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反相高效液相色谱法测定安乐片中柴胡皂苷a含量_刘明

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第7卷第2期 总第70期 二〇〇九年二月•己丑年118反相高效液相色谱法测定安乐片中柴胡皂苷a 含量刘 明 肖志勇 刘卫平 湖南长沙医学院药学系实验室(410219)摘要：目的 建立安乐片中柴胡皂苷a 的含量测定方法。

方法 色谱柱：kromasil C18柱；流动相乙腈-水（55:45）；检测波长：210nm ；流速：1.0 ml •min -1。

结果 柴胡皂苷a 线性范围为24.28～194.24µg •ml -1，相关系数r 为0.9997，回收率为99.15％，RSD 为1.67％。

结论 本方法简便、可靠、重现性较好，能起到控制安乐片中柴胡皂苷a 含量的作用。

关键词：安乐片；柴胡皂苷a ；高效液相色谱法；含量测定HPLC Method for the Determination of Saikosaponin a in Anle TabletsAbstract: Objective To establish HPLC method for the determination of Saikosaponin a in Anle Tablets . Method: Saikosaponin a in Anle Tablets was determined by HPLC, using kromasil Cl8 column, acetonitrile-water(55：45) as mobile phase, the detection wavelength was 210 nm. The flow rate was 1.0ml •min-1. Results: The linear range of Saikosaponin a was 24.28～194.24 µg •ml-1,coefficient correlation r was 0.9997, the average recovery of Saikosaponin a was 99.15％ with RSD 1.67％. Conclusion: The method is simple, rapid, accurate and repreatable. It can be used for determination of Saikosaponin a in Anle Tablets .Key words: Anle Tablets ；Saikosaponin a ；HPLC ；Determination安乐片具有舒肝解郁，定惊安神之功效，用于精神抑郁，惊恐失眠，胸闷不适，纳少神疲等症治疗，对神经官能症、更年期综合征及小儿夜啼、磨牙等症状者亦可使用[1]。

经过多年的临床证明，其疗效确切，毒副作用较少，是临床常用中成药之一。

为了有效地控制本品质量，考有关文献[2-4]，采用HPLC 法测定该制剂中柴胡皂苷a 的含量，为安乐片的质量控制提供了快速、准确的测定方法。

1 仪器与试剂日本岛津高效液相色谱仪（LC －10AT 泵，SPD －10A 紫外检测器）；N2000色谱工作站（浙江大学智能信息研究）；KQ －250E 型医用超声波清洗器(500W ，40kHz)；柴胡皂苷a 对照品(中国药品生物制品检定所，批号l10749-200309，供含量测定用)；乙腈为色谱纯，水为注射用水，其他试剂均为分析纯；安乐片(广西邦琪药业有限公司，批号为071221，071222，071225，080115)。

2 方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱：kromasil C18柱(4.6mm ×250mm ，5µm)；流动相：乙腈-水（55:45）；流速；1.0ml•min -1；柱温：35℃；检测波长：210nm ；进样量20µl 。

在此条件下，样品得到良好分离。

缺天麻阴性对照在柴胡皂苷a 峰处无吸收，不干扰本品的测定。

见图1、2、3。

图1 对照品溶液色谱图 图2 供试品溶液色谱图 图3 阴性对照溶液色谱图1:柴胡皂苷a2.2 对照品溶液制备 精密称定于105℃干燥至恒重的柴胡皂苷a 对照品6.07mg ，置25ml 量瓶中，加甲醇3ml 于水浴上微热溶解，放冷加甲醇至刻度，摇匀，得柴胡皂苷a 的对照品溶液，浓度：0.2428mg •ml -1。

2.3 供试品溶液制备 取本品剥去包衣，研细，精密称取样品2.0g ，置50ml 量瓶中，加5％氨水－甲醇溶液25ml ，润湿15min ，密闭，超声提取1h ，滤过，以甲醇10ml 分两次洗涤滤渣，合并滤液，置水浴上蒸干，放冷，加适量甲醇溶解，移入l0ml 量瓶内，定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45µm)滤过，得供试品溶液。

