试验1细胞大小测定
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实验一细胞的形态观察及其大小测量【实验目的】1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察,了解细胞的形态及其显微结构;2、学习显微测量的方法,对细胞的大小有一直观认识。
【实验用品】普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片等。
【实验材料】小白鼠肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;洋葱。
【实验内容和方法】(一)细胞形态观察l、动物细胞的观察(1)人肝细胞切片:在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。
注意肝细胞之间的界限、细胞的形状、细胞核的形状和数量、核仁的形状和数量、细胞质的形态构造以及细胞质和细胞核染色的区别。
(2)鸡血细胞涂片的观察:注意观察血细胞的组成;红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察(1)取蚕豆叶片横切片的观察:注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。
(2)洋葱表皮细胞的形态观察:用镊子撕取洋葱表皮,滴一滴蒸馏水,盖上盖玻片。
在显微镜下观察的形态和结构。
(二)细胞的大小和测量1、测微尺的使用目镜测微尺是一块圆形玻片,中心刻有一尺,长5~10mm,分成50~100格。
每格的实际长度因不同物镜的放大率和不同镜筒长度而异。
镜台测微尺是在一块载玻片中央,用树胶封固一圆形的测微尺,长1mm或2mm,分成100格或200格,每格的实际长度0.01mm(10μm)。
当用目镜测微尺来测量细胞的大小时,必须先用镜台测微尺核实目镜测微尺每一格的长度。
方法如下:(1)卸下目镜的上透镜,将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上,再旋上目镜的上透镜。
(2)将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好,使测微尺分度位于视野中央。
调焦至能看清镜台测微尺的分度。
(3)小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊,可转动目镜上透镜进行调焦),使两尺左边的一直线重合,然后由左向右找出两尺另一次重合的直线(如图所示)。
(4)记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。
按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm:123测定目镜测微尺每格实长的图解 上尺:目镜测微尺;下尺:镜台测微尺镜台测微尺的格数目镜测微尺每格的微米数= —————————×10 目镜测微尺的格数例如,图中镜台测微尺1格=目镜测微尺6格,代入公式得:目镜测微尺每格=1/6×10μm=1.66μm(5)取下镜台测微尺,换上需要测量的玻片标本,用目镜测微尺测量标本。
实验一红细胞计数一、实验目的:掌握红细胞计数原理及技术。
二、实验原理:用等渗稀释液将血液稀释一定倍数,充入计数池中,于显微镜下计数一定体积内的红细胞数,经过换算示得每升血液内的红细胞数。
三、实验器材及试剂:显微镜、血红蛋白吸管、计数板、盖玻片、生理盐水。
四、实验操作:1、取试管1支,加稀释液3.98ml或1.99ml。
2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血10微升。
3、擦去管尖外部余血、轻轻注入红细胞稀释液底部,再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次,立即摇匀。
