细菌分离培养及药敏试验方法及步骤

大肠埃希氏菌的分离鉴定与药敏试验作者：张鑫来源：《当代畜禽养殖业》 2019年第2期张鑫浙江省湖州市安吉县天荒坪镇畜牧兽医站 313300摘要：大肠埃希氏菌通常被称作大肠杆菌，外文名称（学名）Escherichia coli。

它属于细菌界，变形菌门，V-变形菌纲，肠杆菌目，肠杆菌科，埃希氏菌属，大肠杆菌种。

大肠杆菌主要寄生于人和动物的大肠内，约占肠道菌的1%。

是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。

该菌常引起动物严重腹泻和败血症。

关键词：大肠埃希氏菌；分离鉴定；药敏试验近年来随着集约化养鸡业的迅速发展，大肠杆菌病的流行日趋严重，其不仅使患病的鸡群生长发育受阻，饲料转化率下降，死淘率及屠宰废弃率增加，而且种鸡及产蛋鸡的蛋品质下降，孵化率降低，以及治疗费用增加等等，给养鸡户造成了极大的经济损失。

1 大肠埃希氏菌的主要特点大肠埃希氏菌属于原核生物，具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核，有拟核。

细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。

大肠埃希氏菌属于异养兼性厌氧型。

大肠埃希氏菌和人体在不致病的情况下可认为是互利共生，在致病的情况下可认为是寄生。

大肠埃希氏菌遇到伊红美蓝，菌落呈深紫色，并有金属光泽。

2 大肠埃希氏菌导致的疾病（1）鸡大肠杆菌病引起的急性败血症。

各种日龄的鸡均可发病，病鸡腹泻或呼吸困难。

剖检心脏和肝脏，表面覆盖一层容易剥离的白色纤维素膜(肝周炎、心包炎)，肉鸡大肠杆菌病还容易继发肉鸡腹水症。

（2）雏鸡脐炎。

该病一般是由大肠杆菌和其他细菌混合感染引起，主要发生于刚出壳的雏鸡，多数在出壳后2~3日内死亡。

病雏虚弱，常堆挤在一起，水样腹泻，腹部膨大，脐孔未闭合，呈蓝黑色，有刺激性恶臭味，死亡率在l0%以上。

（3）气囊炎。

病鸡表现为咳嗽和呼吸困难，呈地方性流行，病死率5%~20%，有时可达50%。

还有鸡大肠杆菌病引起的肠炎、蛋鸡输卵管炎、卵黄性腹膜炎、脑炎和全眼球炎等。

分枝杆菌分离培养和药敏试验引言分枝杆菌（Branchiobdella）是一类无脊椎动物寄生虫，常见于淡水环境中。

它们具有扁平的身体和分枝状的触手，因此得名。

分枝杆菌对环境条件非常敏感，因此分离培养和药敏试验对其研究具有重要意义。

分枝杆菌分离培养的方法1.样品采集：在淡水环境中选择活跃的分枝杆菌寄生体作为样品。

2.样品处理：将样品置于理化条件适宜的培养基中，如R2A培养基等。

以适宜的温度和光照条件下培养。

3.分离纯培养：利用无菌技术将分枝杆菌从其他微生物分离出来。

常用方法包括稀释涂布法、均匀涂布法等。

4.单菌种培养：将分离得到的单个分枝杆菌菌落接种到新的培养基上进行单菌种培养。

5.培养基优化：根据菌株特性，优化培养基组成、温度、光照和其他环境条件。

通过观察菌落形态、生长速度等指标，选择适宜的培养条件。

分枝杆菌药敏试验的方法1.制备药敏试验板：选择适宜的培养基，如Mueller-Hinton琼脂、肉汤琼脂等。

将药物分别加入琼脂中，并制备成不同浓度的试验板。

2.培养分枝杆菌：将分枝杆菌菌液均匀涂布在药敏试验板上，培养在适宜的温度下。

3.药敏试验观察：观察菌落的生长情况和抑菌效果。

记录最小抑菌浓度（MIC）。

4.药敏结果解读：根据国际标准或相关研究的参考值，判断分枝杆菌对药物的敏感性和抗药性。

可以根据MIC值进行药物分类，如敏感、中度敏感和耐药。

5.药敏结果分析：根据实验结果，分析分枝杆菌的药物抗性特征，为临床治疗提供参考。

结论分枝杆菌分离培养和药敏试验是研究该虫寄生虫的重要手段。

合理的分离培养方法可以得到纯种菌落，为后续研究和药敏试验提供可靠的基础。

药敏试验能够判断分枝杆菌对药物的敏感性，为临床治疗提供重要参考。

参考文献： 1. Johnston, D.J. (2000). A new family of Branchiobdellidan (Annelida: Clitellata) ectosymbiontic on freshwater crayfishes: The Evansobdellidae. Proceedings of the Biological Society of Washington, 113(3): 842-850. 2. Erséus, C. (2001). Chapter 25 PhylumAnnelida: Clitellata, Branchiobdellida. In: Animal biodiversity: an outline of higher-level classification and survey of taxonomic richness (ed. by Z.Q. Zhang). pp. 281-282. 3. Erséus, C. (2005). Order Branchiobdellida. In: Annelida: Polychaeta, Myzostomida, Branchiura and Vestimentifera (ed. by J. B. Hutchings, S. P. Nimis, and C. Reish). pp. 97-100.。

幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验一、引言鸭疫是一种由鸭疫里默氏杆菌引起的急性传染病，主要发生在水禽中，特别是对于幼鸭来说更为致命。

