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促黄体生成素（LH）测定试剂盒（光激化学发光法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中促黄体生成素（LH）的含量。
说明：1. 校准品靶值批特异，详见定值单。
2. 质控品质控范围批特异，详见定值单。
2.1 外观试剂盒组分齐全，内外包装均完整，标签清晰，液体试剂无渗漏。
2.2 最低检出限试剂盒最低检出限应不高于1.0 IU/L。
2.3 准确性试剂盒内校准品与相应浓度的国家标准品150531同时进行测定，用三次样条插值模型拟合，要求两条剂量-反应曲线不显著偏离平行；以LH国家标准品为对照品，试剂盒内校准品的实测值与标示值的效价比应在0.900～1.100之间。
2.4 剂量-反应曲线的线性在[2.0，200 ]IU/L区间内，用三次样条插值模型拟合，剂量-反应曲线线性相关系数（r）应不小于0.9900。
2.5 精密度2.5.1 分析内精密度质控品测定结果的变异系数（CV）应不大于8.0%。
2.5.2 批间精密度在3批产品之间，质控品测定结果的变异系数（CV）应不大于15.0%。
2.6 质控品测定值同一套质控品的测定结果应在试剂盒规定的范围内。
2.7 特异性2.7.1 与促卵泡生成素（FSH）浓度为200IU/L的FSH，在本试剂盒上的测定结果应不高于最低检出限。
2.7.2 与促甲状腺素（TSH）浓度为200mIU/L的TSH，在本试剂盒上的测定结果应不高于最低检出限。
2.7.3 与人绒毛膜促性腺激素（hCG）浓度为1000 IU/L的hCG，在本试剂盒上的测定结果应不高于最低检出限。
2.8 稳定性试剂盒在2℃～8℃保存至效期末后3个月内，检验结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1、2.6 规定。
2.9 溯源性依据GB/T 21415-2008及有关规定提供所用校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，校准品溯源至国家标准品150531。
医疗器械产品技术要求编号：促黄体生成素（LH）测定试剂盒（化学发光法）2.性能指标2.1试剂盒性能指标2.1.1外观和物理检查试剂盒包装应完整，各组分应齐全，品名、批号和有效期应清晰。
各瓶试剂外观应完整，标签应清晰，无破损，无渗漏。
M 试剂为黄褐色磁珠悬浮液，沉淀属于正常现象；R 试剂为澄清透亮液体，没有沉淀和悬浮物。
2.1.2净含量试剂盒各规格净含量应符合表1的要求。
表1 净含量要求2.1.3最低检出限最低检出限应不高于 0.1IU/L。
2.1.4准确性试剂盒内校准品与相应浓度的国家标准品（150531）同时进行分析测定，用四参数拟合曲线进行数学模型拟合，要求两条剂量-反应曲线不显著偏离平行；以国家标准品（150531）为对照品，试剂盒内校准品的实测值与标示值的效价比应在 0.900～1.100 之间。
2.1.5剂量-反应曲线的线性线性范围 1IU/L～250IU/L，用四参数拟合曲线进行数学模型拟合，剂量-反应曲线线性相关系数 r 应不低于 0.9900。
2.1.6精密度2.1.6.1分析内精密度：变异系数（CV）应≤8%。
2.1.6.2批间精密度：变异系数（CV）应≤20%。
2.1.7特异性促卵泡生成激素（FSH，≥200IU/L）、促甲状腺激素（TSH，≥200mIU/L）及人绒毛膜促性腺激素（hCG，≥1000IU/L）在本试剂盒上测定结果应不高于最低检出量水平。
2.2校准品性能指标2.2.1外观校准品外包装应完整，标签标示应清晰，为澄清透亮液体。
2.2.2装量校准品装量应不少于标示量。
2.2.3校准品赋值准确性用经校准品校准的化学发光免疫分析仪检测国家标准品（150531），结果的偏倚在±10%内。
2.2.4均匀性a）瓶内均匀性：CV 值≤10%；b）瓶间均匀性：CV值≤10%。
2.3质控品性能指标2.3.1外观质控品外包装应完整，标签标示应清晰，为澄清透亮液体。
2.3.2装量质控品装量应不少于标示量。
核准日期：XXXX年X月X日睾酮定量检测试剂盒睾酮定量检测试剂盒（（磁分离酶联免疫法磁分离酶联免疫法））说明书【品名品名】】睾酮定量检测试剂盒（磁分离酶联免疫法） 【用途用途】】本品是为定量测定人血清或血浆内睾酮(T)而设计的。
本方法适用样品浓度范围为0.1-17ng/ml(0.3-59nmol/l)。
【概述和说明概述和说明】】睾酮(17β-羟-4-雄烯3-酮)是含19个碳原子的类固醇激素，分子量288.4道尔顿。
睾酮是由男性睾丸间质(莱迪希)细胞产生的主要雄性激素。
此外,肾上腺和女性卵巢有少量分泌［1,2,3］。
睾酮分泌入血液后，大部分以与蛋白结合的形式存在，占总量98%以上，其中约60%与性激素结合球蛋白(SHBG)结合，这部分与游离型激素间保持一动态平衡；约38%与白蛋白结合，此结合属非特异性结合，比较疏松，易于解离而进入靶组织；另有少量可与皮质醇结合球蛋白（CBG ）等结合。
睾丸的功能受两种垂体激素——促卵泡激素(FSH)和促黄体生成激素(LH)调节。
其中LH 直接作用于莱迪希细胞促使其分泌睾酮，对睾酮的生成起主要调控作用。
男性睾酮对胎儿期及青春期的男性性分化和生殖器官的发育，及男性整个生命过程中生殖系统和第二性征的生长、发育和维持起决定性作用［2］。
男性血清睾酮的含量测定，可用于研究和评价下列疾病如性腺机能减退、肾上腺/性腺肿瘤、性早熟和青春期延迟、睾丸雌化以及某些先天性疾病（如：先天性曲细精管发育不良综合症、肾上腺增生症、新生儿两性畸形等）［2,4,5］。
对于女性，血清睾酮含量的测定可用于初步诊断因服用雄激素或雄激素产生过量而引起的男性化、多囊卵巢症和多毛症等［6,7,8］。
【原理原理】】本方法为酶联免疫系统与磁性微粒分离技术相结合的一种测定法，并使用了一种高亲合力的抗体。
标本，质控品和标准品中的T (A)与限量的碱性磷酸酶标T 衍生物(B)同定量荧光素标T 多克隆抗体竞争结合(C)。