4、将计数池与盖玻片用软布料擦净,将盖玻片覆盖于计数池上。
5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液,充入计数池中。
6、静止2-3分钟,待经红细胞下沉后,用高倍镜或低倍镜计数中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数。
五、计算N(五个中方格内RBC数)×5×10×106×200=N×1012个/升×5:表示5个中方格内RBC数换算为1个大方格内RBC数× 10:1个大方格容积、0.1ul、换算为1ul内RBC数× 106:1ul换算为1升内红细胞数× 200:稀释倍数六、正常参考值正常参考值:成年男性:4.00-5.50×1012/升成年女性:3.50-5.00×1012/升新生儿: 6.00-7.00×1012/升实验二血红蛋白测定一、实验目的:掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。
二、实验原理:血液在血红蛋白转化液中溶血后,除SHb外各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白,再与CNˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋(HicN)。
HicN最大吸收峰540nm,最小吸收波谷504nm,在特定的条件下,毫摩尔消光系数为44L.mmol-1 .cm-1 ,因此根据标本的吸光度,即求得血红蛋白浓度。
三、实验操作:1、取指血20ul,加到5ml血红蛋白转化液中,混匀,静止5分钟。
2020届高中生物人教版必修1实验专练:(12)探究细胞大小与物质运输的关系1、将3cm×3cmx6cm的含酚酞的琼脂块切成边长分别为1cm、2cm、3cm的正方体。
将3种琼脂块放在装有NaOH溶液的烧杯内,淹没浸泡10分钟。
下列说法错误的是( )A.3种琼脂块NaOH扩散速率一样B.3种琼脂块中,边长为3cm的正方体NaOH扩散速率最大C.琼脂块的表面积与体积之比随着琼脂块的增大而减小D.NaOH扩散的体积与整个琼脂块的体积之比随着琼脂块的增大而减小2、探究细胞表面积与体积的关系的实验原理不包括( )A.NaOH与酚酞相遇,呈现紫红色B.以琼脂块的大小表示细胞大小C.NaOH的扩散深度表示吸收速率D.NaOH的扩散体积与整个琼脂块的体积比表示细胞吸收物质的速率3、将一块3cm×3cm×6cm的含酚酞的琼脂块切成三块边长分别为1cm、2cm、3cm的正方体。
将3块琼脂块放在装有NaOH的烧杯内,淹没浸泡10分钟。
下列说法正确的是( )A.随琼脂块增大, NaOH扩散速率增大B.随琼脂块增大,琼脂块的表面积与体积之比增大C.随琼脂块的增大,琼脂块中变红的体积增大D.随琼脂块增大,琼脂块中变红的体积所占的比例增大4、探究细胞大小与物质运输关系的实验原理不包括( )A.酚酞遇到NaOH呈现紫红色反应B.以琼脂块的大小表示细胞大小C.以NaOH溶液在琼脂块中的扩散深度表示物质运输效率D.以NaOH溶液在琼脂块中的扩散体积比表示物质运输效率5、下列对有关“细胞大小与物质运输的关系”模拟实验的叙述,正确的是( )A.细胞体积越大,物质运输的效率越高B.NaOH和酚酞相遇,呈砖红色C.在相同时间内,NaOH在每一琼脂块内扩散的深度不同D.琼脂块的表面积与体积之比随琼脂块的增大而减小6、下列有关叙述正确的是( )A.在模拟细胞大小与物质运输的关系时,琼脂块表面积与体积之比是自变量,NaOH扩散速度是因变量B.细胞越小,细胞表面积相对就越大,细胞的物质运输效率越高,所以细胞体积越小越好C.琼脂块的表面积与体积之比随着琼脂块的增大而增大D.在相同时间内,物质扩散进细胞的体积与细胞的总体积之比可反应细胞的物质运输的效率7、将边长分别为1 cm、2 cm、3cm的含有酚酞的琼脂块浸入0.1%的NaOH的溶液中(NaOH 溶液遇酚酞呈紫红色),10 分钟后取出琼脂块用吸水纸吸干表面溶液,切开后测量紫红色层的厚度,计算出紫红色部分的体积占整个琼脂块体积的比值分别是a,b,c下列对的a,b,c大小比较,说法正确的是( )A.a=b=cB.a>b>cC.a<b<cD.不能确定8、将1块含酚酞的琼脂块切成3 块边长分别为1 cm、2 cm、3 cm的正方体,将3块琼脂块放在装有NaOH的烧杯内,淹没浸泡10分钟。
