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人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）1 试剂信息试剂厂家：北京万泰生物药业股份有限公司2 样本要求2.1 本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。
2.2 不能检测含悬浮纤维蛋白或聚集物，重度溶血的样品。
2.3 样品中应无微生物，可在2-8℃储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。
2.4 使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。
3 检测步骤3.1 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。
3.2 编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型、2型各1孔、空白对照1孔。
3.3 加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100μL。
3.4 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。
3.5 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。
3.6 加酶：每孔加入酶标试剂100μL，空白孔除外。
3.7 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。
3.8 洗板：操作同步骤5。
3.9 显色：每孔加入显色剂A、B液各50μL，轻轻震荡混匀，37±1℃避光显色30±1分钟。
3.10 测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。
4 参考值临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照A均值+0.12.5 检验结果的解释5.1 阴性对照孔A值≦0.10，阳性对照A值≧0.80，否则试验无效。
5.2 若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复试验。
5.3 阴性判定：样品A值<临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阴性。
5.4 阳性判定：样品A值≧临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阳性。
（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。
复试阳性者应按《全国艾滋病检测技术规范》送HIV确证实验室进行确证实验。
艾滋病抗体筛查操作规范酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
操作：严格按试剂说明书操作。
报告筛查试验呈阴性反应出具HIV抗体阴性报告。
筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复查”报告，同时应尽快进行以下处理：（1）填写HIV抗体复查送检单，经一名检测操作人员和一名具有中级以上技术职称的人员审核签字。
（2）尽可能重新采集受检者的血样，将二份血样（或仅原血样）连同HIV抗体复查送检单一并送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确认实验室，或直接送确认实验室确认。
筛查中心实验室应尽快用两种试剂进行复测，如结果均阳性或一阴一阳，则应将送检标本和HIV抗体复查送检单一并送艾滋病确认实验室确认。
如复检结果均为阴性，在送检单上盖上“HIV抗体阴不必再送确认实验室。
快速检测试验（rapid testing）是定性检测HIV-1/2 抗体的免疫层析法。
加样品入反应条，当样品迁移通过结合物包被处带时，与标记硒胶体的抗原或标记金胶性（一）”字样图章，并及时将结果反馈送检单位，体的抗原，此复合物继续迁移通过固相包被的合成肽和重组抗原的病人窗口。
如果样品中有HIV-1/2 抗体，抗体将与硒胶体-抗原结合，并在病人窗口处被固相包被的合成肽和重组抗原所捕捉固定，形成一条红线；否则，没有这条红线。
为了确保试验有效，在反应条中含有质控带。
操作：取出试剂条，待平衡至室温时，加样处加待测血清（或血浆）50ul，15-30分钟判定结果。
结果判定：阳性病人条带处（标有“Patient”）和质控条带处(标有“Control”）都呈红色。
HIV ELISA法检测操作程序1简介使用前将试剂盒所有试剂自低温箱内取出置室温复温30分钟，取出所需的条板,剩余的及时封存。
注意不同批号的试剂不得混淆。
