小鼠骨髓染色体制备及观察

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小鼠骨髓染色体制备及观察许多化学毒物具有遗传毒性基因突变：碱基置换和移码突变。

染色体畸变（structural chromosome aberration)：是指由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失或引起各种重排，从而出现染色体结构异常颜色体数目异常：整倍性和非整倍性改变。

染色体损伤的类型：☐染色体数目的改变①非整倍体：亚二倍体或超二倍体。

②整倍性改变：染色体成倍增加。

☐染色体结构的改变1.断裂和裂隙：2.微小体；较断片小而呈圆形。

3.有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。

4.无着丝点环：成环状结构。

5.插入/重复8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等整倍性畸变非整倍性畸变如何评价化合物的遗传毒性？鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）：是最常用的检查基因突变的方法。

检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力☐评价染色体损伤的试验方法包括：常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验2、实验原理☐有丝分裂：真核细胞的染色质凝集成染色体，复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向细胞的两极，从而产生两个染色体数目和遗传性相同的子细胞的一种细胞分裂的类型。

☐细胞周期：从一次有丝分裂完成时开始，到下一次有丝分裂结束时为止，成为一个细胞周期。

G1：从有丝分裂结束到DNA 复制之前；S: DNA 合成；G2：DNA 复制结束到有丝分裂开始；M ：有丝分裂期✓增殖群细胞，细胞始终保持分裂能力，持续进入分裂循环；✓不再增殖细胞，比如神经细胞；✓暂不增殖细胞，比如肝脏细胞。

端着丝粒染色体。

小鼠骨髓染色体标本制备实验报告一、实验目的掌握实验动物骨髓染色体标本的一般制备方法；识别有丝分裂中期相的染色体形态；了解小鼠染色体的形态特征及其数目。

二、实验原理用于染色体制备的细胞系需要是分裂增殖旺盛的。

一般临床采用外周血细胞培养，利用植物血凝素刺激淋巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞。

动物骨髓细胞是另一种具有旺盛分裂增殖能力的细胞。

在骨髓细胞中处于分裂相的细胞数目较多。

为了有效积累更多的有丝分裂中期细胞，可在收集骨髓细胞前用秋水仙素对其进行处理，其作用是抑制细胞分裂过程纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂停止于中期，可以积累中期分裂相细胞，以便于染色标本的制备。

制备过程中用KCL低渗处理，可使细胞体积膨大，染色体分散。

低渗后，需要用固定液固定染色体。

高位滴片和吹散滴液，可使染色体进一步分散。

用预冷的载玻片滴片后，迅速过火，可使染色体进一步扩散和固定，以便于制片和观察分析。

通过制备小鼠骨髓染色体标本，可以评价毒性物质对动物细胞染色体的影响。

本法可应用于环境致突变剂的检测，具有简单、直接、利于掌握的特点，普通实验室均可应用。

因此本法是检测有害物质对机体遗传物质损伤的常用实验方法之一。

三、实验步骤1、取材：小鼠股骨骨髓细胞取材前4小鼠于小鼠腹腔内注入0.04%的秋水仙素（0.01ml/10g）以积累中期分裂相。

颈椎脱臼法处死小鼠，取其两侧股骨。

将处死后的小鼠腹面朝上，用酒精棉球将皮毛擦拭干净，从外生殖口剪开皮肤，剃净肌肉及内脏，用酒精纱布清除其上粘附的肌肉及结缔组织。

剔除干净后，用剪刀剪去股骨两端少许骨垢及骨皮质，暴露出红骨髓，用5ml预温37℃的0.075M KCL分两次分别从股骨两端冲洗骨髓腔，将冲洗液收集到同一5ml刻度离心管中。

2、低渗：用吸管吸打混匀骨髓细胞，将离心管放置在37℃恒温箱中，低渗处理15-20分钟，使细胞膨胀，染色体分散。

3、预固定：低渗处理完，加入低渗细胞中2-3滴现配的现配的固定液（甲醇：冰醋酸=3:1），立即吹打均匀，平衡后离心，2500rpm，离心5min，去上清，留沉淀。

实验二小鼠骨髓细胞染色体标本制备实验目的：通过制备小鼠骨髓细胞染色体标本，了解染色体结构、形态和变异等方面的知识，为后续核型分析、染色体异常检测等实验打下基础。

实验原理：小鼠骨髓细胞染色体标本制备是指将小鼠骨髓组织中的细胞进行处理后制备成适合观察的染色体标本。

该标本制备方法包括细胞处理，染色体制备和染色体观察等环节。

1.小鼠骨髓细胞处理将小鼠放入固定夹，使用无菌注射器向小鼠腹腔注入适量的钾盐缓冲液（KCl，0.074mol/L）。

钾盐缓冲液的功能是使细胞发生肿胀，探头区别正常细胞和异常细胞。

此外，钾盐缓冲液也有不利的作用，可以导致一些染色体脱落或断裂。

接下来，在小鼠固定夹上进行剖腹，取出骨髓。

骨髓组织放置在一滴含有10%甘露醇的氯仿中进行易位。

在显微镜下观察细胞的形态结构，进行可行性检测。

2.染色体制备取干净的药片，滴入细胞悬液，热外片变性塔。

药片的材料使用高价值玻璃药片，这样可以保证药片平整和染色体不能和药片表面黏附。

加入甘醇一定要多加就能快速促进水分的蒸发，避免液体反应产生气泡而影响结果。

不需要太用力，在药片的表面轻轻涂抹，使液体均匀分布。

接下来，将药片吸入液、95%甲醇，以及3%乙酸中每个5分钟，直到药片完全干燥。

3.染色体观察将药片上的细胞标本置于显微镜上，根据染色体数目和形态等信息进行染色体分析。

在显微镜下观察染色体的特征，包括染色体数量、形态、大小、位置以及异常情况等。

对观察到的染色体进行记录和描述。

实验结果：通过对小鼠骨髓细胞进行染色体制备和检测，我们可以观察到染色体的结构、形态等方面的特征。

此外，通过对染色体的数量和形态进行观察，还可以发现染色体的变异情况，进一步了解染色体的异常情况。

在实际操作过程中，需要注意细胞处理和染色体制备的每一个环节，以保证实验的准确性和可靠性。

实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。

观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。

利用显微照相技术对所得切片进行照相。

二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。

因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。

进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。

如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。

这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。

对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。

对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。

人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。

三、实验用具及材料实验材料：体重20克左右的小鼠一只实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。

2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。

收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。

3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。

4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。

5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。