血液生理实验实验一血液的组成和红细胞比容的测定实验一:血液的组成和红细胞比容的测定一、实验目的:1.了解血液的组成和各组成部分的功能。
2.掌握红细胞比容的测定方法及其临床意义。
二、实验原理:血液是由血浆和血细胞组成的混合物,其中血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。
红细胞在血液中占有较大比例,其主要功能是运输氧气和二氧化碳。
红细胞比容是指红细胞在血液中所占的容积百分比,是反映血液中红细胞数量及血液浓度的指标之一。
三、实验步骤:1.准备实验材料:5ml移液管、10ml离心管、离心机、电子天平、称量纸、记号笔、标签纸、移液器、生理盐水、抗凝剂。
2.取5ml全血样本,用移液管准确加入10ml生理盐水中,摇匀制成混合液。
3.用电子天平称量混合液的总重量,并记录。
4.将混合液转移至离心管中,加入抗凝剂,标记好标签,放入离心机中,以3000r/min的速度离心5分钟。
5.离心结束后,将离心管取出,用移液器将上层血浆移出,称量剩余的血细胞及血浆重量,并记录。
6.根据公式计算红细胞比容:红细胞比容=血细胞重量/(血细胞重量+血浆重量)×100%。
四、实验结果:1.混合液的总重量为()g。
2.离心后的血细胞及血浆重量为()g。
3.根据公式计算得到红细胞比容为()%。
五、实验总结:通过本实验,我们了解了血液的组成和各组成部分的功能,掌握了红细胞比容的测定方法及其临床意义。
通过观察和测量全血样本中的红细胞比容,可以反映血液中红细胞的相对数量及血液的浓度,对于了解患者的血液循环状态、指导临床治疗具有一定的参考价值。
此外,实验过程中需要注意操作的规范性和准确性,以保证实验结果的可靠性。
例如,在称量血细胞及血浆重量时,需确保样品已经完全转移至称量纸上,避免误差的产生。
同时,在计算红细胞比容时,还需注意单位的换算和公式的正确使用。
六、注意事项:1.实验前需对实验材料进行充分的准备和检查,确保实验所需的试剂、仪器等均符合要求。
实验一细胞的形态观察及其大小测量一、实验目的1. 观察细胞形态。
2. 掌握细胞大小的测量方法。
二、实验原理细胞是生命的基本单位,是生物体内最基本的形态结构。
由于其极小的体积,需要借助显微镜来观察。
在显微镜下,细胞呈透明圆形或长方形结构,包括细胞核和细胞质两部分。
细胞大小的测量是衡量细胞形态大小的一种方法,一般使用显微镜和标尺等工具进行测量。
三、实验器材和试剂1. 显微镜:10×、40×、100×梯形物镜、10×和16×目镜。
2. 小片玻片。
3. 缺口玻璃滴管。
4. 普通培养皿。
5. 滴定管。
6. 甲醛:10%浓度。
四、实验步骤1. 取用甲醛液将到手的细胞样本处理,使其纤维化、固定,并保持在透明的状态。
2. 将处理均匀的细胞悬液滴于小片玻片上。
在表面打一个平口,倒入水或细胞培养液。
3. 轻轻地将另一片小片玻片斜放在溶液上,使其尽量靠近悬液表面,并且使两片玻璃片之间尽量少的包含气泡。
4. 用载物架夹住两片玻璃片,置于显微镜镜头下面,用低倍物镜先扫描一遍细胞涂片下方,保证顶点在物镜的中央,并移动至最佳观察位置。
5. 同时调整镜片高低位,目镜内外的距离,使物镜滚轮表面接触到目镜。
6. 在目镜中调整微动盘,让细胞涂片视野平滑,移动目镜板,看到悬浮细胞。
7. 分别使用不同倍数的物镜对细胞的形态进行观察。