本品系用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型（HIV1/2）抗原（基因重组蛋白）包被的微孔板和酶标记的HIV1/2抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原理（Sandwish ELISA）检测人血清或血浆中的HIV1/2抗体。
2.试剂:试剂盒组成：1．HIV酶标板8×12孔7、显色剂A液60ml×1瓶2、HIV-Ⅰ型阳性对照1ml×1瓶8、显色剂B 液60ml×1瓶3、HIV-Ⅱ型阳性对照1ml×1瓶9、终止液60ml×1瓶4．HIV阴性对照lmlxl瓶10.自封袋1个5．HIV酶标试剂10ml×1 瓶11封板膜3张3.HIV抗体检测流程4.操作步骤：4.1配液:将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。
4.2编号:A1、A2、A3为阴性对照，A4为HIV-1型阳性对照，A5为HIV-2型阳性对照，将样品从6号开始编号，不设空白孔。
4.3加样：分别在相应孔中加人待测样品或阴、阳性对照100ul。
4.4温育:用封板膜封板后置37±1℃温育30±2分钟。
4.5洗涤:小心将封板膜揭掉,使用洗板机吸干孔内液体，用洗涤液洗涤5遍。
4.6加酶:每孔加人酶标试剂100ul。
4.7温育:用封板膜封板后置37±1℃温育30±2分钟。
4.8洗涤:小心将封板膜揭掉,使用洗板机吸干孔内液体．用洗涤液充分洗涤5边。
最后一次尽量扣干。
4.9显色：每孔加人显色剂A、B液各50ul，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置37±1℃避光显色15分钟。
4.10终止:每孔加终止液50 ul，（注意应与加底物的次序相同）轻轻振荡混匀。
4.11测量：4.11.1按LAB/SOP/01准备好酶标仪4.11.2输入数字。
HIV抗体检测技术规范1 范围本章规定了HIV抗体的检测方法、程序、结果报告、检测策略及质量控制。
适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。
可作为对HIV感染者诊断和监测的实验室依据。
2 规范性引用文件《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008）Guidance for HIV testing in the Western Pacific Region. WHO Draft 19 July 2008.Statement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006.Guidelines for the use of the BED assay for incidence estimation and surveillance in resource-limited countries. Atlanta, 5 June 2006.Revised Guidelines for HIV Counseling, Testing, and Referral. U.S. CDC 2001.Current HIV-2 diagnostic strategy overestimates HIV-2 prevalence in China. Journal of Medical Virology,2009, 81: 790-797.3 HIV抗体检测实验室要求应符合《全国艾滋病检测工作管理办法（2006）》中对实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。
实验室的质量保证和实验室安全防护按本规范相关章节规定执行。
4 HIV抗体检测的目的和要点4.1 HIV抗体检测的目的4.1.1 HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。
ELISA法检测HIV抗体标准操作程序编号：舟曲县CDC艾—02号编写人：尚丽萍编写日期：2015-03-24一、目的：保证检测结果的准确性，减少或避免随机误差。
二、适用范围：适用于HIV抗体检测。
三、原理: 人血清或血浆中人类免疫缺陷病毒(1+2型)抗体,可与预包被高纯度基因组HIV(1+2型)抗原反应,加入HRP标记HIV(1+2型)抗原,然后用TMB底物作用显色,通过酶标仪检测吸光度(OD值)而判定样品中HIV抗体存在与否。
四、HIV抗体检测程序1、检测设备：①酶标仪，②洗板机，③恒温水浴箱，④移液器，⑤微量振荡器，⑥定时钟。
2、检测试剂：必须是HIV－1/2混合型，经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内、并经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。
检测前标本及所用试剂应放置室温（18-25℃）平衡30min。
3、检测前仔细阅读说明书，严格按说明书中操作步骤进行检验，按原始记录的顺序加样，用一次性加样头，加样头不要碰到酶标板的包被层。
移液器最好一年校准一次，发现异常情况应随时标定。
4、正确使用酶标仪、洗板机、水浴箱，发现问题及时解决或找厂家维修。
