基因转染技术
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瞬时转染实验步骤全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:瞬时转染实验是一种常用的基因转染技术,可用于将外源DNA或RNA导入到目标细胞中,以研究基因表达和功能。
本文将介绍瞬时转染实验的步骤及注意事项。
一、实验前准备1.1 制备转染试剂:根据所需的转染试剂种类,准备相应的试剂。
常用的转染试剂包括有机溶剂转染试剂(如Lipofectamine 2000)、阳离子聚合物转染试剂(如Polyethylenimine,简称PEI)等。
1.2 制备转染质粒:准备含有目标基因的转染质粒。
转染质粒应进行质粒提取、纯化并测序确认。
1.3 培养细胞:细胞应在培养皿中充分培养至70%~90%的浓度,以保证转染效率。
1.4 预热培养基:将足够的培养基提前预热至37℃,以用于细胞培养和转染。
二、转染操作步骤2.1 向细胞培养皿中加入转染试剂:按照转染试剂的使用说明书,向培养皿中加入适量的转染试剂,并在无血清培养基中混合均匀。
2.2 加入转染质粒:将准备好的转染质粒溶液滴加入培养皿中,注意避免空气泡。
2.3 孵育细胞:将培养皿放置在37℃的培养箱中孵育一定时间,通常为4~6小时。
2.4 更换培养基:在转染后适当时间内更换含有血清的培养基,以保证细胞正常生长。
2.5 收获样品:根据实验设计和研究目的,选择合适的时间点收获转染后的细胞样品。
三、注意事项3.1 转染试剂浓度:转染试剂的浓度应根据实验目的和细胞类型进行优化,以达到最佳的转染效果。
3.2 转染时间和转染效率:转染时间过长或过短都可能影响转染效果,应根据实际情况进行调整。
3.3 质粒浓度和纯度:转染质粒应具有足够的纯度和浓度,以确保转染效果。
3.4 细胞密度和状态:细胞应在良好的状态下进行转染,过高或过低的细胞密度都会影响转染效果。
3.5 实验控制组:应设置适当的对照组,以进行比较和验证实验结果的可靠性。
总结:瞬时转染实验是一种常用的基因转染技术,通过适当的实验操作步骤和注意事项,可获得可靠的实验结果。
sirna转染原理siRNA转染原理。
siRNA(small interfering RNA)是一种短链RNA分子,可以在细胞内特异性地沉默基因表达。
siRNA转染作为一种常用的实验技术,被广泛应用于基因功能研究、药物靶点筛选和疾病治疗等领域。
siRNA转染的原理是通过siRNA分子的引导,将特定基因的mRNA降解,从而抑制该基因的表达。
下面将详细介绍siRNA转染的原理及其在实验中的应用。
首先,siRNA转染的原理是基于RNA干扰(RNA interference,RNAi)的机制。
当siRNA分子进入细胞内后,它会与RISC(RNA-induced silencing complex)结合,形成siRNA-RISC复合物。
siRNA-RISC复合物会识别并结合到靶基因的mRNA上,然后RISC中的核酸酶活性将靶mRNA特异性降解,从而导致该基因的表达受到抑制。
其次,siRNA转染的关键在于siRNA分子的设计。
siRNA通常由21-23个碱基组成,其中包括一个“sense”链和一个“antisense”链。
这两条链通过互补配对形成双链结构,其中antisense链与靶基因的mRNA序列互补配对,从而介导mRNA的降解。
在siRNA设计过程中,需要避免与其他基因的mRNA序列互补配对,以确保siRNA的特异性。
另外,siRNA转染的效率受到细胞内siRNA释放和稳定性的影响。
siRNA需要通过转染试剂或载体进入细胞内,然后被释放到细胞质中。
在细胞内,siRNA还需要避免被核酸酶降解,以保持其稳定性和活性。
因此,选择合适的转染试剂和siRNA转染条件对于siRNA转染的效果至关重要。
最后,siRNA转染在实验中的应用包括基因沉默实验、基因功能研究、药物靶点筛选和疾病治疗等。
通过siRNA转染,研究人员可以有针对性地沉默特定基因,观察其对细胞功能和生物学过程的影响,从而揭示基因的功能和调控机制。