一般来说,使用10×的物镜可以清楚地观察到细胞核和周围细胞质的形态,而使用40×和100×的物镜则可更详细地观察到细胞内部结构和细节部位。
8. 用计数尺、标尺等工具对已观察到的细胞大小进行测量。
9. 完成实验后,将玻片倒掉,用纯净水或极其减量的甲醛显微镜氧化置换去甲醛。
再用纯净水进行冲洗。
五、实验要点1. 操作时要谨慎,避免对显微镜等仪器进行过度推拉等操作。
2. 使用时需注意玻璃片的干净和平整。
3. 需要防止玻璃片之间捏入气泡。
4. 细胞涂片的厚度应适当,过厚则不便进行观察,过薄则会付着小颗粒和杂质,影响观察效果。
2020届高中生物人教版必修1实验专练:(12)探究细胞大小与物质运输的关系1、将3cm×3cmx6cm的含酚酞的琼脂块切成边长分别为1cm、2cm、3cm的正方体。
将3种琼脂块放在装有NaOH溶液的烧杯内,淹没浸泡10分钟。
下列说法错误的是( )A.3种琼脂块NaOH扩散速率一样B.3种琼脂块中,边长为3cm的正方体NaOH扩散速率最大C.琼脂块的表面积与体积之比随着琼脂块的增大而减小D.NaOH扩散的体积与整个琼脂块的体积之比随着琼脂块的增大而减小2、探究细胞表面积与体积的关系的实验原理不包括( )A.NaOH与酚酞相遇,呈现紫红色B.以琼脂块的大小表示细胞大小C.NaOH的扩散深度表示吸收速率D.NaOH的扩散体积与整个琼脂块的体积比表示细胞吸收物质的速率3、将一块3cm×3cm×6cm的含酚酞的琼脂块切成三块边长分别为1cm、2cm、3cm的正方体。
将3块琼脂块放在装有NaOH的烧杯内,淹没浸泡10分钟。
下列说法正确的是( )A.随琼脂块增大, NaOH扩散速率增大B.随琼脂块增大,琼脂块的表面积与体积之比增大C.随琼脂块的增大,琼脂块中变红的体积增大D.随琼脂块增大,琼脂块中变红的体积所占的比例增大4、探究细胞大小与物质运输关系的实验原理不包括( )A.酚酞遇到NaOH呈现紫红色反应B.以琼脂块的大小表示细胞大小C.以NaOH溶液在琼脂块中的扩散深度表示物质运输效率D.以NaOH溶液在琼脂块中的扩散体积比表示物质运输效率5、下列对有关“细胞大小与物质运输的关系”模拟实验的叙述,正确的是( )A.细胞体积越大,物质运输的效率越高B.NaOH和酚酞相遇,呈砖红色C.在相同时间内,NaOH在每一琼脂块内扩散的深度不同D.琼脂块的表面积与体积之比随琼脂块的增大而减小6、下列有关叙述正确的是( )A.在模拟细胞大小与物质运输的关系时,琼脂块表面积与体积之比是自变量,NaOH扩散速度是因变量B.细胞越小,细胞表面积相对就越大,细胞的物质运输效率越高,所以细胞体积越小越好C.琼脂块的表面积与体积之比随着琼脂块的增大而增大D.在相同时间内,物质扩散进细胞的体积与细胞的总体积之比可反应细胞的物质运输的效率7、将边长分别为1 cm、2 cm、3cm的含有酚酞的琼脂块浸入0.1%的NaOH的溶液中(NaOH 溶液遇酚酞呈紫红色),10 分钟后取出琼脂块用吸水纸吸干表面溶液,切开后测量紫红色层的厚度,计算出紫红色部分的体积占整个琼脂块体积的比值分别是a,b,c下列对的a,b,c大小比较,说法正确的是( )A.a=b=cB.a>b>cC.a<b<cD.不能确定8、将1块含酚酞的琼脂块切成3 块边长分别为1 cm、2 cm、3 cm的正方体,将3块琼脂块放在装有NaOH的烧杯内,淹没浸泡10分钟。
高中生物实验串讲教案
教学目标:通过实验,使学生了解细胞的大小,掌握测量细胞大小的方法。
实验器材与试剂:
1. 显微镜
2. 盖玻片
3. 酵母细胞悬液
4. 尺子
实验步骤:
1. 将盖玻片放在显微镜的台面上,调节显微镜的倍率为40倍。
2. 在盖玻片上滴一滴酵母细胞悬液。
3. 用显微镜观察盖玻片上的酵母细胞,找到一个看起来较为典型的细胞。
4. 用尺子测量这个细胞的大小,记录下来。
5. 重复以上步骤,至少测量10个不同的酵母细胞。
6. 将测量结果汇总,计算平均细胞大小。
实验结果分析:
1. 分析不同细胞的大小差异,探讨可能的原因。
2. 讨论细胞大小与功能之间的关系。
