实验报告细胞培养

实验一、骨髓瘤细胞的培养

骨髓瘤细胞系应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤细胞在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。

常用骨髓瘤细胞系有：NS1、SP2／0、X63 Ag8.653等。

骨髓瘤细胞的培养适合于一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10～20％，细胞的最大密度不得超106／ml，一般扩大培养以1∶2稀释传代，每2～3天传代一次。细胞的倍增时间为16～20小时，上述三株骨髓瘤细胞系均为悬浮或轻微贴壁生长，只用弯头滴管轻轻吹打即可悬起细胞。

二 材料：

1. 试剂：

（1）培养基 杂交瘤技术中使用的细胞培养基主要有RPMI-1640或DMEM（Dulberco

Modified Eagles Medium）两种基础培养基，具体配置方法按厂家规定的程序，配好后过滤除菌（0.22um滤膜），分装，4℃保存。

不完全RPMI-1640培养基：RPMI-1640培养基原液96ml,100×L.G.溶液1ml，双抗溶液1ml，7.5% NaHCO3溶液1-2ml，HEPES溶液1ml。

不完全DMEM培养基：DMEM 13.37g,超纯水或四蒸水980ml，NaHCO3 3.7g，100×L.G.溶液10ml，双抗溶液10ml，7.5% NaHCO3溶液1-2ml，用1N HCl调试pH至7.2-7.4，过滤除菌，分装4℃保存。

完全RPMI-1640或DMEM培养基：不完全RPMI-1640或DMEM培养基80ml，灭活小牛血清15-20ml，用于骨髓瘤细胞SP2/0和建株后杂交瘤细胞培养。

（2）小牛血清灭活：从-20℃冰箱取出小牛血清，室温自然融化，56℃ 30min即可充分灭活，分装小瓶（5ml/瓶），-20℃冻存备用，尽量避免反复冻融。

（3）青、链霉素（双抗）溶液（100×）取青霉素G（钠盐）100万单位和链霉素（硫酸盐）1g或100万单位，溶于100ml灭菌超纯水或四蒸水中，分装小瓶（4-5ml/瓶），-20℃冻存。

霉菌细胞培养与观察

一、实验目的：

1. 培养霉菌；

2. 观察霉菌菌丝细胞结构，细胞核，细胞器；

3. 观察菌丝不同部位霉菌细胞形态。

二、实验材料：

1.试剂：面包，固定液（冰乙酸，甲醇），PBS缓冲液（磷酸二氢钾，氢氧化钠，蒸馏水，PH调至7.2磷酸盐缓冲液，健那绿）蒸馏水, 50%乙醇。

2.器材：载玻片，盖玻片，镊子，培养皿，吸水纸，吸管，光学显微镜

三、原理：

霉菌是形成分枝菌丝的真菌的统称，不是分类学的名词，霉菌细胞具1至多个细胞核。细胞壁分为三层：外层无定形的β葡聚糖（87nm)；中层是糖蛋白，蛋白质网中间填充葡聚糖（49nm)；内层是几丁质微纤维，夹杂无定形蛋白质（20nm)。

构成霉菌体的基本单位称为菌丝，呈长管状，宽度2～10微米，可不断自前端生长并分枝。在固体基质上生长时，部分菌丝深入基质吸收养料，称为基质菌丝或营养菌丝；向空中伸展的称气生菌丝，可进一步发育为繁殖菌丝，产生孢子。大量菌丝交织成绒毛状、絮状或网状等，称为菌丝体。菌丝体常呈白色、褐色、灰色，或呈鲜艳的颜色（菌落为白色毛状的是毛霉，绿色的为青霉,黄色的为黄曲霉），有的可产生色素使基质着色。霉菌繁殖迅速，常造成食品、用具大量霉腐变质，但许多有益种类已被广泛应用，是人类实践活动中最早利用和认识的一类微生物。