此外,siRNA转染还被应用于药物靶点的筛选和疾病治疗研究中,为新药的研发和临床治疗提供重要的实验依据。
转染和转化的区别转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。
其中,核酸包括DNA(质粒和线性双链DNA),反义寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。
基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究(基因表达调控,基因功能,信号转导和药物筛选研究)和基因治疗研究。
基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。
早期的磷酸钙转染法转染效率很低,且对很多细胞株无效,因此不能满足很多科研工作的需要。
目前,最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物,它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征,容易透过细胞膜。
其中,阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率,然而在体内,它迅速被血清清除,在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,这将导致高水平的毒性,因此,在很大程度上限制了其应用。
由于阳离子脂质体的局限性,阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。
转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内,使之获得新的遗传特性的一种方法。
它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。
受体细胞经过一些特殊方法(如:电击法,CaCl2等化学试剂法)处理后,使细胞膜的通透性发生变化,成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。
进入细胞的DNA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。
由外来DNA引起生物体遗传性状改变的过程称为转化(transformation)。
噬菌体常常可感染细菌并将其DNA注入细菌体内,也可引起细菌遗传性状的改变。
通过感染方式将外来DNA 引入宿主细胞,并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfection)。
转染是转化的一种特殊形式。
基因工程:有目的的通过分子克隆技术,人为的操作改造基因,改变生物遗传性状的系列过程。
载体:能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA分子。
转染和转化的区别转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。
其中,核酸包括DNA(质粒和线性双链DNA),反义寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。
基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究(基因表达调控,基因功能,信号转导和药物筛选研究)和基因治疗研究。
基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。
早期的磷酸钙转染法转染效率很低,且对很多细胞株无效,因此不能满足很多科研工作的需要。
目前,最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物,它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征,容易透过细胞膜。