拓展实验:
1. 观察植物细胞和动物细胞的大小差异。
2. 探究细胞大小与生物体大小之间的关系。
实验注意事项:
1. 操作显微镜时要小心轻放,避免损坏。
2. 测量细胞大小时要保持准确,避免误差。
3. 实验后要将器材及时清洗归还。
实验后总结:
通过本实验,学生不仅了解了细胞的大小,还掌握了测量细胞大小的方法,提高了他们对生物细胞结构的认识和理解。
同时,培养了学生的观察能力和实验操作能力。
使用测微尺观测细胞的大小(一)细胞是生物体的基本构成部分,它们的大小和形状对于生物体的生长和发展都有着重要的影响。
使用测微尺观测细胞大小是一种应用广泛的技术方法,其原理是利用光学显微镜等设备,将细胞放在玻片上,然后通过一系列计算和测量得出细胞的大小和形状。
以下是本文对于该技术方法的详细阐述。
一、测微尺的原理及常见类型测微尺是一种测量长度的工具,其原理是利用目镜和物镜的联动,通过目镜测量物镜内刻度盘上的观察线和待测对象之间的距离,再通过计算转动的度数,得出物体的大小。
常见的测微尺有直线测微尺和角度测微尺两种,直线测微尺主要针对线状物体进行测量,而角度测微尺则适合测量角度和曲线。
二、使用测微尺观测细胞大小的实验步骤1. 准备细胞悬液和玻片,将细胞放在玻片上。
2. 预热显微镜,调整合适的光源和目镜。
3. 将细胞放在显微镜下,调整物镜的焦距,使细胞清晰可见。
4. 用直线测微尺或角度测微尺,在显微镜尺度盘上作标记。
5. 通过旋转刻度盘,测量细胞的长度和宽度。
6. 根据细胞的形状和大小,计算细胞的体积和表面积等。
三、使用测微尺观测细胞大小的意义1. 判断细胞的大小和形状,了解其生长状态和所处环境。
2. 帮助科学家研究细胞的结构和生物学功能。
3. 应用于医学领域,研究细胞的分裂和癌变等过程。
4. 用于判断食品和环境的安全性,通过测量细胞大小和形状,了解所处环境的是否健康。
总之,使用测微尺观测细胞大小是一项重要的实验技术,可以帮助科学家研究细胞的结构和功能,进而提高人类对于生命的认识。
同时,使用测微尺进行细胞大小的测量,对于医学治疗和保障食品安全等问题也有着非常重要的作用,在未来的科技发展中将具有广阔的应用前景。
实验报告1(红细胞计数)
报告实验名称:红细胞计数实验内容:血液的采集;血液的稀释;红细胞计数实验目标:掌握红细胞计数的原理、方法及其临床意义实验方法、结果及讨论:
一、实验方法1、血液的采集。
2、稀释用5ml吸管吸取红细胞稀释液3、98ml置于试管中。
用沙利氏吸血管吸取全血样品至20μl刻度处。
擦去吸管外壁粘附的血液,将血液吹入试管底部,再吹、吸数次,以洗净沙利氏管内粘附的血细胞,然后试管颠倒混合数次。
3、冲液用毛细吸管吸取已稀释好的血液,放于计数室与盖玻片接触处,让血液稀释液自然流入计数室中静置1~
2min。
4、计数用低倍镜,光线要稍暗些,找到计数室的格后,把中央的大方格置于视野之中,然后转用高倍镜。
在中央大方格内选择四角与最中的五个中方格,每个中方格有16个小方格,所以共计数80个小方格。
计数时注意压在左边双线上的红细胞计在内,压在右边双线上的红细胞则不计数在内;同样,压在上线的计入,压在下线的不计入,此所谓“数左不数右,数上不数下”的计数法则。
二、实验结果每1升血液中的红细胞数=5个中方格内红细胞数/80400(小方格总数)200(稀释倍数)10(计数室深度)106=5个中方格内红细胞数1010=91012个/L
三、结果讨论送检鸡的红细胞数量相对性增多,可疑的疾病有腹泻、急性胃肠炎、渗出性胸膜炎与腹膜炎、热射病与日射病、某些发热性疾病及传染病等。
《细胞生物学》实验(养殖:1——3;生技、海科:1——6)实验一细胞器的分离、提取与测量【目的】掌握叶绿体分离的一般原理和方法,学习用测微尺测量细胞与细胞器大小的测定方法,并了解应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。