5、通过阴、阳性对照和外部对照来判定本次实验是否有效、结果是否可靠，如发现问题应及时报告室主任，共同分析原因，以保证实验的准确性。
6、血液标本验收合格后，用初筛检测试剂进行检测，如呈阴性反应，则作HIV抗体阴性报告。
7、初筛检测结果呈阳性反应的标本，需进行复检。
复检时用两种不同原理或不同厂家的检测试剂复检。
两种试剂复检结果均呈阴性反应，则作HIV抗体阴性报告；如均呈阳性反应，或有一份阳性，该标本须送上级实验室进一步确认。
送检时填写“HIV抗体初筛阳性送检化验单”，与血液标本一并送检（必要时重新采集血样）。
8、妥善保存各种实验记录、感染者档案，不得擅自修改和销毁，严格遵守保密制度，未经省级卫生行政部门许可，不得向无关人员或单位提供任何情况。
HIV测定（ELISA法）标准操作规程1、检验目的应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）定性检测人血清、血浆标本中的HIV（1+2）型抗体的测定，用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。
2、原理采用夹心ELISA方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗体，预包被高纯度基因重组HIV（1+2）型抗原，可与标本中的抗-HIV抗体反应，加入HRP标记HIV （1+2）型抗体抗原结合，形成抗原－抗体－酶标抗原复合物，然后加入TMB底物产生显色反应。
通过酶标仪检测吸光度（OD值），根据OD值判断HIV抗体的存在与否。
3、性能参数灵敏度高（0.5ng/ml）4、标本要求（1）标本类型：血清，血浆。
（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置不超过8小时，2-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，应避免反复冻融（4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。
本文来自检验地带网5、容器和添加剂类型6、试剂（1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。
（2）试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司（3）包装规格：96T/Kit（4）试剂盒组成：①、HIV酶标板；②、HIV酶标试剂；③、HIV（1+2）型阳性及阴性对照血清；④、显色剂A液和B液；⑤、此外还有浓缩洗涤液、终止液、自封袋、封板膜、说明书等。
7、仪器设备：酶标仪：ZS板式，北京普朗生物技术有限公司，每年由计量单位进行一次校准。
洗板机：DNM-9620型，北京普朗生物技术有限公司，每年由国家计量单位进行一次校准。
移液器：上海求精，每年由国家计量单位进行一次校准。
8、校准程序9、操作步骤①、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水25倍稀释至1000ml备用。
②、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孔、阳性对照3孔，空白对照2孔。
③、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100μl，用封板膜封板后置37℃温育60min。
HIV抗体ELISA实验操作规程HIV(1/2)抗体检测ELISA双抗原夹心法（丽珠试剂）1. 目的：初步筛查HIV感染。
2. 原理：用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗原（合成肽或基因重组蛋白）包被微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中的HIV-1/HIV-2抗体。
3. 材料：HIV(1/2)抗体诊断试剂盒（珠海丽珠，国药准字S2*******）、注射器、试管、离心机、加样器、吸嘴。
4. 操作步骤：4.1 抽取患者静脉血2ml，注入试管中。
4.2 2500rpm/min离心10分钟，分离血清。
4.3 将试剂盒平衡至室温，取出所需的条板，余下的即时封存。
4.4 将所需数量的条板固定于支架，按顺序编号，设置样品孔、空白对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔（空白对照1孔、阳性对照2孔、阴性对照3孔）用40-200ul规格的加样器在样品孔中加入50μl 待测样品，空白孔不加任何液体，阴性、阳性对照孔分别加入50μl阴性或阳性对照，轻拍混匀。
4.5 置37℃湿盒温育30分钟。
4.6 将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6次，扣干。
（注：洗涤时各孔要加满洗液，每次有1分钟的浸泡时间。
）4.7 每孔加入50ul 酶标记物(空白孔除外)，轻拍混匀。
4.8 置37℃湿盒温育30分钟。
4.9 将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6次，扣干。