其中,阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率,然而在体内,它迅速被血清清除,在肺组织内累积,诱发强烈的抗炎反应,这将导致高水平的毒性,因此,在很大程度上限制了其应用。
由于阳离子脂质体的局限性,阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。
转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组D NA导入细菌体内,使之获得新的遗传特性的一种方法。
它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。
受体细胞经过一些特殊方法(如:电击法,CaCl2等化学试剂法)处理后,使细胞膜的通透性发生变化,成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。
进入细胞的D NA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。
由外来DNA引起生物体遗传性状改变的过程称为转化(transfo rmati on)。
噬菌体常常可感染细菌并将其DNA注入细菌体内,也可引起细菌遗传性状的改变。
通过感染方式将外来DNA引入宿主细胞,并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfectio n)。
植物转基因技术的原理和方法
1、植物转基因技术的原理
植物转基因技术是指将外源DNA片段插入到植物细胞的过程,从而改变植物的表型特征。
在植物转基因技术中,将外源DNA插入到植物细胞的过程包括以下几个步骤:
(1) DNA片段的生产和收集:DNA片段的生产和收集是通过一系列的生物技术手段来实现的,比如PCR扩增技术、染色体复制,等等。
(2)特異性克隆:特異性克隆是一种利用抗原受体系统的分子生物学技术,主要是通过聚合酶链反应的方法,将无菌的DNA片段植入到宿主细胞中,从而使改变细胞表型性状的抗原受体获得潜在的克隆特异来源。
(3) 载体特异性转染:载体特异性转染是将DNA片段植入到宿主细胞中的过程,它通常是利用哺乳动物质粒等载体将外源DNA片段植入到宿主细胞中。
(4) 转化:转化是植物细胞在受到DNA片段植入后,能够形成含有外源基因的植物的过程。
2、植物转基因技术的方法
(1) 诱导细胞抗性:植物转基因技术可以利用一些诱导剂,如多聚糖、双链RNA等,通过诱导植物细胞的自然抗性,让其增加免疫反应及抗外源性抗原的能力,从而提高转基因植物的转化效率。
(2) 共价结合技术:共价结合技术是一种利用化学方法将外源DNA植入植物细胞的技术,它通常利用某种活性稀释剂将DNA片段与
植物细胞表面形成稳定的共价结合,从而使外源DNA片段能够植入宿主细胞。
(3) 转化抗性:转化抗性是一种利用抗生素来抑制植物细胞的自然抗性,从而促进植物细胞内部外源DNA的转化。
一般常用的抗生素有青霉素和环丙沙星。
(4) 小麦内含体技术:小麦内含体技术是一种利用小麦内含体将外源DNA植入植物细胞的技术,它通常利用小麦内含体外质壁偶联(ECC)促进外源DNA的转化。
细胞sirna转染操作流程细胞siRNA转染操作流程一、引言细胞siRNA转染是一种常用的基因沉默技术,通过引入特定的小干扰RNA (siRNA) 分子来抑制目标基因的表达。
本文将介绍细胞siRNA转染的操作流程,以及该技术的应用和优势。
二、材料与方法1. 细胞培养:选择合适的细胞系,如人类癌细胞系HeLa,细胞应保持在优良的培养条件下,并处于快速增殖期。
2. 转染试剂:选择适合的转染试剂,如lipofectamine 2000等,根据试剂说明书进行操作。
3. siRNA设计与合成:根据目标基因序列设计合适的siRNA,确保siRNA具有高效的靶向作用和沉默效果。
4. 细胞培养基和缓冲液:准备含有适当浓度的无血清培养基和缓冲液。
三、操作流程1. 处理细胞:将细胞用适量的培养基悬浮在培养皿中,使细胞密度达到合适的转染浓度,一般为60-80%的细胞密度。
2. siRNA与转染试剂复合:将设计好的siRNA与转染试剂按照试剂说明书中的比例混合,并在室温下静置一段时间使其形成复合物。
