放散试验操作规程
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放散试验操作规程 SXYJ-GZ-0209
1目的将红细胞上包被的抗体解离下来。
2适用范围用于ABO亚型的鉴定,新生儿溶血病的诊断和自身免疫性溶血性贫血患者红细胞的抗体特异性的鉴定,以及吸收后把抗体再放散下来进行鉴定,或制备单特异性抗体。
3职责检测者依据此程序进行放散试验操作。
4材料与设备 0.9%无菌生理盐水;乙醚、酸放散液;一次性使用滴管、试管;KUBOTA KA-2200型离心机;S648型电热恒温水温箱(37℃)、HH.W21.600型电热恒温水温箱(56℃)等。
5操作方法
5.1待检标本的准备及要求待检标本应用EDTA抗凝;从待检标本中吸出一定量的红细胞,
用0.9%生理盐水充分洗涤三遍,制成压积红细胞。
5.2热放散法适用于ABO亚型鉴定及IgM性质的抗体放散。
5.2.1用大量4℃冷盐水洗涤吸收后红细胞5次,吸出4滴最后1次洗液检测有无残留的游
离抗体;
5.2.2取1份洗涤后压积红细胞,加1份生理盐水;
5.2.356℃水浴中放置10分钟,并频频加以摇动;
5.2.4使用预热过的离心杯3400转/分,离心1-3分钟;
5.2.5分离上清液即为放散液,用于抗体特异性鉴定。
5.3乙醚放散主要用于红细胞上的各种IgG抗体的放散
5.3.1取1份洗涤过的压积红细胞,加1份生理盐水和2份乙醚;
5.3.2将试管塞紧并用力震动1分钟,取下塞子数次,以便排出挥发性醚;
5.3.3高速离心10分钟,离心后即分成3层,最上层是乙醚,中层是红细胞基质,下层是有
抗体的放散液,将醚层和红细胞基质层取出并丢弃,留下水溶性的放散液层,其色深红;
5.3.4打开塞子,在37℃水浴30分钟,将乙醚彻底去除;
5.3.5高速离心5分钟,含有血红蛋白的水溶液(底层)为放散液,吸出后用于抗体特异性
鉴定。
5.4酸放散适用于IgG性质的抗体放散
5.4.1取1份洗涤液加9份蒸馏水配成洗液;
5.4.2适量红细胞,用生理盐水洗涤一次后,再用洗液洗涤3-4次,压实;
5.4.3一份压积红细胞加一份酸放散液,立即颠倒混合数次,放散IgG抗体;
5.4.4以3400转/分,离心3分钟。
取上清液,用PH调解至溶液变成微蓝色,重离心,取上
清液,即为酸放散液。
5.5冰冻复融放散
5.5.1盐水洗涤受检红细胞三次,末次离心后吸尽盐水;
5.5.2压积红细胞1份加1/3份生理盐水或无不规则抗体的AB型血清;
5.5.3盖住瓶盖,平放试管,转动试管,使细胞平铺于管壁上;
5.5.4将试管平放在-20℃冰箱内10~15分钟;
5.5.5在37℃水浴融化,用3000rpm/min离心3分钟;
5.5.6吸出樱红色的液体(即释放液)于另一试管备用;
5.5.7用A型、B型混合红细胞鉴定抗体,方法同加热放散法(用于放散ABO抗体)。
5.6氯仿放散法
5.6.1用生理盐水洗涤红细胞3~6次,制成压积红细胞;
5.6.2按1:1的体积比加入压积红细胞和生理盐水;
5.6.3加等体积的氯仿于压积红细胞和生理盐水的混合液中;
5.6.4塞住塞子,用力摇动10秒钟,然后反复颠倒,充分混匀1分钟,取下塞子,将试管放
入56℃水浴5分钟,偶尔用木棒搅拌;
5.6.5用3000转/分离心5分钟,出现明显三层,顶层为血红蛋白色彩的释放液,中层为红
细胞基质,低层为氯仿;
5.6.6吸出顶层释放液,用谱细胞鉴定抗体。
6注意事项
6.1热放散时应严格注意温度和时间,洗涤及压积红细胞时,温度以接近4℃为宜;放散时
温度过高,细胞易溶解,温度过低抗体放散不完全,温度应控制在56-57℃。
6.2乙醚放散液最好用在抗球蛋白技术中,否则检查凝集反应会因红细胞的凝集与暗红色的
放散液颜色相似而使盐水、酶介质反应的结果判读发生困难。
剩余的醚会使检验用的细胞发生溶解,如果少量的醚留在放散液中,则在加红细胞之前,可以把含2滴放散液的试管放在37℃孵育5分钟。
6.3利用酸放散液进行间接抗人球蛋白试验时,孵育时间可缩短到15分钟,洗涤时用洗液
洗涤一次即可。
7依据《全国临床检验操作规程》(第3版)中华人民共和国卫生部医政司。