外面的溶液，调节移位旋钮，使记录笔位于满刻度的10─20%左右，使记录纸走动，1─2分钟后温度达到平衡，记录笔画出直线。

(2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110U/ml过氧化氢酶，立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。

(3)根据上述同样步骤，注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(例如浓度为20、30、40、50U/ml等)，记录氧释放曲线。

(4)取放氧曲线的直线部分，根据其斜率及走纸速度，计算每分钟氧的释放量。

(5)以过氧化氢酶活性单位为横坐标，每分钟氧的释放量为纵坐标，绘制标准曲线。

3.样品测定

(1)在反应怀内注入50mmol/L过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟，插上电极，待记录为一直线后，注入10μl合适浓度的待测酶液样品，立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。

(2)根据样品的放氧曲线，计算得到每分钟的放氧量，在标准曲线上查得酶活性大小。

阐述土壤过氧化氢酶活性的测定

过氧化氢酶（Hydrogen Peroxidase）又称触酶（Catalase，CAT），是一类广泛存在于动物、植物和微生物体内的末端氧化酶，酶分子结构中含有铁卟啉环，1个分子酶蛋白中含有4个铁原子。在土壤中分布十分广泛，在微生物代谢过程中起着重要作用，能促进过氧化氢对各种化合物的氧化。来源于土壤微生物和植物根，也来自土壤动物和进入土壤的动、植物残体。 1 材料与方法

1.1 供试土壤样品与采样方法

供试土壤样品采自农家菜园地，采样区属平原地带，位于东经116°，北纬35°，属暖温带季风性大陆气候，四季分明，降水较为丰沛，具有多春旱、夏季多雨、秋季干旱、冬季干冷少雪的气候特点。分别从种植油菜、小白菜、葱、土豆、甘蓝、黄瓜、毛豆、芹菜、大蒜、豆角和芸豆的菜园地里挖去一定深度的土壤，带回实验室进行处理。将从外面田地里取回来的土壤进行风干处理，风干后，过1mm筛，置于4℃的冰箱中备用。

2 结果与分析

2.1 实验结果

根据实验中对酶活度大小的定义，只有小白菜、油菜还有甘蓝这三种蔬菜的土壤中过氧化氢酶的活性在5.000mLKMnO4/g干土以下，其他蔬菜地里的过氧化氢酶的活性都维持在5.000mLKMnO4/g干土以上。由试验所得数据可知，取自不同蔬菜地土样中的过氧化氢酶的活性之间的差别不是很大。即种植不同蔬菜的同一土壤，其中所含过氧化氢酶的活性之间的相关性不明显。

2.2 结果分析

总体上来看菜类（包括油菜、小白菜、甘蓝等）土壤里的过氧化氢酶要比豆类（包括毛豆、豆角、芸豆）地里的过氧化氢酶活性低，说明菜类地里的过氧化氢酶的活性相对要小一些。尤其是油菜地和小白菜地的土壤过氧化氢酶活性都在4.9mLKMnO4/g干土以下，比甘蓝地都要低许多。经从菜园管理者那里了解，油菜和小白菜刚喷洒过农药不久，或许是农药的抑制作用才会比较低。而各种豆类地里的过氧化氢酶活性之间相差不是很大，只是毛豆土样的过氧化氢酶活性要低一些。但从整体上来看所有土样中过氧化氢酶的活性还是相差不大的，原因是土壤中所含的各种酶的量都很少，活性不会很明显。

过氧化物酶活性测定

过氧化物酶（peroxidase）是一类广泛存在于各种生物中的酶。它们能够催化过氧化物与底物之间的氧化还原反应。此类酶有多种生物功能，其中最重要的是用于废弃物的代谢和细胞保护。在工业和农业领域中，过氧化物酶也常被用作催化剂。因此，对于过氧化物酶的活性测定十分重要。

传统的过氧化物酶活性测定方法主要包括光谱分析法、吸光度法、滴定法、电化学法等。今天我们主要介绍光谱分析法的原理和步骤。

过氧化物酶在酸性pH下的催化活性主要是由其含有的含铁金属离子（Fe3+）决定的。Fe3+构成的氧桥结构能够与底物发生氧化还原反应，同时产生吸收峰。因此，利用曲线拟合的方法可以测定样品中过氧化物酶的活性。

具体操作步骤如下：

1. 处理样品。将待测样品加入一定比例的磷酸盐缓冲液（pH 5.0）。若含有颜色物质需添加过滤效果的吸附剂。

2. 加入反应液。向样品中加入过氧化氢，使其浓度为0.1%。

3. 反应后读取吸收度。反应结束后，利用紫外-可见光谱仪读取其吸收值。

4. 分析数据。根据吸收峰的强度和波长，利用标准曲线计算出过氧化物酶的活性。

总之，过氧化物酶活性的测定对于研究生物学和工业化学等领域都具有重要的意义。随着科学技术的不断发展，相信在未来，这一领域的研究也将不断深入，为我们带来更多的新发现和应用。

过氧化氢酶活性测定实验报告

实验目的，通过测定过氧化氢酶活性，探究不同条件下过氧化氢酶的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供实验数据支持。

实验原理，过氧化氢酶是一种重要的酶类，在生物体内起着重要的氧化还原作用。本实验采用比色法测定过氧化氢酶活性，其原理是过氧化氢酶催化过氧化氢分解成水和氧气，过氧化氢酶活性与生成的氧气量成正比。

实验材料与方法，实验中所需材料包括过氧化氢酶、过氧化氢、磷酸盐缓冲液、吡啶甲酸钠盐等。首先，按照一定比例将过氧化氢酶和过氧化氢混合，然后加入磷酸盐缓冲液和吡啶甲酸钠盐，使混合液在一定温度下进行反应。接着，通过比色法测定生成的氧气量，进而计算出过氧化氢酶的活性。

实验结果与分析，在不同温度、pH值、底物浓度等条件下，测得过氧化氢酶的活性数据。通过对比分析不同条件下的活性数据，发现过氧化氢酶在不同条件下呈现出不同的活性变化规律。在温度较低时，过氧化氢酶活性较低；在酸性环境下，过氧化氢酶活性受到抑制；随着底物浓度的增加，过氧化氢酶活性呈现出逐渐增加的趋势。

结论与讨论，通过本实验，我们得出了过氧化氢酶活性与温度、pH值、底物浓度等因素之间的关系。这些结果对于深入研究过氧化氢酶的功能机制，以及在生物医学、生物工程等领域的应用具有一定的指导意义。同时，我们也发现过氧化氢酶在不同条件下表现出不同的活性变化规律，这为进一步探究过氧化氢酶的调控机制提供了重要的实验数据支持。

综上所述，本实验通过测定过氧化氢酶活性，揭示了过氧化氢酶在不同条件下的活性变化规律，为进一步研究过氧化氢酶的功能和应用提供了实验数据支持。希望本实验结果能够为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。