（注：洗涤时各孔要加满洗液，每次有1分钟的浸泡时间。
）4.10 每孔加入50ul 底物缓冲液和50ul 底物液, 轻拍混匀置37℃湿盒温育30分钟。
4.11 每孔加入50ul 终止液，轻拍混匀。
4.12 用酶标仪单波长450 nm 或双波长450/630nm测定各孔A值。
5. 结果判断5.1 临界值(Cutoff)=0.15+阴性对照平均A值。
5.2 阳性：样品的A值≥Cutoff值。
5.3 阴性：样品的A值＜Cutoff值。
艾滋病初筛检测实验标准操作程序〔SOP文件〕一、目的保证艾滋病病毒抗体ELISA实验的准确性。
二、适用范围艾滋病病毒抗体ELISA实验。
三、具体要求3.1样品采集样品采集安试剂盒要求采集。
采血时注意平安，用一次性注射器谨慎操作，防止发生刺伤和造成外界污染。
血样如即时用可存于普通冰箱，如要长期保存，别离血清置于-20 及以下。
同时做好记录。
3.2样品运送样品转送，除特殊需要外，必须是血清或血浆，置于带有盖帽的试管内，或将塑料试管用酒精灯封死，防止样品流出。
试管上标明姓名、时间、编号，将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理，在所放试管周围||上下垫有软性物质，以免碰碎，容器外标有HIV检测专用字样和生物危害标志。
路途较远或气候炎热时，容器应置于4 以下运送。
这样同时附送检单。
3.3样品登记和处理收到样品后，及时填写标本登记记录表，送样人、收样人签字，如已进行过初检，登记初检结果和实验方法及所用试剂情况。
对从其他实验室送来的样品，检查并注明送检单与标本记录的符合、样品管破损、溢漏等情况。
如有溢漏应立即将尚存的血样移出，并对管壁和盛器消毒。
检查并记录样品的质量有无严重溶血、细菌污染、血脂过多以及黄疸等情况。
对实验室自采的样品，最好将血液先放置1-2个小时，再用3000 离心15分钟，吸出上清液备用，如在几天内检测可放在2-8 冰箱中，如要贮存，置于-20冰箱。
3.4实验准备将试剂从冰箱中取出，按试剂盒要求时间恢复室温。
检查并记录冰箱、温箱温度。
按照试剂盒要求准备实验原始记录表，标明空白、阴性对照、阳性对照、外部质控血清以及检测样本的位置：登记日期和实验起止时间，记录环境条件及试剂盒厂家、批号、效期：整个实验过程中每一步操作都要在原始记录表上详细登记。
按照试剂盒的要求配置洗液及其他所需要的试剂。
3.5加样和稀释根据样品数量将适宜数量的酶标板条固定在板架上，为了不损坏洗扳机，每道上的酶标板条必须保持完整{缺乏局部可用废弃的微孔添充}，检查加样器加样刻度是否与||试剂盒要求的加样量相符，按照原始记录表说明的位置参加各种质控品和检测样品，注意：空白只加标本稀释液。
HIV(ELISA法抗体检测细则
1. 目的
根据《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版），对艾滋病病毒抗体检测作必要的细化和补充，以规范本实验室对艾滋病病毒抗体的检测方法。
2. 适用范围
本检测细则适用于对人体血液中艾滋病病毒抗体检测。
3. 职责
3.1 检测人员：负责按照本检测细则对被检样品进行检测；
3.2 复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核；
3.3 科室负责人：负责对科室综合管理和检测报告的签发。
4. 检测依据
GB16000－1995艾滋病诊断标准及处理原则。
5. 方法原理
在微孔板上预包被高纯度基因重组HIV(1+2)型抗原，可与样品中抗HIV抗体反应，同时加入HRP标记HIV(1+2)型抗原，然后用TMB底物作用显色，加入终止液终止反应，有颜色变化的微孔板变为黄色，颜色的深浅与血清中HIV抗体含量呈正比，通过酶标仪检测吸光度(OD值)从而判定样品中HIV抗体的存在与否。
6. 检测仪器设备名称、型号和材料
6.1美国宝特ELX800型酶标仪；
6.2 水浴箱37℃±1℃；
6.3 (新鲜的)蒸馏水或去离子水；
6.4 容量器(用于准备洗涤液)；
6.5 一次性隔离衣、手套、帽子、鞋套。
6.6 计时器；
6.7 84消毒液、75%乙醇；
6.8 适用于盛装有可能受污染的物品的容器；
6.9 吸水纸；
6.10 微板振荡器（用于溶解及混匀结合物与样品，速度约为900r/min）；
6.11 KHB ST-36W洗板机；
6.12 加样器(20～100μL)，准确度±2%及一次性加样头。
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7. 检测环境条件
所有的实验应20℃～25℃室温中进行
8. 检测步骤
8.1 检测前准备
8.1.1 样品收集和准备
a. 不需要特殊准备，不需要病人禁食；
b. 血清和血浆都可使用，柠檬酸，肝素和EDTA等抗凝剂不会产生影响，但不能
与其他药物并用；
c. 血液应以一般法收集，并要小心处理；
d. 自血清中去除纤维蛋白，自血浆中去除红血球，避免溶血；
e. 标本中若含氮化钠或微粒物质会产生错误结果；
f. 高胆红素血、高溶血、乳糜血或高蛋白血标本通常会影响实验结果；