犬促黄体生成激素（LH）ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：E0441c预期应用ELISA法定量测定犬血清、血浆或其它相关液体中LH含量。
实验原理本试剂盒应用竞争抑制酶标免疫分析法测定标本中LH水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，固相抗体与一定量的生物素标记的LH和非标记抗原(标本或标准品)进行竞争抑制反应，待测定的标本量越多，抗体与生物素标记的LH结合就越少，反之结合就多。
最后再加入HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的LH呈负相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 mIU/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成100 mIU/mL，50 mIU/mL ，25 mIU/mL，12.5 mIU/mL，6.25 mIU/mL，3.12 mIU/mL，1.56 mIU/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 mIU/mL，临用前15分钟内配制。
如配制50 mIU/mL标准品：取0.5ml 100 mIU/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml/瓶。
4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如1ul 检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
促卵泡生成素（FSH）测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法)适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中的促卵泡生成素（FSH）的含量。
1.1包装规格：100测试/盒，200测试/盒1.2主要组成成分注：1.不同批号试剂盒中各组分不可以互换使用。
2.校准品和质控品具有批特异性，具体浓度见瓶签。
2.1 外观试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；磁微粒试剂摇匀后为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集；其他液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；包装标签应清晰、易识别。
2.2 装量各组分装量应不得低于标示体积。
2.3溯源性根据GB/T21415-2008及有关规定，提供试剂盒内校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容）。
2.4线性在[1.0，384.0 ]mIU/mL范围内，相关系数r应不低于0.9900。
2.5空白限应不高于0.5mIU/mL。
2.6准确度用FSH国家标准品（编号：150533）作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差应在±10.0%范围内。
2.7重复性变异系数（CV）应不大于8.0%。
2.8质控品的测定值质控品的测定结果均应在规定的质控范围内。
2.9批间差在三个不同批次产品之间，质控品测定结果的变异系数（CV）应不大于15.0%。
2.10特异性2.10.1 与促黄体生成素（LH）浓度不低于200 IU/L的LH，在本试剂盒上的测定结果应不高于0.5mIU/mL。
2.10.2 与促甲状腺素（TSH）浓度不低于200 mIU/L的TSH，在本试剂盒上的测定结果应不高于0.5mIU/mL。
2.10.3与人绒毛膜促性腺激素（HCG）浓度不低于20000 IU/L的HCG，在本试剂盒上的测定结果应不高于0.5mIU/mL。
2.11稳定性试剂盒在2~8℃保存，有效期为12个月，在有效期结束的前后两个月内，检测试剂盒的线性、空白限、准确度、重复性、质控品的测定值，应符合相应的规定。
促黄体生成素（LH）检测试纸（胶体金法）
适用范围：体外定性检测人尿液中促黄体生成素（LH）含量。
1.1 条型：1人份/袋；25人份/筒
1.2 板型：1人份/袋
1.3 笔型：1人份/袋
1.4 主要组成成分
试纸系由抗β-LH单克隆抗体和抗鼠IgG多克隆抗体分别固相于硝酸纤维膜，并与胶体金标记的抗α-LH单克隆抗体（固相）制成。
2.1 物理性状
2.1.1 外观：检测试纸条整洁完整、无毛刺、无破损、无污染，标签应清晰。
2.1.2 条宽：测试条宽度应≥2.5 mm。
2.1.3 液体移行速度：液体移行速度应≥10 mm/min。
2.2 灵敏度
分析灵敏度为10 mIU/ml LH标准品。
诊断灵敏度为25 mIU/ml LH标准品。
2.3 特异性
2.3.1 与FSH的交叉反应
检测浓度为200 mIU/ml的FSH，结果均应为阴性。
2.3.2 与TSH的交叉反应
检测浓度为250 µIU/ml的TSH，结果均应为阴性。
2.4 重复性
取同一批号的试纸10条，检测同一浓度的LH样品液，反应结果应一致，且显色度均一。
2.5 稳定性
2.5.1 加速稳定性：37℃条件下放置20天后的试纸进行检测，产品性能应符合2.1～2.4的要求。
2.5.2 效期稳定性：4℃～30℃条件下放置30个月后两个月内的试纸进行检测，产品性能应符合2.1～2.4的要求。
2.6 批间差
取3个批号的试纸检测浓度为25 mIU/ml 的LH标准品，反应结果应一致，显色应均一。
2.性能指标
2.1外观检查
外观应平整，材料附着应牢固，各组份应齐全。
2.2物理检查
膜条宽度应不小于 2.5mm；液体移行速度应不低于 10mm/min。
2.3最低检出限