鸭疫病症主要表现为高热、抑郁、呼吸急促、鸭群死亡率极高，对农业生产造成了严重的危害。

对鸭疫病原菌的分离鉴定及药敏试验成为显得尤为重要。

二、分离鉴定1. 样品采集从患有鸭疫的幼鹅体内取样，如肺、脾、肝等内脏组织进行采集。

将样品放入无菌离心管中，冷链运输至实验室。

2. 细菌分离将取样的组织进行匀浆处理，然后用无菌梳子在无菌平板上均匀涂布。

置于37℃培养箱中培养24-48小时，直至出现细菌克隆。

3. 形态特征观察观察克隆菌落的形态特征，里默氏杆菌在培养基上呈现为小、灰白色，透明且呈环形的菌落，细菌呈杆状。

4. 生理生化特性鉴定将分离的细菌进行革兰氏染色，鉴定其为革兰氏阴性菌；进行氧化酶试验、嗜碱性酸加索试验等生化鉴定来确认细菌的特性。

5. 分子生物学鉴定利用PCR技术进行DNA提取和扩增，选择里默氏杆菌特异的引物进行扩增，最后通过测序鉴定其属于里默氏杆菌。

三、药敏试验1. 抗生素选取常见供试的抗生素包括庆大霉素、环丙沙星、卡那霉素、氨苄青霉素、头孢他啶、磺胺类药物等。

2. 药敏试验操作将分离的里默氏杆菌接种于固体培养基上，然后将不同抗生素的药片均匀涂布在培养基上，培养一段时间后观察对抗生素的敏感性。

3. 敏感性判定观察各药片周围是否有抑菌圈，并计算出抑菌圈直径，根据国家卫生部门颁发的药物抗菌圈直径标准来判断药敏性。

4. 结果判定根据药敏试验的结果，选择对里默氏杆菌具有良好疗效的抗生素进行治疗。

四、结语对幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验是鉴定病原体和确定治疗方案的重要手段。

合理的抗生素治疗可以有效控制鸭疫病的传播，保障畜禽养殖业的顺利进行。

希望通过不懈的努力，能够及时发现并有效治疗鸭疫病，保障水禽养殖业的健康发展。

药敏测试流程
药敏测试是一种用于检测病原体对药物的敏感性的试验，对于指导临床合理用药具有重要意义。

以下是药敏测试的流程：
1. 采集病原体：通过各种方法采集患者的病原体样本，如痰液、尿液、血液、分泌物等。

2. 分离培养：将采集的样本在适当的培养基上进行分离培养，以获得纯化的病原体。

3. 药物敏感试验：将纯化的病原体置于含有不同药物的平板上，观察病原体对药物的敏感性。

4. 结果分析：根据病原体对药物的敏感程度，分析结果并得出结论。

5. 报告发放：将测试结果报告发放给临床医生，以指导临床合理用药。

需要注意的是，药敏测试的具体流程可能因不同的病原体和药物而有所差异。

此外，为了保证测试结果的准确性，需要在实验过程中遵循严格的质量控制和标准化操作。

药敏试验的原理药敏试验原理药敏试验是一种用于确定细菌的抗生素敏感性的检测方法，主要用于指导临床上的抗菌治疗，以提高治疗效果和避免抗生素的滥用。

药敏试验的原理是通过将不同种类的抗生素与细菌进行反应，观察细菌的生长情况，来确定其对抗生素的敏感性或耐药性。

具体步骤包括以下几个方面：1. 培养细菌药敏试验前需要先从患者的样本中分离出目标细菌，并在培养基上进行培养，使其生长到所需的数量。

通常使用的培养基包括莫乃基、大肠杆菌平板以及血琼脂等。

2. 制备药物药敏试验所使用的药物通常是常见的抗生素，如青霉素、头孢菌素、氨基糖苷类等。

这些药物需要提前配置好，以确保其浓度的准确性和稳定性。

3. 稀释药物将药物稀释成不同的浓度，这些浓度范围从最小浓度开始，逐渐递增至最大浓度，通常会制备8个不同的浓度。

4. 加入细菌将药物加入到已经培养好的细菌中，让其在固定时间内进行吸收。