3. 转染操作:将复合物缓慢滴加到细胞培养皿中,轻轻摇晃培养皿以保证复合物均匀分布在细胞上。
4. 培养细胞:将培养皿放入培养箱中,以适当的条件(如37℃,5% CO2)培养细胞一定时间,以便siRNA能够有效进入细胞并起到沉默目标基因的作用。
5. 细胞分析:根据实验需要,在转染后一定时间内收集细胞,进行相应的实验分析,如蛋白质检测、细胞增殖实验等。
四、应用与优势细胞siRNA转染技术广泛应用于生命科学研究中,可用于研究基因功能、新药靶点筛选、疾病机制探究等领域。
该技术的优势在于操作简便、效率高、靶向性强,并且可用于多种细胞系,适用范围广泛。
五、结论细胞siRNA转染是一种重要的基因沉默技术,通过引入siRNA分子抑制目标基因的表达。
本文介绍了细胞siRNA转染的操作流程和相关应用及优势。
随着该技术的不断发展,相信它将在生命科学研究中发挥越来越重要的作用。
慢病毒转染原理慢病毒转染是一种常用的基因转染方法,适用于长期表达外源基因的研究。
慢病毒转染原理主要是利用慢病毒载体将外源基因导入宿主细胞,并将其整合入宿主细胞基因组中,从而实现外源基因的稳定表达。
本文将从慢病毒转染的原理、步骤和应用等方面进行介绍。
慢病毒转染原理。
慢病毒转染的原理主要包括以下几个步骤,首先,将外源基因插入慢病毒载体中,构建成慢病毒表达载体;然后,将慢病毒表达载体转染至包装细胞中,利用包装细胞的辅助病毒蛋白包装慢病毒颗粒;最后,将包装好的慢病毒颗粒用于感染目标细胞,外源基因被整合入宿主细胞基因组中,实现稳定表达。
慢病毒转染步骤。
慢病毒转染的步骤包括慢病毒载体构建、包装细胞培养、病毒颗粒包装和目标细胞感染等。
首先,构建慢病毒表达载体时,需要选择合适的慢病毒载体和适当的启动子,将外源基因插入载体中,并经过序列分析和酶切验证。
其次,包装细胞的培养和病毒颗粒包装是慢病毒转染的关键步骤,需要选择合适的包装细胞系,转染慢病毒表达载体并培养包装细胞,最终收集包装好的慢病毒颗粒。
最后,利用包装好的慢病毒颗粒感染目标细胞,实现外源基因的稳定表达。
慢病毒转染应用。
慢病毒转染在基因功能研究、基因治疗和细胞工程等领域具有广泛的应用。
在基因功能研究中,可以利用慢病毒转染实现基因敲除、过表达和靶向修饰等,进而研究基因在生理和病理过程中的功能。
在基因治疗中,慢病毒转染可以用于治疗遗传性疾病、肿瘤和传染病等,为基因治疗提供了重要的技术支持。
在细胞工程中,慢病毒转染可以用于改良细胞系,提高细胞的表达稳定性和产量,满足生物制药和工业生产的需要。
总结。
慢病毒转染是一种重要的基因转染方法,具有稳定、高效、广泛应用等特点。
通过慢病毒转染,可以实现外源基因在宿主细胞中的稳定表达,为基因功能研究、基因治疗和细胞工程等领域提供了重要的技术支持。
因此,深入理解慢病毒转染的原理和步骤,对于开展相关研究具有重要的意义。
质粒转染过程
质粒转染是一种基因工程技术,它是将外源质粒DNA传递到细胞内,使其能够被细胞所识别和表达。
转染质粒的方法主要包括化学法、电穿孔法、病毒载体法等。
下面将对这些方法进行详细介绍。
1. 化学法
化学法是一种常见的质粒转染方法,它的原理是利用化学物质破坏细
胞膜,使质粒DNA进入细胞内。
化学法的优点是易操作且适用于多种
细胞类型,但其缺点是转染效率较低。
2. 电穿孔法
电穿孔法是一种利用电场作用使细胞膜通透的转染方法,它的原理是
使用电极在细胞上产生高压脉冲电场,使细胞膜出现短暂的孔洞,从
而将质粒DNA传输到细胞内。
该方法的优点是转染效率高,但需要专
业仪器支持。
3. 病毒载体法
病毒载体法是一种利用病毒向靶细胞传递质粒DNA的转染方法。
在该
方法中,质粒DNA被包裹在病毒粒子中,病毒粒子通过靶细胞膜的结
合和透过性进入细胞内,释放质粒DNA。
病毒载体法的优点是转染效
率高,但其缺点是安全风险较高。
总的来说,不同的转染方法适用于不同的应用场景,需要根据具体情
况进行选择。
在进行质粒转染时,还需要注意合适的质粒浓度、转染时间和细胞密度等因素,以提高转染效率和细胞存活率。
基因转染技术发展历程
基因转染技术是一种将外源基因导入细胞内的技术,它在生物学研究和生物医学领域具有重要意义。