检测 LH 参考品，最低检出限应不高于 5 mIU/mL。
2.4准确度
检测空白基质对照液检测线应不显色带，检测浓度为 5 mIU/mL、10 mIU/mL、25 mIU/mL、45 mIU/mL、65 mIU/mL 的LH 准确度参考品，检测线显色应与对应浓度色标颜色深度一致。
2.5阴性参考品符合率（特异性）
2.5.1与人促卵泡激素（hFSH）的交叉反应
检测浓度为 200 mIU/mL 的 FSH 参考品，检测线应不显色。
2.5.2与人促甲状腺激素（hTSH）的交叉反应
检测浓度为250 μIU/mL 的 TSH 参考品，检测线应不显色。
2.6重复性
随机抽取同批试剂 10 份，检测同一浓度的 LH 重复性参考品，检测线显色应均与对应浓度色标颜色深度一致，显色度均一。
2.7批间精密度
随机抽取三批试剂，对浓度为 5 mIU/mL 的LH 重复性参考品进行检测，重复检测10 次，检测线显色应均与对应浓度色标颜色深度一致，显色度均一。
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）产品货号：E-EL-H6019产品规格：96T/48T/24T人促黄体生成激素(LH)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书Human LH(Luteinizing Hormone) ELISA Kit使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话************QQ客服800110755具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其它相关生物液体中LH浓度。
灵敏度、检测范围、特异性和重复性●灵敏度：0.1mIU/mL。
●检测范围：0.16-10mIU/mL。
●特异性：可检测样本中的人LH,且与其它类似物无明显交叉反应。
●重复性：板内，板间变异系数均<10%。
检测原理本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。
用抗人LH抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的人LH会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。
后依次加入生物素化的抗人LH抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗人LH 抗体与结合在包被抗体上的人LH结合，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。
加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。
用酶标仪在450nm波长处测OD值，LH浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中LH的浓度。
试剂盒组成及保存未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒并按照下表中的条件分别保存各组分。
试剂体积以实际发货版说明书为准。
相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。
试验所需自备物品1.酶标仪(450nm波长滤光片)2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL3.37℃恒温箱，双蒸水或去离子水4.吸水纸5.加样槽注意事项1.试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
促黄体生成素（LH）测定试剂盒（磁微粒化学发光免疫分析法）适用范围：用于体外定量测定人血清中促黄体生成素的含量。
1.1规格50测试/盒、100测试/盒、200测试/盒，装量及组成见表1。
表1 试剂盒装量及组成2.1 外观2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；2.1.2 磁分离试剂摇匀后为均匀悬浊液，无明显凝集；2.1.3 液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；2.1.4 包装标签应清晰，无磨损。
2.2准确性试剂盒内校准品与相应浓度的国家标准品（标准品编号：150531-201003）同时进行分析测定，用四参数拟合，要求两条剂量-反应曲线不显著偏离平行（t检验）；以国家标准品为对照品，试剂盒内校准品的实测值与标示值的效价比应在0.9～1.1之间。
2.3最低检出限应不大于0.1mIU/ml。
2.4剂量—反应曲线的线性在0.2mIU/ml～250mIU/ml的测量范围内，用四参数拟合，剂量—反应曲线线性相关系数r应≥0.99。
2.5精密度2.5.1 分析内精密度用质控品1和质控品2作为样本各重复检测10次，其变异系数（CV%）应不大于8%。
2.5.2 分析间精密度在三次独立分析之间，质控品1和质控品2测定结果的变异系数（CV%）应不大于10%。
注：仅限于手工操作的试剂盒。
2.6质控品测定值测值应在质控范围内。
2.7批间差在三个批次的产品之间，质控品1和质控品2测定结果的变异系数（CV%）应不大于15%。
2.8分析特异性2.8.1 与促卵泡生成激素(FSH)浓度不低于2000IU/L的FSH，在本试剂盒上测定的结果应不高于0.1 mIU/ml。
2.8.2 与促甲状腺激素（TSH）浓度不低于200mIU/L的TSH，在本试剂盒上测定的结果应不高于0.1 mIU/ml。
2.8.3 与人绒毛膜促性腺激素（hCG）浓度不低于200000mIU/ml的hCG，在本试剂盒上测定的结果应不高于0.1 mIU/ml。
