细胞培养技术实验报告单

动物细胞培养实验报告

第一篇：

一、实验目的

1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。

2、学习并掌握细胞传代培养的方法。

3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。

二、实验原理

细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。

动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。

原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。

传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。

高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。

三、细胞培养相关设施及材料

1、细胞培养室

无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。

孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。

制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。

储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。

清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。

- 1 - 细菌的培养实验报告斜面培养基

细菌的培养实验报告斜面培养基。这个可以用于，平板培养，加盖，灭菌这几点来做吧！一般都会采取自然干燥或者是高压蒸汽灭菌等方式，但是相对来说都不是特别适合用于斜面培养。因为这样有时候会影响到底物分布和菌落形成情况。最好还是用高温高压灭菌法比较好一些！每个培养皿中放入四只菌种，分别注明名称，数量。按照常规配置的酸碱度进行分装。大多都是在经过高压灭菌后备用的。其他就是如果选择水平仪培养箱的话，记得调整温度计读书，大概是32-35度左右吧。当然了我们都知道细菌生长最佳温度为25-30度，并且，实际操作中，将细胞密度保持在10x10*0.3-0.5 mL 之间的最佳范围内，是提升细胞密度的关键。所以，只需要每天进行调节即可。把一支菌液接种至少十六支相同大小的平板上（选择菌株编号末尾是1的作为模板）。并使之均匀混合，之后便放入培养箱中进行培养。日常管理主要就是观察和清洁两部分。不同培养皿需不定期更换平板位置，否则容易造成污染而导致细菌死亡。总结下来就是消毒。灭菌。培养。这三步骤。我觉得消毒是最重要的。也是必须做的。希望你能采纳。

那么在开始接种之前呢？肯定就是先要对我们使用的器材设备进行消毒啦。准备好培养皿、三角瓶等器具。通过专业的测试温度与湿度的工具（通常是烤箱）或是其它科学仪器进行恒温恒湿的预热处理。再将平皿装满冷却至室温的细菌悬浮液，以待正式接种。至此细菌菌种制备完毕。下面就是细菌菌种的分离培养环节。 - 2 - 首先要进行的是消毒工作。原则上要求严格无菌操作。才能确保实验结果的精确性。目标菌的挑取:把从显微镜载玻片挑取出的子实体直接转接到试管斜面上，接种数量大约在10x10*0.2-0.3μm 之间。之后便进行密封培养，第一次菌液接种应该在培养皿倒扣过夜后进行。而后边摇晃平板，让沉降到最下层的菌膜能够被充分摇散，使之尽快达到融合状态。继续密封培养两天。

霉菌细胞培养与观察

一、实验目的：

1. 培养霉菌；

2. 观察霉菌菌丝细胞结构，细胞核，细胞器；

3. 观察菌丝不同部位霉菌细胞形态。

二、实验材料：

1.试剂：面包，固定液（冰乙酸，甲醇），PBS缓冲液（磷酸二氢钾，氢氧化钠，蒸馏水，PH调至7.2磷酸盐缓冲液，健那绿）蒸馏水, 50%乙醇。

2.器材：载玻片，盖玻片，镊子，培养皿，吸水纸，吸管，光学显微镜

三、原理：

霉菌是形成分枝菌丝的真菌的统称，不是分类学的名词，霉菌细胞具1至多个细胞核。细胞壁分为三层：外层无定形的β葡聚糖（87nm)；中层是糖蛋白，蛋白质网中间填充葡聚糖（49nm)；内层是几丁质微纤维，夹杂无定形蛋白质（20nm)。

构成霉菌体的基本单位称为菌丝，呈长管状，宽度2～10微米，可不断自前端生长并分枝。在固体基质上生长时，部分菌丝深入基质吸收养料，称为基质菌丝或营养菌丝；向空中伸展的称气生菌丝，可进一步发育为繁殖菌丝，产生孢子。大量菌丝交织成绒毛状、絮状或网状等，称为菌丝体。菌丝体常呈白色、褐色、灰色，或呈鲜艳的颜色（菌落为白色毛状的是毛霉，绿色的为青霉,黄色的为黄曲霉），有的可产生色素使基质着色。霉菌繁殖迅速，常造成食品、用具大量霉腐变质，但许多有益种类已被广泛应用，是人类实践活动中最早利用和认识的一类微生物。

霉菌菌丝一般为颜色鲜艳，且菌丝为单层细胞，故可直接用于观察其显色结构、细胞壁，染色后可观察其细胞器。

四、操作步骤：

1. 霉菌的培养：

一般的霉菌，将面包放置在30℃左右，湿度在75%以上，两至三天即可产生黄曲霉菌。

2.制片观察：

在载玻片上加一滴蒸馏水，用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的霉菌菌丝，先置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再放在载玻片上的液滴中，用解剖针小心地将菌丝分散开。（注意：挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。）在低倍镜下找到霉菌细胞，移到视野中央，切换至高倍镜观察。

动物细胞造就

一.实验目标.

1.控制无菌操纵技巧.

2.控制原代和传代细胞造就.

3.控制细胞冷冻和苏醒技巧.

4.懂得造就成纤维细胞的形态.

二.实验道理.

将动物机体的组织从机体中掏出,经各类酶（经常运用胰蛋白酶）.螯合剂（经常运用EDTA）或机械办法处理,疏散成单细胞,置适合的造就基中造就,使细胞得以生计.发展和滋生,这一进程称原代造就.

细胞在造就瓶长成致密单层后,已根本上饱和,为使细胞能持续发展,同时也将细胞数目扩展,就必须进行传代（再造就）. 传代造就也是一种将细胞种保管下去的办法.同时也是运用造就细胞进行各类实验的必经进程.悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才干分瓶.

对具有移动特征的稳固细胞系或细胞株进行长期保管,一方面可以作为细胞研讨的实验材料,另一方面可以做细胞成品的临盆材料.今朝普遍运用的细胞保管办法是低温冷冻保管法,.细胞的冷冻保管的原则是慢冻快融,如许做是为了防止细胞因为冷冻进程中产生了冰晶而产生细胞决裂.

三.实验器材及药品. 器材：怀孕的小白鼠.造就箱.造就瓶.造就皿.移液器.眼科剪.镊子.酒精灯.离心计心情.水浴锅.倒置显微镜.CO2造就箱.超净工作台.离心管.高压灭菌锅.试管架等.

药品：小牛血清.DMEM合成造就基.抗生素.DMSO冷冻剂.胰酶.PBS缓冲液等.

四.实验操纵.

1.消毒灭菌.

将实验所需用到的对象（如枪头.造就皿.眼科剪.镊子以及每小我的实验服等）分散灭菌.烘干.配制75%的酒精以备实验时所需.

2.造就基的配制.

分别取10ml的小牛血清.90ml的DMEM合成造就基,将两种造就基混杂在一路,再向个中参加1ml的抗生素,吹打混匀就得到了细胞造就的造就液.

3.原代造就.

（1）.预备.将实验进程中会用到的对象以及药品全体放在超净工作台长进行紫外消毒灭菌.实验开端前带好乳胶手套,用酒精敌手进行消毒.将怀孕的小白鼠放在酒精中杀逝世,掏出子宫内的胚胎组织.