【原理】叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器,能发生特有的能量转换。
利用低速离心机可以分离叶绿体,其分离在等渗溶液(0.35 mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行,目的是为了防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。
将匀浆液在1000r/min离心,去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞,然后,3000 r/min离心,可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。
在室温下进行分离要迅速。
用显微测微尺可以直接测量细胞大小,精确度较高。
显微测微尺分为物镜测微尺和目镜测微尺2种。
目镜测微尺是1块小玻璃圆片(可放人目镜内,其大小正好卡人目镜筒内),在圆片正中央刻有1cm长的直线,直线上均匀分为100小格或50小格,每小格的长度,随目镜和物镜的放大倍数而变动。
物镜测微尺是一块特制的玻璃载片,载片中央刻有一条1mm长的直线,均匀地刻分为100个小格,每小格为1/100mm (为10μm),用一小圆形玻璃盖片封盖着,物镜测微尺较目镜测微尺小格的间距精确,通过目镜测微尺测量细胞与细胞器的大小(小格数),然后换以物镜测微尺校测小格数的精确数值,即为测量的细胞与细胞器大小结果。
某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态,从激发态回到基态时,就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光),这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后,可直接发出荧光(称为自发荧光),如叶绿素的火红色荧光。
有的生物材料本身不发荧光,但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光(称为间接荧光),如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。
【材料】菠菜叶片。
【实验用品】1.试剂:蒸馏水,0.35 mol/L氯化钠溶液,0.01% 吖啶橙。
2.器材:普通离心机,组织捣碎机,天平,荧光显微镜,显微镜,载玻片,盖玻片,镊子,接种针,滤纸,试管,试管架,移液管,滴管,烧杯,无荧光载片,盖玻片,离心管,目镜测微尺,物镜测微尺,培养皿。
【实验步骤】1.选取新鲜的菠菜嫩叶,洗擦干后去除叶梗及粗脉,称3g于0.35 mol/L氯化钠溶液45mL中,置人组织捣碎机或研钵中。
2.利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀浆3-5min,或研磨成匀浆。
3.用6层纱布过滤,滤液盛于烧杯中。
4.取滤液4 mL在1000 r/min下离心2min,弃去沉淀。
5.将上清液在3000 r/min下离心5 min,弃去上清液,沉淀即为叶绿体(混有部分细胞核)。
6.沉淀用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮。
7.取叶绿体悬液1滴置于载玻片上,加盖玻片后用普通光学显微镜观察、绘图。
8.将物镜测微尺放在载物台上,校准目镜测微长度:在低倍显微镜下,移动镜台测微尺和转动目镜测微尺,使两者刻度平行,并使两者间某段的起、止线完全重复。
数出两条重合线之间的格数,即可求出目镜测微尺每格的相应长度。
目镜测微尺与物镜测微尺两者重合点的距离越长,所测得的数字越准确。
用同样方法分别测出高倍物镜下,目镜测微尺每格的相对长度。
计算目镜测微尺每格的长度:例如,测得某显微镜的目镜测微尺50格相当于物镜测微尺7格,则目镜测微尺每格长度为:(7X10μm)/50=1.4μm/格。