鸡促黄体生成激素LH使用说明书产品编号：本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！试剂组成名称规格数量保存包被平底微孔板96孔1可拆卸板2-8℃密封冷藏酶结合物6毫升1瓶2-8℃冷藏标准品1毫升6瓶2-8℃冷藏显色剂A6毫升1瓶2-8℃冷藏显色剂B6毫升1瓶2-8℃避光冷藏终止液6毫升1瓶2-8℃冷藏浓缩洗涤液（100倍10毫升1瓶2-8℃冷藏稀释）使用说明书1份自备物品1.酶标仪（尽量提前预热）2.微量加液器、吸头3.蒸馏水或去离子水以及滤纸操作步骤1.取出试剂盒，于室温（20-25℃）放置15-30分钟。
实验过程应在室温（20-25℃）内进行。
2.取出酶标板，按照标准品的次序分别加入100μl的标准品溶液于空白微孔中。
3.空白微孔中加入100μl的样品，空白对照加入100μl的蒸馏水；4.在各孔中加入50μl的酶标记溶液；（不含空白对照孔）5.将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应1小时；（在孵育箱中保持稳定的温度与湿度）6.充分清洗酶标板3-5次，保持各孔有充足的水压；（浓缩洗涤液以1：100的比例与蒸馏水稀释）7.酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干；8.各孔加入显色剂A、B液各50μl；（不含空白对照孔）9.20-25℃下避光反应15分钟；10.各孔加入50μl终止液，终止反应；结果判断1.30分钟内在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值；2.百分结合率计算：设S0管计数为B0，各标准管或样品管计数为B，非特异管计数为NSB，则百分结合率计算公式如下：B/B0=(B－NSB)/(B0－NSB)×100%3.logit计算:各标准点或样品管的logit值计算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1－B/B0)4.将标准品的OD均值与标准品0点的OD均相除，为标准点的百分结合率，在log-logit坐标纸上绘图。
5.Log-logit双对数标准曲线：坐标纸上横轴从左至右第一个1-9表示为第一个10进位，第二个1-9表示为第二个10进位。
第三个1-9表示为第三个10进位。
坐标纸纵轴为百分比（1-99），即各标准吸光值的百分结合率。
取一条通过各点的直线。
要求尽可能多的点在线上，同时剩余的点均匀分布在直线的两边。
样品也同样由吸光值计算百分结合率，再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点，此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度，无须换算。
6.人工处理：以标准浓度取log值为横坐标，对应的logit值为纵坐标在普通坐标纸上或以标准浓度为横坐标，对应的B/B0为纵坐标在logit-log坐标纸上画出标准曲线（理想化时是一条直线）。
根据待测样品的B/B0可以从坐标纸上查出样品的浓度值。
如果使用普通坐标纸，查出的数值应取反对数才是最后的浓度值。
7.自动处理：使用logit-log或四参数数据处理模式，由电脑自动计算得出结果。
8.敏感度：0.1ng/ml；9.图例Horm m o ne E L I SA KitLuteini i z i ng HorC h i c k en Lutein96T e stsalogu u e Nu Num m be ber r:Ca Cat t alogS to tor r e all r e ag age e n ts at2-8°CTHER R A P E U T I C OR D I A G N OS OSTI TI TIC CARCH H U SE O N L Y.N O T F OR THERAT T O R Y R E S E ARCF OR L A B O RANNI I N G!AP APP P L I C A T I O N S!P LE LEA A S E R E A D T H R O U GH E N T I R E P R O C E DURDURE E BE BEF F O R E BE BEG G I NNTEND D ED USEI N TENThis BOGOO LH ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at450nm using a spectrophotometer.In order to measure the concentration of LH in the sample,this LH ELISA Kit includes a set of calibration standards.The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus LH concentration. The concentration of LH in the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.PRI PRIN N C I PLE O F T H E AS ASSS AY The coated well immunoenzymatic assay for the quantitative measurement of serum LH utilizes a monoclonal anti-LH and a LH-HRP conjugate.The assay sample and buffer are incubated together with anti-LH antibody coated plate for sixty and washed.The diluted LH-HRP conjugate is then added to each well and incubated.After the incubation period,the wells are decanted