基因转染技术的发展历程可以追溯到20世纪70年代,以下是基因转染技术的发展历程:
1. 早期基因转染技术,最早的基因转染技术是利用病毒作为基因载体将外源基因导入细胞内。
1970年代初,科学家们开始尝试使用病毒载体将外源DNA导入哺乳动物细胞,这一技术奠定了基因转染技术的基础。
2. 质粒转染技术的发展,随着对质粒结构和功能的深入研究,科学家们逐渐意识到质粒可以作为有效的基因载体。
1980年代,质粒转染技术开始得到广泛应用,这种技术通过将外源DNA插入质粒并转染到细胞内,实现了基因的稳定表达。
3. 脂质体转染技术的出现,1990年代初,脂质体转染技术成为基因转染领域的重要突破。
脂质体是一种能够与DNA结合并在细胞膜上形成脂质双层结构的微小囊泡,科学家们发现将外源DNA包裹在脂质体内可以有效地将基因导入细胞内。
4. 离子转染技术的改进,离子转染技术是另一种常用的基因转染方法,它利用带正电荷的离子与DNA形成复合物,通过与细胞膜相互作用将DNA导入细胞内。
近年来,离子转染技术在基因转染领域得到了不断改进和优化,提高了转染效率和细胞存活率。
总的来说,基因转染技术经过多年的发展和完善,已经成为生物学研究和生物医学应用中不可或缺的重要工具。
随着技术的不断进步,基因转染技术将继续发挥重要作用,并为生命科学领域的发展和创新提供强大支持。
基因编辑中的基因表达和调控研究方法基因编辑是一种重要的生物技术,它能够精确地修改生物体的基因组,从而改变特定基因的表达和调控。
在基因编辑中,研究人员通常需要对基因表达和调控进行深入的研究,以实现对生物体的精准操控。
本文将介绍一些常用的基因表达和调控研究方法。
1.转基因技术转基因技术是将外源基因导入目标生物体中,从而实现对基因表达和调控的研究。
常见的转基因技术包括质粒转染、病毒载体介导转导等。
质粒转染是将目标基因构建到质粒中,然后导入目标细胞中,通过质粒中的启动子、响应元件等调控序列实现基因表达和调控。
病毒载体介导转导则是利用改造的病毒作为载体,将目标基因导入宿主细胞中,实现基因的高效表达。
2.CRISPR/Cas9技术CRISPR/Cas9技术是一种较新且热门的基因编辑技术,它可以精确地修改生物体的基因组。
在CRISPR/Cas9系统中,Cas9是一种内切酶,它能够与RNA引导序列结合,并识别目标基因组的特定序列。
通过设计合适的引导RNA,可以将Cas9引导到目标基因上,并在该处切断DNA链,从而实现对基因组的编辑。
CRISPR/Cas9技术不仅可以用于基因敲除、核苷酸突变等基因组编辑,还可以用于基因的激活和抑制,从而控制基因的表达和调控。
3.转录组学研究转录组学是对某一特定细胞或生物样品中所有基因的转录产物(mRNA)的系统性研究。
转录组学可通过RNA测序技术,获得细胞或生物样品中的mRNA序列信息。
利用转录组学研究方法,研究人员可以了解目标细胞或样本中所有基因的表达情况,包括已知基因和未知基因。
这些数据可以帮助研究人员了解基因的表达水平、相互关系以及调控网络,并进一步挖掘重要的基因和调控因子。
4.蛋白质组学研究蛋白质组学研究是对某一特定细胞或生物样品中所有蛋白质的系统性研究。
通过蛋白质组学研究方法,研究人员可以了解目标细胞或样本中所有蛋白质的表达水平、亚细胞定位以及相互作用关系。
蛋白质组学研究可以从蛋白质的角度帮助研究人员了解基因的表达和调控情况。
基因转染技术
基因转染技术是一种通过将外源基因导入到细胞中,使其表达新的蛋白质或RNA的方法。
该技术在生物学和医学研究中广泛应用,可以用于基因治疗、癌症研究等领域。
常用的基因转染技术包括质粒转染、病毒载体转染等。
质粒转染是将外源DNA通过电穿孔或化学方法导入目标细胞中,使其表达新的蛋白质或RNA;病毒载体转染则是利用病毒作为载体向目标细胞传递外源基因。
基因转染技术的应用不仅可以帮助我们深入研究基因的功能和机制,还可以为疾病治疗提供新的思路和方法。
转染步骤及经验(精华)一、基础理论转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。