2.4 阴性供试品溶液制备 取处方中去除柴胡药材，按照供试品溶液的配制方法，配制成阴性供试品溶液。

2.5 线性关系考察 分别精密量取对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0ml ，置10ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度。

分别精密吸取上述溶液20µl 注入液相色谱仪，按上述色谱条件测得峰面积。

以柴胡皂苷a 的含量C(µg •ml -1)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得线性方程为：Y=5E+06x ，相关系数r=0.9997，柴胡皂苷a 浓度在24.28～194.24µg •ml -1之间呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 精密吸取柴胡皂苷a 对照品溶液20µl ，按上述色谱条件，平行测定6次，记录峰面积。

结果RSD 为1.37％，说明其精密度良好。

2.7 重现性试验 取本品(071221)剥去包衣，研细，取约2g ，共6份，按上述供试品制备法制备，分别按上述色谱条件测定，记录峰面积，计算含量。

结果RSD 为1.57％，说明其重现性良好。

2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0，l ，3，5，8h 分别进样20µl ，按上述色谱条件测定，记录峰面积。

计算RSD 值为1.52％。

结果表明，供试品溶第7卷第2期 总第70期 二〇〇九年二月•己丑年119液在8h 之内稳定。

2.9 加样回收率试验 取已知含量的的安乐片（071221）6分，取约1.0g ，精密称定，分别加入一定量的柴胡皂苷a 对照品，挥干溶剂，按上述供试品制备法制备成加样供试品溶液，再按上述色谱条件测定，结果见表1。

结果表明：本方法具有较好的回收率。

表1 加样回收率试验结果（n ＝3）取样 样品中的柴胡皂 加入柴胡皂 测得柴胡皂 回收率 平均回收 RSD 量(g) 苷a 含量(mg) 苷a 量(mg) 苷a 总量(mg) (％) 率（％） (％) 1.0124 0.0626 0.0728 0.1338 97.85 1.0015 0.0619 0.0728 0.1347 100.01 1.0142 0.0627 0.0728 0.1345 98.66 0.9874 0.0610 0.0728 0.1347 101.21 1.0145 0.0627 0.0728 0.1349 99.18 1.0158 0.0628 0.0728 0.1341 97.9799.15 1.67表2 样品含量测定结果（n ＝5）批号柴胡皂苷a 含量（mg/g ）RSD （％）071221 0.0618 0.94 071222 0.0686 0.87 071225 0.0795 0.92 080115 0.0712 0.922.10 样品测定 取本品剥去包衣，研细，取约2g ，5份，按上述供试品制备法制备。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20µl ，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积，以外标法计算样品中柴胡皂苷a 的含量，结果见表2。

3 讨论考察提取的溶剂时，选用了多种溶剂进行预试，发现5％氨水-甲醇溶液较好，故选用其作为提取溶剂。

考察溶剂提取时间时，选用了45min ，60min ，90min 三个水平，结果发现提取90min 比提取60min 含量增加并不明显，故确定提取时间为60min 。

测定结果表明，本法具有回收率好，精密度、重现性高，样品处理简便，分析快速的优点，可作为安乐片中测定柴胡皂苷a 含量的方法。

参考文献[1] 卫生部药典委员会.卫生部药品标准[S].中药部颁标准第二册.北京:人民卫生出版社,1998:104.[2] 王健,王博,滕利荣,等.高效液相色谱测定克郁舒神颗粒中柴胡皂苷a 含量[J].中国实验方剂学杂志,2006,12(5):7-8.[3] 张俐,王玉.HPLC 测定正柴胡饮中柴胡皂苷a 的含量[J].中成药,2004,26(1):79-80.[4] 白雪梅,田嘉铭.HPLC 测定不同产地柴胡中柴胡皂苷a 及柴胡皂苷d 的含量[J].中成药,2006,28(3):440～441.（收稿日期：2008—12—08）摘要：目的 建立当归片中阿魏酸的含量测定方法。