and washed three times.The wells are then incubated with a substrate for the enzyme.The product of the enzyme-substrate reaction forms a blue colored complex.Finally,a stopping solution is added to stop the reaction,which will then turn the solution yellow.The intensity of color is measured spectrophotometrically at 450nm in a microplate reader.The intensity of the color is inversely proportional to the LH concentration since LH from samples and LH-HRP conjugate compete for the anti-LH antibody binding site.Since the number of sites is limited,as more sites are occupied by LH from the sample,fewer sites are left to bind LH-HRP conjugate.Standards of known LH concentrations are run concurrently with the samples being assayed and a standard curve is plotted relating the intensity of the color (Optical Density)to the concentration of LH.The unknown LHconcentration in each sample is interpolated from this curve.RE REAG AG AGENTS ENTS PR PRO O V I D ED All reagents provided are stored at 2-8°C.Refer to the expiration date on the label.1.MICROTITER PLATE 96wells2.ENZYME CONJUGATE 6.0mL 1vial3.STANDARD.10ng/ml 1vial4.STANDARD.2 2.5ng/ml 1vial5.STANDARD.3 5.0ng/ml 1vial6.STANDARD.410ng/ml 1vial7.STANDARD.525ng/ml 1vial8.STANDARD.650ng/ml 1vial9.SUBSTRATE A 6.0mL 1vial10.SUBSTRATE B 6.0mL 1vial11.STOP SOLUTION 6.0mL 1vial12.WASH SOLUTION x10010mL 1vial13.Instruction 1M ATE ATER R I A LS RE REQQ U I RED B U T N O T S UPPLIED 1.Microplate reader capable of measuring absorbance at 450nm.2.Precision pipettes to deliver 2ml to 1ml volumes.3.Adjustable 10ml -100ml pipettes for reagent preparation.4.Adjustable 10ml -100ml pipettes for reagent preparation.5.100ml and 1liter graduated cylinders.6.Calibrated adjustable precision pipettes,preferably with disposable plastic tips.(Amanifold multi-channel pipette is desirable for large assays.)7.Absorbent paper.8.37°C incubator.9.Distilled or deionized water.10.Data analysis and graphing software.Graph paper:linear(Cartesian),log-log or semi-log,or log-logit as desired.11.Tubes to prepare standard or sample dilutions.CED D U R EAS ASS S AY PR PRO O CE1.Prepare all Standards before starting assay procedure(see Preparation Reagents).It is recommended that all Standards and Samples be added1.in duplicate to the Microtiter Plate.2.First,secure the desired number of coated wells in the holder,then add100μL ofS t a n d a r d s or Sa Sam m p les to the appropriate well of the antibody pre-coated Microtiter Plate.3.Add50μL of C o n j u g a te to each well.Mix plete mixing in this step isimportant.Cover and incubate for1hours at37°C.4.Prepare