南昌大学实验报告
学生姓名： 学 号： 专业班级：
实验类型：√ 验证 □ 综合 □ 设计 □ 创新 实验日期： 实验成绩：
实验九 纯培养菌种的菌体、菌落形态的观察
一、实验目的：
观察上一实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落形态特征。通过观察比较细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的菌落特征，达到初步鉴别上述微生物的能力。
二、实验基本原理：
细菌在固体培养基上的培养特征就是菌落特征。所谓菌落就是 由单个或少量同种细菌（或其他微生物）细胞繁殖起来的，由无数细胞聚集在一起形成的肉眼可见的细胞集合体。
菌落的外观特征和培养条件有关，也与细菌自身的遗传特性有关。不同细菌的菌落特征是不一样的，在一定培养条件下他们表现出不同的培养特征。这些特征可以作为细菌的分类依据之一。
三、主要仪器设备及耗材：
1 显微镜、载玻片、接种环、酒精灯
2 上一实验培养出的各种细菌
3 革兰氏染色液一套
四、实验步骤：
（一）细菌菌落形态和菌体染色及其形态观察
1、 接种斜面培养基
2 、菌落形态特征观察
3、微生物个体形态观察
（二）细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的菌落特征的比较
五、实验数据及处理结果
记录观察细菌菌落形态结果
六、思考题：
试比较四大类微生物的菌落特征
七、实验体会及对实验改进的建议
分离培养：无菌采取病料接种马铃薯琼脂培养基中，置37℃恒温箱中培养24小时，长
成绒毛样菌丝，未见其它细菌生长。经48小时培养长成白色菌落。72小时菌落呈纽扣状，
由中心向外周逐渐变深，转变成灰白色、灰绿色。取培养物镜检可见大量球形的分生孢子。
通常人们把真菌和霉菌认为是一种病原的两种说法。真正真菌包括霉菌，霉菌只是众多
真菌中的一种。真菌是由单细胞或多细胞组成，按有性或无性方式进行繁殖的真核细胞类微
生物。根据其侵犯人体的部位分为前部真菌和深部通常人们把真菌和霉菌认为是一种病原的
两种说法。真正真菌包括霉菌，霉菌只是众多真菌中的一种。真菌是由单细胞或多细胞组成，
按有性或无性方式进行繁殖的真核细胞类微生物。根据其侵犯人体的部位分为前部真菌和深
部真菌，包括皮肤癣菌、孢子丝菌、念珠菌、曲霉菌、隐球菌、组织胞浆菌等。而霉菌多为
细胞真菌的一种，也为深部感染真菌，包括烟曲菌、黄曲菌、黑曲菌、土曲菌等，常发生于
免疫力低下的患者，引起全身播散性感然，影响预后。
培养基的选择应根据实验材料和检验目的来确定。目前国标方法中使用的培养基有:马
铃薯葡萄糖琼脂(PDA),孟加拉培养基(RBC)、高盐察氏培养基(CAO),其中PDA和RBC适合
于一般的霉菌和酵母菌生长,而CAO则适合于高渗性霉菌生长,酵母菌几乎不长。在日常检测
中我们发现,有些常见的耐高渗性霉菌,如局限曲霉、谢瓦曲霉、赤曲霉、Wallemia等在PDA、
RBC上生长非常缓慢或不长,而这些菌在高渗培养基如M40Y、DG18(M40Y琼脂配方:蔗糖
400g,麦芽提取汁20g,酵母提取汁5g,琼脂20g,氯霉素50mg,蒸馏水1000ml;DG18琼脂配方:葡萄糖10g,蛋白胨5g,KH2PO41g,MgSO4·7H2O 0.5g,氯霉素0.1g,0.2%二氯硝基苯胺
1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH6.5)上则正常生长,孢子、形态特征发育良好,而且酵母菌也能在M40Y、DG18上生长,因此,若能同时采用PDA和M40Y(或DG18)分离培养各类样品