方法 采用HPLC 法，C18 ODS 色谱柱，甲醇-水-磷酸（30:70:0.3）为流动相；流速为1.0ml/min ；检测波长为320nm 。

结果 阿魏酸进样浓度在3.75～75.01μg/ml 线性良好，平均回收率为99.5％，RSD 为1.23％。

结论 本文建立的HPLC 法可作为当归片质量控制方法。

关键词：HPLC ；当归片；阿魏酸；含量测定Determination of Ferulic Acid in Danggui Tablet by HPLC Lin Ximin 1, Lin Cuiqing 2, Lin Yuping 1, Chen Youting 1, Liu Lanjun 11 Lanshi Hospital ，Foshan ，China 528041；2 Foshan Hospital of TCM ，Foshan ，China 528000,Abstract Objective: To establish a method for determining ferulic acid in Danggui tablet. Methods: The ODS C18 column was used. The mobile phase was methanol-water-phosphoric acid solution （30:70:0.3）. The flow rate was 1.0ml/min. The detective wavelength was 320nm. Results: The linear range of ferulic acid concentration was 3.75～75.01μg/ml, The average recovery was 99.5%, RSD was 1.23%(n=6). Conclusions: The method is simple, fast and accurate. It can be used for the quality control of Danggui tablet.Key words HPLC, Danggui tablet, Ferulic acid当归片为常用中药，由当归单味药组成，具有补血活血，调经止痛的功效，临床常用于血虚引起的面色萎黄、眩晕心悸、月经不调、痛经等症的治疗。

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高效液相色谱―紫外检测法同时测定北柴胡中柴胡皂苷a、b2、c、d、f含量-精选文档

高效液相色谱―紫外检测法同时测定北柴胡中柴胡皂苷a、b2、c、d、f含量-精选文档

高效液相色谱―紫外检测法同时测定北柴胡中柴胡皂苷a、b2、c、d、f含量DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.05.023基金项目：国家科技重大专项-重大新药创制（2009ZX09103）；江西省自然科学基金（2010GQY0048）通讯作者：王跃生，E-mail：Wylw915126苷及苷元、挥发油及黄酮类等。

柴胡皂苷具有抗炎、保肝、抗肝纤维化、降低血中胆固醇和调节内分泌等多方面药理活性。

近年来，关于柴胡药材中柴胡皂苷类成分含量测定的报道颇多，如采用高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UV）测定柴胡药材中柴胡皂苷a[3-4]，柴胡皂苷a、d[5-7]或柴胡皂苷a、c、d[8]，采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）测定柴胡药材中柴胡皂苷a、d[9-10]或柴胡皂苷a、c、d、f[11]，采用高效液相色谱-质谱法测定柴胡皂苷a、d[12]。

本研究以北柴胡中具有多方面药理活性的柴胡皂苷a、b2、c、d、f为指标，采用HPLC-UV同时测定不同产地北柴胡中柴胡皂苷a、b2、c、d、f 的含量，为合理选用药材及柴胡药材的质量检测提供参考依据。

1 仪器与试药超声波清洗器（上海必能信超声XX公司）， DZF-1B型真空干燥箱（上海跃进医疗仪器厂）， Agilent 1100高效液相色谱仪（包括色谱泵、自动进样器紫外检测器、色谱工作站），HH-6数显恒温水浴锅（国华电器XX公司），AL104/01电子天平（梅特勒-托利多仪器XX公司）。

柴胡皂苷a对照品（中国食品药品检定研究院，批号110777-200507），柴胡皂苷d对照品（中国食品药品检定研究院，批号110778-200506），柴胡皂苷b2、c、f对照品[金测分析技术（天津）XX公司，批号分别为1650005-201108、1650006-201107、1650007-201107，HPLC≥98%]，不同产地北柴胡原药材购自江西樟树药材市场，经江西中医药大学曹岚教授鉴定为北柴胡。