Substrate Solution no more than15minutes before end of incubation(seePreparation of Reagents).5.Wash the Microtiter Plate using one of the specified methods indicated below:6.Manual Washing:Remove incubation mixture by aspirating contents of the plate into asink or proper waste ing a squirt bottle,fill each well completely with distilled or de-ionized water,then aspirate contents of the plate into a sink or proper waste container.Repeat this procedure four more times for a total of FIVE washes.After final wash,invert plate,and blot dry by hitting plate onto absorbent paper or paper towels until no moisture appears.Note:Hold the sides of the plate frame firmly hen washing the plate to assure that all strips remain securely in frame.7.Automated Washing:Aspirate all wells,then wash plate FIVE times using distilled orde-ionized water.Always adjust your washer to aspirate as much liquid as possible and set fill volume at350μL/well/wash(range:350-400μL).After final wash,invert plate, and blot dry by hitting plate onto absorbent paper or paper towels until no moisture appears.It is recommended that the washer be set for a soaking time of10seconds or shaking time of5seconds between washes.8.Add50μL Substrate A&B to each well.Cover and incubate for15minutes at20-25°C.9.Add50μL of Stop Solution to each well.Mix well.10.Read the Optical Density(O.D.)at450nm using a microtiter plate reader within30minutes.LATI I O N O F RESULTSLCU U LATB OGOOGOO O C A LC1.Calculate the mean absorbance value A450for each set of reference standards and samples.2.Divide the average A450value for each standard,control and test sample by the averageA450of standard0and multiply by100to obtain%B/B0for each sample.3.Prepare a standard curve by plotting the average absorbance of each standard versus thecorresponding concentrations of the standards on linear-log graph paper or the%B/B0 value for each standard versus the corresponding concentration of the standard on linear-log or logit-log graph pape r.logit=ln(B/B0)/(1－B/B0)4.Any values obtained for diluted samples must be further converted by applying theappropriate dilution factor in the calculations.5.The standard density is a X,the B/B0is a Y,sitting to mark the paper in the logit-log updraw a standard curve.According to the B/B0that need to be measured the sample can from sit to mark the density value that the paper looks up the sample up.6.The sensitivity by this assay is0.1ng/ml7.The standard curve presented here is an example of the data typically produced with thiskit;however,your results will not be identical to these.8.Standard curve。