g. 标本中应无微生物，在2℃～8℃温度下，可保存一周，新鲜血液标本可长期保存在-20℃，标本要避免反复冻融；
h. 经一个冷冻/融化周期处理或在56℃30分钟的热灭活标本不会影响实验结果；
i. 标本上应有与其它标本分开产，并有明显标记(如HIV检测、姓名、编号或时间)。
8.1.2 检测试剂：本实验室采用珠海丽珠和英科新创两种人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型艾滋病病毒抗体酶联免疫检测试剂(双抗原夹心法)
珠海丽珠英科新创
a. 微量酶标板12×8孔；微量酶标板12×8孔
b. 1瓶HIV阳性对照（1ml）， 1瓶HIV阳性对照（1ml）
c. 1瓶HIV阴性对照（1ml）； 1瓶HIV阴性对照（1ml）
d. 1瓶(50mL/瓶)浓缩洗涤液(20×)； 2瓶(25mL/瓶)浓缩洗涤液(20×)
e. 显色剂A、B液(7mL各1瓶；显色剂A、B液(7mL各1瓶；
f. 1瓶HIV终止液(7mL/瓶)； 1瓶HIV终止液(7mL/瓶)
g. 1个自封袋； 1个自封袋
h. 2张封板膜。
2张封板膜
8.2 检测步骤
8.2.1 将标本、试剂和需要数量的微孔放置室温平衡(约15至30分钟)；
8.2.2 配液：将浓缩洗涤液(25×) 用蒸馏水或去离子水稀释至使用量备用；
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8.2.3 编号：将样品对应微孔按序编号，每板设空白孔1孔、阴性对照3孔、阳性对照2孔；
8.2.4 加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照50μL、空白孔不加任何物；
8.2.5 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟；
8.2.6 洗涤：小心将封板膜揭掉，至洗板机上洗涤6遍；
8.2.7加酶：除空白孔外，其余孔加酶标记物50ul（英科新创试剂则加100ul）8.2.8温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟；
8.2.9洗涤：小心将封板膜揭掉，至洗板机上洗涤6遍
8.2.8 显色：每孔加入显色剂A、B液各50μL，轻轻振荡混匀，用封板膜封板
后置37℃避光显色30分钟；（英科新创试剂则20分钟）；
8.2.9 测定：每孔加终止液50μL，轻轻振荡混匀，设定酶标仪波长于450nm处
(建议用双波长检测，参比波长630nm)，使用广州华鑫HSELx80x酶联免
疫检验分析系统操纵美国宝特ELX800酶标仪测定各孔OD值，和计算
CUTOFF值。
8.3 操作注意事项
8.3.1 待检标本和试剂盒(含有人血成分)及废弃物有潜在传染性，应严格遵守消
毒隔离制度；
8.3.2 不要用嘴吸吸管；
8.3.3 实验操作后应立即去除手套，用清洁液洗手；
8.3.4 避免标本溅出，污染环境；
8.3.5 避免皮肤粘膜接触H
2SO
4
，如接触到这些试剂应立即用水冲洗；
8.3.6 每次实验完毕，必须作一次性严格消毒；
8.3.7 不能使用过期试剂
8.3.8 试剂必须保存在2℃～8℃环境中；
8.3.9 不同批号试剂不能混用，不得使用其它公司的洗液
8.3.10 封板膜不能重复使用；
8.3.11 加液器应经常校正；
8.3.12 加样时要小心，不要使吸头碰着酶标板孔上的包被抗原或抗体层；
8.3.13 洗板完毕应将板扣干，扣板应使用一次性吸水纸，不得重复使用，吸水
纸应保持干燥；
8.3.14 标本、试剂和微孔条在使用前应放室温(20℃～25℃)平衡15～30min，
未用完的微孔用自封袋密封保存；
8.3.15 严格按说明书的时间操作，避光显色后立即加入终止液，并立刻测量OD 值。
9. 检测记录和数据处理
9.1 使用广州华鑫公司HSElx酶联免疫检验分析系统可以直接操纵ELX800酶标仪，直接进行OD值读数并进行自动计算分析实验结果；
9.2 计算： NC=阴性对照平均的OD值，PC=阳性对照平均的OD值；
9.3 阴性对照的正常范围：正常情况下，NC必须≤0.12，
9.4 阳性对照的正常范围：正常情况下，PC必须≥0.80，
9.5 确定NC的均值；
9.6 确定PC的均值；
9.8 临界值(CUTOFF)计算：丽珠试剂临界值=NC的均值+0.15。
英科新创试剂临界值=NC的均值+0.10
10. 结果判断
10.1 样品OD值≥CUTOFF值者为阳性，样品OD< CUTOFF值者为阴性；
10.2 结果为阳性或不确定样本，使用两种试剂再次进行对比试验。
10.3 如果两种试剂对比试验仍呈阳性反应或不确定，应送HIV确认实验室进行确认。
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11. 支持性文件
11.1 《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版）；11.2 《中华人民共和国国家标准》GB16000-1995；
11.3 珠海丽珠、英科新创HIV抗体检测试剂说明书；
12. 质量记录
12.1 检验原始记录；
12.2 检验报告。
