HE染色基本流程

常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准

优质标准 满分 质量缺陷减分

组织切面完整，内镜活检、穿 10 组织稍不完整：减1~3分；不完整：减4~10分；未达到规定切片数：减5分

刺标本切片数不少于6片

切片薄（3~5um）,厚薄均匀 10 切片厚（细胞重叠），影响诊断：减6~10分；厚薄不均匀：减3~5分

切片无刀痕、裂隙、颤痕 10 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：减2分; 有刀痕、裂隙、颤痕，影响诊断：减5分

切片平坦，无皱褶、折叠 10 有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减2分；有皱褶或折叠，影响诊断：各减5分

切片无污染物 10 有污染物：减10分

无气泡（切片与载玻片间/盖 10 有气泡：减3分；胶液外溢：减3分

玻片与切片、载玻片间），盖

玻片周围无胶液外溢

透明度好 10 透明度差：减1~3分；组织结构模糊：减5~7分

细胞核与细胞质染色对比清晰 10 细胞核着色灰淡或过蓝：减5分；红（细胞质）与蓝(细胞核)对比不清晰：减5分

切片无松散，裱贴位置适当 10 切片松散;减5分；切片裱贴位置不当：减5分

HE（Hematoxylin & Eosin）染色基本流程

苏木精—伊红染色法简称HE染色法，它是最常用的普通染色方法。苏木精是阳离子染料，将细胞核内的嗜碱性物质染成蓝紫色。伊红是阴离子染料，将细胞质和胶原纤维等染成粉红色。

1、二甲苯脱蜡 三道，每道30min

2、无水乙醇 两道，每道5min

3、95%乙醇 两道，每道5min

4、80%乙醇 5min

5、70%乙醇 5min

6、50%乙醇 5min

7、蒸馏水 3-5min

8、苏木素染色液 5-10min，根据染色结果和

气温调整时间

9、浸自来水冲洗多余的染色液

10、0.5%盐酸酒精分色（70%酒精配制） 3-10seconds

11、水洗蓝化 15-30min

12、50%乙醇 5min

13、70%乙醇 5min

14、80%乙醇 5min

15、伊红染色液（95%乙醇配制） 60seconds

16、95%乙醇 两道，每道5min

17、无水乙醇 两道，每道5min

18、乙醇+二甲苯（1:1） 5min

19、二甲苯 三道，每道5min

20、中性树胶封片

HE染色注意事项：

1. 染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，自来水中冲洗时间要长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2. 切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。

3. 切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。

4. 在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。

5. 切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。

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1、取材与固定：从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过

0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。Bouin氏液是常用的混合固定液配方：

苦味酸饱和液（

1.22％）75ml

xx25ml

冰醋酸5ml

2、脱水透明：

一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。

3、浸蜡包埋：

将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：

4、切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。

5、脱蜡染色：常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。

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HE染色过程是：①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

②酸水及氨水中分色，各数秒钟。

③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。

⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

6、脱水透明：染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。

7、封固：将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可使用。

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常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准

优质标准满分质量缺陷减分组织切面完整，内镜活检、穿10组织稍不完整：

减1~3分；不完整：

减4~10分；未达到规定切片数：

减5分刺标本切片数不少于6片

切片薄（3~5um）,厚薄均匀10切片厚（细胞重叠），影响诊断：

减6~10分；厚薄不均匀：

减3~5分切片无刀痕、裂隙、颤痕10有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：

减2分;有刀痕、裂隙、颤痕，影响诊断：

减5分切片平坦，无皱褶、折叠10有皱褶或折叠，尚不影响诊断：

各减2分；有皱褶或折叠，影响诊断：

各减5分切片无污染物10有污染物：

减10分

无气泡（切片与载玻片间/xx10有气泡：

减3分；胶液外溢：

减3分玻片与切片、载玻片间），盖

玻片周围无胶液外溢

透明度好10透明度差：

减1~3分；组织结构模糊：

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减5~7分细胞核与细胞质染色对比清晰10细胞核着色灰淡或过蓝：

减5分；红（细胞质）与蓝(细胞核)对比不清晰：

减5分切片无松散，裱贴位置适当10切片松散;减5分；切片裱贴位置不当：

减5分切片整洁，标签端正粘牢，编号清晰10切片不整洁：

减3分；标签粘贴不老牢：

减3分;编号不清晰：

减4分备注：

1.切片质量分级标准：

①甲级片：

≥90分（优）；②乙级片：75~89分（良）；③丙级片：60~74分（基本合格）；④丁级片：

≤59分（不合格）。

2.“二甲要求”：

切片优良率≥90%（C级）；切片优良率≥95%（B级）；切片优良率≥98%（A级）。