霉菌菌丝一般为颜色鲜艳，且菌丝为单层细胞，故可直接用于观察其显色结构、细胞壁，染色后可观察其细胞器。

四、操作步骤：

1. 霉菌的培养：

一般的霉菌，将面包放置在30℃左右，湿度在75%以上，两至三天即可产生黄曲霉菌。

2.制片观察：

在载玻片上加一滴蒸馏水，用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的霉菌菌丝，先置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再放在载玻片上的液滴中，用解剖针小心地将菌丝分散开。（注意：挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。）在低倍镜下找到霉菌细胞，移到视野中央，切换至高倍镜观察。

细胞培养接种病毒的应用及进展

摘要：病毒不具有细胞结构，也不进行蛋白质、糖和脂类的代谢活动，对抗生素具有明显的抵抗力，而且缺乏完整的酶系统，不具备能量合成系统，也不具有核糖体，是绝对的细胞内寄生。以上特点表明：病毒必须在活的组织细胞中才能正常生长，通过细胞病变的观察来判断病毒的增殖。这样看来体外细胞培养就显得尤其重要。

关键词：病毒、细胞培养、接种病毒

病毒只具有一种类型的核酸[1]（DNA或RNA），并且只能在宿主细胞内通过复制的方式进行繁殖，形状大体上分为三种：球形颗粒、杆状颗粒和复杂形状颗粒。病毒必须在活的组织细胞中生长繁殖，因此病毒培养的宿主系统主要有实验动物、鸡胚、体外培养的器官和组织细胞。

与传统的鸡胚接种相比，利用体外动物细胞培养[2]的方法具有很多优势，如抗原匹配性好，能够实现大规模生产和自动化控制，可以在短时间内使病毒大量增殖，解决疫苗制备中的很多难题，减少过敏反应等。

1 体内、外细胞的差异和分化

差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。

分化：体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的改变，细胞分化的表现和在体内不同。细胞是否表现分化，关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。

2 细胞的分类

根据细胞培养物的生长类型：粘附细胞和悬浮型细胞

细胞传代培养实验报告

一、实验目的：

1.了解细胞传代培养的基本原理；

2.学习细胞传代培养技术的操作方法；

3.掌握细胞传代培养实验的基本步骤和注意事项；

4.获得细胞传代培养实验的经验和技能。

二、实验原理：

细胞传代培养是指从初始培养物中取出一部分细胞并重新分散、传代到新的培养基中。通过连续传代，细胞数量可以维持并增加，同时可以获得较为纯净的细胞系，以满足细胞实验的需要。传代细胞时，需要注意细胞的密度，培养基的补充和细胞培养的条件等。

三、实验材料与方法：

1.材料：

-细胞培养物

-培养基

-无菌离心管、培养皿、吸管、移液器等实验器材

2.方法：

-准备工作：消毒实验器材和台面，准备培养基和培养物；

-取出细胞培养物，离心采样管； -收集细胞，用无菌移液器将细胞转移到新的培养基中；

-细胞传代，将细胞分散在新的培养基中；

-转移细胞至新的培养皿中；

-增加培养基，继续培养细胞；

-观察细胞生长情况，记录数据。

四、实验结果与分析：

1.细胞的形态：观察细胞的外形和颜色，是否有异常；

2.细胞的数量：通过显微镜或细胞计数板计算细胞的数量；

3.细胞的增长速度：根据前几代的细胞数量和时间，计算细胞的增长速率；

4.观察细胞的附着情况和细胞分裂情况；

5.记录实验结果。

五、实验结论：

通过本次实验，我们成功进行了细胞的传代培养实验。观察细胞的外形和数量变化，我们可以得出以下结论：

1.细胞在新的培养基中可以继续生长和繁殖，实现了细胞传代培养的目标；

2.细胞数量随着传代次数的增加而增加，细胞的增长速率相对稳定；

3.细胞形态正常，没有明显的异常；

4.在培养的过程中，细胞附着情况较好，细胞分裂正常。 六、实验心得：

通过本次实验，我学到了细胞传代培养的基本原理和操作技巧。我了解了细胞的培养条件和细胞的要求，掌握了细胞传代培养的步骤和注意事项。在实验中，我注意保持实验器材的无菌，尽量减少细菌的污染。同时，我也学会了如何观察细胞的形态和数量变化，以及如何记录实验结果。通过这次实验，我更加了解了细胞传代培养的重要性和应用范围，对于日后的细胞实验和研究具有很大的帮助。