可以采用不同的方案，如将药物加到固定体积的培养基中，或是通过切开莫米德瓶，在其中加入药物溶液来进行。

5. 观察细菌的生长情况将稀释好的药物加入细菌中后，将其分配到不同的培养基上，通常使用微量进针或是延伸半硬质琼脂板法进行。

然后，将培养基放到恒温箱中进行培养，观察细菌的生长情况和形态。

6. 解读结果并进行分析根据细菌的生长情况来判断其对抗生素的敏感性或耐药性。

根据不同的药物浓度、细菌生长情况和形态，可以简单地确定细菌对药物的敏感性或耐药性。

药敏试验不仅可以指导临床上的抗菌治疗，而且可以在重要疾病爆发时，对于了解不同城市/城镇之间的细菌耐药率变化有帮助。

在药敏试验中，测定细菌对某种药物的敏感性或耐药性的方法有许多种，目前中国临床上主要采用两种常规药敏试验：纸片扩散法和微量进针法。

纸片扩散法纸片扩散法是一种常见的药敏试验方法，主要用于检测各种抗生素对细菌的敏感性。

该方法将已经稀释好的药物加在一个标准莫莫尼格琼脂板上，然后在细菌感染区域中放置一张含有药物的纸片，在培养室中孵化。

药敏实验的操作规程
《药敏实验操作规程》
一、实验目的
本实验旨在测试不同药物对细菌的药敏性，为临床用药提供参考。

二、实验材料
1. 不同种类的药物
2. 革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌培养基
3. 培养皿、消毒酒精、移液器、离心机等常规实验器材
三、实验步骤
1. 将革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌分别分装于培养皿中，均匀涂布于培养基表面。

2. 在分装有不同药物的培养皿上分别滴加一定量的药物液体，确保液体能够均匀覆盖培养基表面。

3. 将处理好的培养皿置于恒温培养箱中，设置合适的温度和时间，培养细菌。

4. 观察培养皿上不同区域的细菌生长情况，记录并比较各种药物对细菌的影响。

四、实验注意事项
1. 操作过程需注意无菌操作，避免外界污染。

2. 按照实验要求使用药物，注意用药量和涂布均匀性。

3. 实验完成后，将培养皿和实验用具进行正确处理，避免对环境造成污染。

五、实验结论
通过对培养皿上不同区域的细菌生长情况观察和分析比较，得出不同药物对细菌的药敏性，并据此提供临床用药建议。

六、实验意义
药敏实验的结果对临床治疗中的抗菌药物选择，以及对细菌感染病症的诊断和预防具有重要的指导意义。

以上为《药敏实验操作规程》，希望实验者严格按照规程操作，确保实验结果的准确性和可靠性。

一、实验背景细菌培养是微生物学实验中一项基本且重要的技术，通过对细菌进行培养，可以观察其生长特性、分离纯化、鉴定以及进行各种生化实验等。

本实验旨在通过平板划线法分离培养细菌，并对所分离的菌落进行形态观察、生化实验和药敏试验，以分析细菌的种类和特性。

二、实验材料与方法1. 实验材料（1）菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等。

（2）培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、营养肉汤培养基、琼脂平板等。

（3）试剂：酚红指示剂、葡萄糖、乳糖、靛基质、甲基红、V-P试剂、革兰氏染色液等。

2. 实验方法（1）平板划线法分离细菌：将待分离的细菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，用无菌接种环进行划线操作，重复划线直至菌落分离。