春柴胡中柴胡皂苷a与d的含量测定

春柴胡中柴胡皂苷a与d的含量测定

中图分类号 ： Ｒ ２ ８ ４ ． １ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ７—２ ３ ４ ９ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ７— ０ ０ ６ ５— ０ ２
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｓ ａ ｉ ｋ ｏ ｓ ａ ｐ ｏ ｎ ｉ ｎ ａ ａ ｎ ｄ ｄ Ｃｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ｎ Ｓ ｐ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｂｕ ｐ ｌ ｅ ｕ ｒ ｕ ｍ
Ｔ ｈ ｅ ａ ｖ ｅ ｒ ａ ｇ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙ ｒ ａ ｔ ｅ ｗ ａ ｓ ９ １ ． １ ９ ％ ａ ｎ ｄ Ｒ Ｓ Ｄ ｗ ａ ｓ １ ． ８ ３ ％（ ｎ ＝６ ） ；ｔ ｈ ｅ ｓ ａ ｉ ｋ ｏ ｓ ａ ｐ ｏ ｎ ｉ ｎ ｄ ｈ ａ ｄ ａ ｇ ｏ ｏ ｄ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｈ ｉ ｐ ａ ｔ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ ０ ． ５ ２ ３ ８— ７ ． ８ ５ ７ ￣ ｇ （ ｒ ０ ． ９ ９ ９ ２ ） ．Ｔ ｈｅ ａ ｖ ｅ ｒ ａ ｇ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙ ｒ ａ ｔ ｅ ｗ ａ ｓ ９ ２ ． ７ ６ ％ ａ ｎ ｄ Ｒ Ｓ Ｄ ｗ ａ ｓ １ ． ４ ３ ％（ ｎ ＝６ ） ．Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ： Ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｓ
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高效液相色谱法测定14种人参皂苷的研究

高效液相色谱法测定14种人参皂苷的研究

高效液相色谱法测定14种人参皂苷的研究作者：陈书华朴文香白龙律迟美丽金恩华马正赫武伦鹏来源：《吉林农业·下半月》2014年第06期摘要：为准确可靠的定量分析14种人参皂苷，本文通过对高效液相色谱条件进行优化，确定了测定人参皂苷的HPLC条件，结果表明，最佳分析条件流动相为乙氰和水；C18柱；检测波长：203纳米；流速：1.0 毫升/分。

该分析方法可以达到很好的分离效果，通过精密度、稳定性和回收率的计算，证明该方法具有良好的准确性和稳定性，是一种简单、高效的多种人参皂苷分析方法。

关键词：人参皂苷；高效液相色谱；检测方法中图分类号： R49 文献标识码：A 文章编号： 1674-0432（2014）-12-22-21 材料与方法1.1 药品及试剂人参皂苷标准品Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD，三七皂苷标准品R1均购自成都曼思特生物科技有限公司；乙氰、甲醇为色谱纯均购自美国TEDIA公司。

1.2 实验仪器Agilent 1100型高效液相色谱仪购自美国安捷伦公司。

1.3 实验方法1.3.1 色谱条件色谱柱：BDS HYPERSIL C18柱（250 毫米×4.6毫米，5微米）；柱温：25℃；检测波长：203纳米；流动相：水（A）和乙氰（B）；流速：1.0 毫升/分；梯度洗脱条件见表2.1。

上述条件下标准混合溶液的分离效果见图1.1。

表1.1 高效液相色谱流动相梯度洗脱条件图1.1 13种人参皂苷和1种三七皂苷混合标准溶液的HPLC图（1, R1; 2, Rg1; 3, Re; 4, Rh1; 5, Rb1; 6, Rc; 7, F1; 8, Rb2;9, Rd; 10, F2; 11, Rg3; 12, C-K; 13, Rh2; 14, PPD.）1.3.2 溶液的配制分别称取人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rg1、Re、F1、F2、Rg3、Rh1、Rh2、C-K、PPD和三七皂苷R1标准品（精确至0.1毫克），溶解于甲醇，得到14种皂苷的混合标准溶液。