9.测量5~10个叶绿体的长轴和短轴,制表格表示测量结果。
10.取菠菜叶片于研钵中,加少量丙酮,研磨匀浆、过滤,滤液置于试管中,顺着太阳光观察,再将试管避开直射光,比较颜色的变化。
【实验报告】1.绘制普通光学显微镜下观察的叶绿体形态示意图。
2.用测微尺测量叶绿体的大小后,制表格表示测量结果。
3.记录观察的荧光现象,分析结果。
【思考题】1.分离叶绿体的实验原理是什么?2.操作过程中应注意什么?实验二细胞原生质流动的观察【目的】观察植物细胞质中原生质流动现象,了解影响细胞质中原生质流动的因素。
【原理】在多种植物的细胞中都能观察到原生质的流动现象,它是细胞活动强弱的重要指标。
细胞原生质流动现象的产生,是细胞骨架中微丝肌动蛋白与肌球蛋白相互滑动的结果,此过程要消耗能量,受各种因素诸如温度、渗透压及各种离子的影响。
【材料】黑藻(也称水王荪、轮叶黑藻)叶,轮藻,洋葱鳞茎(最好使用萌发的鳞茎)或鸭跖草雄蕊花丝或小麦幼苗的根毛(种子在培养皿中湿滤纸上萌发,当根长到1~2cm,有许多根毛时最合适)。
【实验用品】1.试剂:1mol/L氟化钠,1 mol/L丙二酸钠,0.17mol/L2,4—二硝基酚(DPN)。
2.器具:显微镜,载玻片,盖玻片,尖头镊子,刀片。
【实验步骤】1.取1块干净的载玻片,在中央滴1~2滴蒸馏水;取紫鸭跖草(或其它材料)花1朵,用镊子取1枚雄蕊,迅速置载玻片水滴中,切去花蕊,加盖玻片,用显微镜低倍物镜(10X)进行观察,注意花丝周围附着许多“含珠链”状的花丝毛,每1粒“念珠”是1个单毛细胞。
2.转换高倍物镜(40X)观察,可以看到细胞质中的颗粒和显著的细胞质,细胞质之间是液泡,内含水溶性花青素。
注意观察花丝毛细胞核的部位,哪一个部位见到细胞质流动,其流动的速度如何。
3.用吸水纸吸干水,加1滴1 mol/L氟化钠,注意观察细胞质停止流动的时间。
细胞质停止流动后,用吸水纸吸去氟化钠,滴人清水,注意流动是否能恢复。
4.依上述操作,加1滴1 mol/L丙二酸钠或0.17 mol/L 2,4—二硝基酚,注意观察细胞质流动速度是否发生改变;用吸水纸吸去药液后,加入蒸馏水,再观察细胞质流动的变化。
【注意事项】取材时用洋葱鳞片内表皮、鸭跖草雄蕊花丝上的表皮毛、轮藻幼嫩的节间细胞进行的显微观察,如一时找不到原生质流动的细胞,可将载玻片置于温箱里或白炽灯泡上很短时间提高温度后再观察。
【实验报告】1.绘制紫鸭跖草花丝细胞(或其它材料)原生质流动图。
2.记录加入各种化学试剂后细胞原生质流动停止的时间,并分析原因。
【思考题】1、你如何理解细胞原生质流动原理?2、影响细胞原生质流动的因素有哪些?实验三细胞骨架的观察【目的】掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法,观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。
【原理】植物细胞用适当浓度的TritonX-100处理后,可破坏细胞内蛋白质,但细胞骨架系统的蛋白质却保护完好。
考马斯亮蓝R250(Coomassie brilliant blue R250)是一种蛋白质染料,处理后的材料用考马斯亮蓝R250染色后,用光学显微镜观察,可以见到一种网状结构,即是细胞骨架结构。
【材料】洋葱鳞叶。
【实验用品】1.试剂:(1) 2%考马斯亮蓝R250染色液:称考马斯亮蓝R250 1g,溶于250mL无水乙醇中,加冰醋酸35mL,再加蒸馏水至500mL。
(2) 磷酸缓冲液(pH 6.8):6.8mmol/L磷酸缓冲液,调至pH6.8。
(3) M缓冲液(pH7.2):50 mmol/L咪唑、50 mmol/L氯化钾、0.5mmol/L氯化镁、1mmol/L乙二醇双乙胺醚、0.1 mmol/L乙二胺四乙酸、1 mmol/L琉基乙醇,调至pH7.2。
(4) 1%TritonX-100:用M缓冲液配制。