分类:物理介导方法:电穿孔法、显微注射和基因枪;化学介导方法:如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法:有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。
病毒介导的转染技术,是目前转染效率最高的方法,同时具有细胞毒性很低的优势。
但是,病毒转染方法的准备程序复杂,常常对细胞类型有很强的选择性,在一般实验室中很难普及。
其它物理和化学介导的转染方法,则各有其特点。
需要指出的一点,无论采用哪种转染技术,要获得最优的转染结果,可能都需要对转染条件进行优化。
影响转染效率的因素很多,从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态到转染方法的操作细节(见后文)。
二、转染操作流程(以常用的6孔板为例)(1) 细胞培养:取6孔培养板,以3x104/cm2密度铺板,37℃5%CO2培养箱中培养至70%~90%汇合。
(不同细胞略有不同,根据实验室优化的条件进行,汇合过分,转染后不利筛选细胞)。
(2) 转染液制备:在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液:用不含血清培养基稀释1-10μg DNA,终量100μL,B液:用不含血清培养基稀释对应量的转染试剂,终量100μL;轻轻混合A、B液(1:1混匀),室温中置15分钟,稍后会出现微浊现象,但并不妨碍转染。
(3) 转染准备:用2mL不含血清培养液漂洗两次,再加入2mL不含血清及PS的培养液。
(4) 转染:把A/B复合物缓缓加入培养液中(缓慢滴加),轻轻摇匀,37℃温箱置6~8小时,吸除无血清转染液,换入正常培养液继续培养。
三、转染注意事项1. 血清A. DNA-阳离子脂质体复合物形成时不能含血清,因为血清会影响复合物的形成。
B.一般细胞对无血清培养可以耐受几个小时没问题,转染用的培养液可以含血清也可以不加,但血清一度曾被认为会降低转染效率,转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。
hela细胞电转条件解释说明以及概述1. 引言1.1 概述在生物学研究领域,细胞是一个重要的研究对象。
近年来,为了更深入地了解细胞的功能和特性,科学家们不断发展新的实验技术和方法。
其中,电转技术作为一种有效的基因转染手段,在细胞研究中得到了广泛应用。
本文将对Hela细胞进行电转实验条件进行解释说明,并介绍其概述、历史、特点、应用价值和争议等方面内容。
同时,还将对电转技术的原理、过程、条件要求及其在细胞研究中的应用和发展趋势进行简要介绍。
1.2 文章结构本文分为五个主要部分:引言、Hela细胞简介、电转技术简介、Hela细胞的电转实验条件解释说明以及结论与展望。
引言部分主要对文章进行概述,并介绍电转技术在生物学研究中的重要性。
Hela细胞简介部分将详细介绍Hela细胞的定义和历史,以及其特点和应用领域。
同时,还将探讨Hela细胞所带来的价值和争议。
电转技术简介部分将对电转技术的原理、背景及其在细胞研究中的过程、条件要求和发展趋势进行简要介绍。
这一部分将为后续Hela细胞的电转实验条件解释说明提供基础知识。
Hela细胞的电转实验条件解释说明部分将解析具体的实验操作和参数优化,包括转染基因的选择与构建、细胞培养条件及支持物质控制要点以及电转参数优化与影响因素分析等内容。
结论与展望部分将对全文进行总结,并提出未来研究的展望与建议。
通过本文的研究,我们可以更全面地理解Hela细胞的特性和应用,并为相关领域的进一步研究提供参考依据。
1.3 目的本文旨在详细介绍Hela细胞在电转实验中所需的条件,通过对电转技术原理和Hela细胞特点的阐述,提供实验操作指南,并为该领域未来研究方向提供展望和建议。
同时,希望通过本文使读者们能够更好地了解和应用电转技术在细胞研究中的意义和作用。
2. Hela细胞简介:2.1 定义和历史:Hela细胞是一种人类宫颈癌细胞系,最早由美国科学家乔治·格威普斯(George Gey)在1951年从艾尔中心查理医院的病患名叫海拉(Henrietta Lacks)的宫颈癌组织中分离出来。