JJ-YLCX12-13-10 第 页 共 页
微生物测定原始记录
样品编号 样品名称 检验日期 年 月 日
检验项目 □大肠菌群
□菌落总数 检验依据
设备名称及编号 电热恒温培养箱 编号：
1、大肠菌群
先取25mL（g）样品加到225mL稀释液，均质
在VRBA平板上培养 日 时 至 日 时， 培养条件： ℃
可疑菌再经过BGLB肉汤培养 日 时 至 日 时， 培养条件： ℃，产气则大肠菌群阳性
样品序号 稀释 分离培养 可疑菌落及可疑菌落数 BGLB（只选做部分菌落数）
阳性管记为+，阴性管记为- 所选稀
释度 结果
CFU/g（mL） 培养基 培养基 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1
生理盐水或稀释液 VRBA □ 无□有
cfu
2 □ 无□有
cfu
3 □ 无□有
cfu
4 □ 无 □有
cfu
5 □ 无□有
cfu
计算公式
报告值 空白对照
菌落数
2、菌落总数
25mL（g）样品加到225mL稀释液，均质，选取2至3个稀释度，各皿加1mL稀释液，每个稀释度做两个平行。上培养 日 时 至 日 时， 培养条件： ℃
样品序号 各稀释度菌落数及平均菌落数
结果CFU/g（mL） 100 10-1 10-2 10-3
1 2 平均 1 2 平均 1 2 3 1 2 平均
1
2
真菌感染的微生物学实验室检查方法
对真菌的诊断需要了解真菌寄生的部位，完整的病史，包括职业、业余爱好和旅游史。检查一般采用直接镜检和真菌培养两种方法即可确诊。必要时再进行实验、血清学反应或动物接种等。
标本的采集 用无菌操作收集适宜部位的标本，可疑浅部真菌感染应取病变部位的毛发、指（趾）甲屑及皮屑等，可疑深部真菌感染的病人应根据临床症状和体征选取、脑脊液或分泌物、排泄物及痰液等并及时检查，一般不超过1～2小时，以免变质污染。
真菌的直接镜检 皮屑、指（趾）甲和毛发等致密而难以透明的标本应先用10%的KOH微加温处理，溶解角质层和细胞基质，然后进行镜检。脓、痰或血标本可直接涂片镜检。镜下观察是否有孢子、菌丝或假菌丝。若怀疑新生隐球菌等有荚膜的真菌感染，根据所致疾病选取标本，经墨汁负染后镜检，见有芽生菌体外围绕着宽厚的荚膜即可做出诊断。
真菌的分离培养 一般用于直接镜检不能确诊时。病原性真菌培养用沙保弱培养基（pH5.6，不适宜生长）培养，为了防止细菌或腐生性真菌的污染，经常加入放线（菌）酮、青霉素、链霉素或其他抑
制性抗生素。如果是皮肤、毛发和甲屑等标本，需经70%乙醇或2%石炭酸浸泡2～3分钟杀死杂菌，再经无菌盐水洗净后接种于沙保弱培养基上，在25℃～28℃的条件下培养数日至数周，观察菌落特征。
可疑深部真菌感染的标本可接种于血平板、肉渣培养基或硫酸钠肉汤内，分别在室温和37℃培养数日至数周。必要时可在玻片上做真菌小培养，能在光镜下观察真菌的形态和结构的特点及生长发育的全过程，便于鉴别。阴道或口腔粘膜处标本可直接用棉拭子取材，在血平板上分离。血液标本需事先增菌，脑脊液标本则取其沉淀物接种于血平板上，于37℃培养。若疑为假丝酵母菌，可取菌落接种于0.5ml血清试管内，37℃1h后涂片，革兰染色后镜下见有假丝酵母菌细胞长出芽管即可初步鉴定为白假丝酵母菌。
血清学诊断可辅助检查深部真菌感染。通常使用的方法是乳胶凝集和补体结合等试验。用乳胶凝集试验可检测脑脊液或血液中新生隐球菌的荚膜抗原，经有效治疗后，其抗原效价下降；但是在AIDS患者合并新生隐球菌感染时，抗原效价经常会在长时间内维持高水平。但主要问题是多种真菌细胞壁缺乏具有原性的成分。