(5) 3%戊二醛:用M缓冲液配制。
(6) 中性树胶。
2.器具:显微镜,烧杯,玻璃滴管,载玻片,盖玻片,镊子。
【实验步骤】1.用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片(约1cm2大小若干片),置于50mL烧杯中,加入pH6.8磷酸缓冲液,使其下沉。
2.吸去磷酸缓冲液,用1%TritonX-100处理20min。
3.吸去TritonX-100,用M缓冲液洗3次,每次5min。
4.用3%戊二醛固定30min。
5.磷酸缓冲液(pH 6.8)洗3次,每次5 min。
6.0.2%考马斯亮蓝R250染色10min。
7.蒸馏水洗2次,然后将样品置于载玻片上,加盖玻片,于普通光学显微镜下观察。
8.如果染色效果好,则可依次用50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、正丁醇、二甲苯处理样品,各5min。
然后将样品平展于载玻片上,加l滴中性树胶,盖上盖玻片封片,制成永久切片。
【实验报告】描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图。
【思考题】1、组成细胞骨架的成分有哪些?2、本实验制片中,TritonX-100有何作用?实验四细胞中多糖和过氧化物酶的定位【目的】掌握细胞中多糖和过氧化物酶的组织化学定位检测方法。
【原理】高碘酸-席夫试剂反应,简称PAS反应。
主要是利用高碘酸作为强氧化剂,能作用于含乙二醇基的糖,使其碳链断裂而形成乙二醛,氧化得到的醛基与Schiff试剂中的无色亚硫酸品红结合而生成红色化合物的取代染料而达到定位的目的,见下图:过氧化物酶体系能把联苯胺氧化成蓝色或棕色产物,反应式如下:中间产物联苯胺蓝是不稳定的,无需酶作用即可氧化为棕色。
【材料】马铃薯块茎、洋葱根尖或洋葱鳞茎。
【实验用品】1、试剂:(1)高碘酸溶液:高碘酸(HIO4.2H2O)0.4g95%乙醇35ml1/3mol/L 乙酸钠溶液5ml蒸馏水10ml(2)Schiff试剂:取0.5克研细的碱性品红于100毫升沸腾的蒸馏水中,搅拌使其充分溶解,当染液冷却至50℃时过滤,在滤液内加入1NHCl 10毫升。
然后放置,使其继续冷却至25℃时,再加无水偏重亚硫酸钠或无水偏重亚硫酸钾1克,置阴暗处约24小时后,染液褪至无色或略带淡黄色,然后加入0.5克活性炭,用力振荡1min,最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中,密封保存于4℃冰箱中。
可保存数日,用时升至室温,如溶液带红色或紫色,可加入少许无水偏重亚硫酸钠或无水偏重亚硫酸钾,使之再转变为无色时,仍可再用。
0.8克+蒸馏水20毫升+0.2M醋酸钠10毫升+纯酒精70毫升(3)亚硫酸水:取200ml自来水,加10ml 10%偏重亚硫酸钠或无水偏重亚硫酸钾水溶液和10ml 1mol/LHCl,三者于使用前混匀。
(4)70%乙醇。
(5)联苯胺水溶液:在0.85%盐水内加入联苯胺至饱和为止,使用前加入20%体积的H2O2,每2ml加1滴。
(6)0.1%钼酸铵溶液:0.1g 钼酸铵于100毫升0.85%盐水。
2、仪器设备:显微镜,镊子,染色钵,载玻片,盖玻片,吸水纸。
【实验步骤】1、PAS反应:(1)把马铃薯块茎用刀片切成薄片;(2)浸于高碘酸溶液5-15min;(3)移入70%乙醇中浸5min;(4)Schiff试剂染色15min;(5)亚硫酸溶液洗3次,每次1 min;(6)蒸馏水洗片刻,装片镜检。
2、过氧化物酶的测定:(1)把洋葱根尖徒手切称20-40微米厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块;(2)浸在钼酸铵溶液5 min;(3)浸在联苯胺溶液内2 min至切片出现蓝色;(4)0.85%盐水洗1 min;(5)将薄片置于载玻片上展开,盖上盖玻片,镜检。