（2）观察菌落特征：观察分离的菌落形态、大小、颜色、边缘、表面等特征。

（3）进行生化实验：对分离的菌落进行葡萄糖发酵、乳糖发酵、靛基质试验、甲基红试验、V-P试验等生化实验。

（4）药敏试验：采用纸片扩散法进行药敏试验，观察细菌对多种抗生素的敏感性。

三、实验结果与分析1. 菌落特征通过平板划线法分离，我们得到了形态各异的菌落。

大肠杆菌菌落呈白色、光滑、圆形、边缘整齐；金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色、光滑、圆形、边缘整齐；枯草芽孢杆菌菌落呈白色、粗糙、圆形、边缘不整齐。

2. 生化实验结果（1）葡萄糖发酵：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均能发酵葡萄糖，产生红色沉淀；枯草芽孢杆菌不发酵葡萄糖。

（2）乳糖发酵：金黄色葡萄球菌能发酵乳糖，产生红色沉淀；大肠杆菌、枯草芽孢杆菌不发酵乳糖。

（3）靛基质试验：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均产生靛基质，使培养基呈蓝绿色；大肠杆菌不产生靛基质。

（4）甲基红试验：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性反应；大肠杆菌呈阳性反应。

（5）V-P试验：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性反应；大肠杆菌呈阳性反应。

3. 药敏试验结果大肠杆菌对氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松等抗生素敏感；金黄色葡萄球菌对万古霉素、利奈唑胺等抗生素敏感；枯草芽孢杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟等抗生素耐药。

药敏试验的原理以及方法药敏试验的原理以及方法概述药敏试验是一种常用的细菌学实验，用于检测细菌对不同抗生素的敏感性和耐药性。

药敏试验可以帮助医生选择最有效的治疗方案，防止治疗失败和耐药性产生。

本文将详细介绍药敏试验的原理和方法。

一、原理1. 细菌对抗生素的敏感性和耐药性抗生素是一类能够杀死或抑制细菌生长的化合物。

不同类型的细菌对不同种类的抗生素具有不同的敏感性和耐药性。

当使用抗生素治疗细菌感染时，如果选用了无效或低效的抗生素，会导致治疗失败或者使细菌产生耐药性。

2. 药敏试验原理药敏试验通过测定细菌对不同类型和浓度的抗生素的反应来确定其对该抗生素是否具有敏感性或耐药性。

根据这些结果，医生可以选择最合适的治疗方案。

二、方法1. 实验材料和设备（1）培养基：Muller-Hinton培养基、血琼脂培养基等。

（2）抗生素：根据需要选择不同种类和浓度的抗生素。

（3）试验菌株：采用已知菌株或临床分离细菌。

（4）无菌吸头、微量移液器、平板计数器、显微镜等。

2. 实验步骤（1）制备试验菌株将需检测的细菌接种于含有适宜营养物质的培养基中，在恰当的环境条件下进行培养，直至细菌生长到一定数量后可进行药敏试验。

（2）制备药敏板将已经制备好的Muller-Hinton培养基倒入消毒好的平板中，待其凝固后，按照需要在表面均匀涂布不同种类和浓度的抗生素。

每个药敏板上只能涂布一种抗生素。

（3）接种细菌将已经培养好的试验菌株用无菌吸头取出，均匀涂布于药敏板上。

注意避免重复接种和交叉污染。

（4）孵育将药敏板放入恰当的环境条件下进行孵育，一般为37℃，24小时。

（5）结果判定观察菌落生长情况，根据药敏试验的标准进行判定。

一般情况下，药敏试验结果分为以下几类：① 敏感（S）：菌落生长受到抑制，抑制直径大于等于抗生素标准值。

② 中介（I）：菌落生长受到轻度抑制，抑制直径在标准值范围内。

③ 耐药（R）：菌落生长不受影响或仅受到轻微影响，抑制直径小于标准值。