反相高效液相色谱法测定决明降脂片中大黄素和大黄素甲醚的含量

反相高效液相色谱法测定决明降脂片中大黄素和大黄素甲醚的含量

反相高效液相色谱法测定决明降脂片中大黄素和大黄素甲醚的含量律涛;刘敏;贾海红;郎书会;樊淑彦【摘要】目的：建立测定决明降脂片中大黄素和大黄素甲醚含量的反相高效液相色谱法（ reversed phase high performance liquid chromatography，RP-HPLC）。

方法采用 RP-HPLC 测定大黄素和大黄素甲醚的含量。

色谱柱为Kromasil C18色谱柱（250mm ×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-四氢呋喃-1％磷酸（84：7：9）；柱温为25℃；流速为1.0mL/ min；检测波长为254nm；进样量20μL。

结果在选定的色谱条件下大黄素和大黄素甲醚的保留时间分别在6.9min、11.8min，具有良好的分离度和稳定性。

大黄素回归方程为 Y ＝3.31×104 X -4.63×103（R ＝0.9997），进样量在3.12~9.4mg/ L 范围内与峰面积积分值呈良好线性关系，样品回收率为102.1％，相对标准差（ relative standard deviation，RSD）值为1.7％（n ＝9）；大黄素甲醚回归方程为 Y ＝2.35×104 X +8.80×103（R ＝0.9998），进样量在2.10~10.5mg/ L 范围内与峰面积积分值呈良好线性关系，样品回收率为104.7％，RSD 值为1.3％（n ＝9）。

结论 RP-HPLC 操作可靠、准确，适用于决明降脂片中大黄素和大黄素甲醚的含量测定。

%Objective To establish a reversed phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC)method for determination of emodinand physcion in Jueming Jiangzhi Tablets. Methods RP-HPLC system was carried out on Kromasil C18(250mm × 4. 6mm,5μm)column with a mobile phase, the standards and samples were separated using a gradient mobile phase consisting of methanol, tetrahydrofuran and 1% phosphoric acid(84: 7: 9). The column temperature was 25℃ and the flow rate was 1. 0mL/ min.The nuciferine was detected at the wavelength of 254 nm. The injection volume was 20μL. Results Emodin and phys cion were separated from impurities well and its retention time was at about 6. 9 min,11. 8 min. Regress equation was Y = 3. 31 × 104 X - 4. 63 × 103(R = 0. 999 7). The linear in the range of emodin was 3. 12 - 9. 36mg / L. The average recovery was 102. 1% ,and its RSD rate was 1. 7%(n = 9);Regress equation was Y = 2.35 × 104 X + 8. 80 × 103(R = 0. 999 8). The linear in the range of physcion was 2. 1 - 10. 5mg / L. The average recovery was 104. 7% ,and its RSD rate was 1. 3%(n = 9 ). Conclusion RP-HPLC is areliable and accurate method,which can be applied for determination of emodin and physcion in Jueming Jiangzhi Tablets.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2014(000)008【总页数】3页(P908-910)【关键词】色谱法,高压液相;决明降脂片;大黄素;大黄素甲醛【作者】律涛;刘敏;贾海红;郎书会;樊淑彦【作者单位】河北医科大学药学院实验中心，河北石家庄 050017;河北医科大学药学院分析化学教研室，河北石家庄 050017;河北医科大学药学院分析化学教研室，河北石家庄 050017;河北医科大学药学院分析化学教研室，河北石家庄050017;河北医科大学药学院分析化学教研室，河北石家庄 050017【正文语种】中文【中图分类】R446.1;R975.3决明降脂片是由决明子、茵陈、何首乌、桑寄生、维生素C、维生素B2、烟酸组成，具有降血脂、降血清胆固醇功能，用于冠状动脉粥样硬化性心脏病或慢性肝炎所引起的高脂血症、血清胆固醇增高症[1]。