常用试剂的配方
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实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液配方有很多种,下面将介绍一些常用的试剂和缓冲液的配方:一、试剂的配方1. Tris缓冲液:- 3 M Tris-Cl,pH 7.4(准备方法:将121.1 g Tris粉末溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2.NaCl溶液:-5MNaCl(准备方法:将287.7gNaCl溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)3.验血试剂:-4%NaOH溶液(准备方法:将40gNaOH溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-5%CuSO4溶液(准备方法:将50gCuSO4溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-2%K4[Fe(CN)6]溶液(准备方法:将20gK4[Fe(CN)6]溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)4.PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液):-10×PBS缓冲液(准备方法:将80gNaCl,2gKCl,11.5gNa2HPO4,2gKH2PO4溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L。
pH值可以调节至7.4左右)5. Tris-EDTA缓冲液(TE缓冲液):- 10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH 8.0(准备方法:将12.1 gTris溶解在800 mL去离子水中,然后加入0.37 g EDTA,使用HCl调节pH值至8.0,并将溶液体积加至1 L)二、缓冲液的配方1. Tris-HCl缓冲液:- 50 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,1% Triton X-100,pH 7.4(准备方法:将6.05 g Tris,5.8 g NaCl,0.1 g Triton X-100溶解在800mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2. Tris-Borate缓冲液(TBE缓冲液):- 89 mM Tris,89 mM boric acid,2 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将10.81 g Tris,5.49 g boric acid,3.72 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)3. Tris-Glycine缓冲液:- 25 mM Tris,192 mM glycine,0.1% SDS,pH 8.3(准备方法:将3.03 g Tris,14.35 g glycine溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)4. Tris-Acetate缓冲液(TAE缓冲液):- 40 mM Tris,20 mM acetic acid,1 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将4.84 g Tris,1.86 g acetic acid,0.37 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)5. Phosphate缓冲液:- 100 mM sodium phosphate,pH 7.0(准备方法:根据目标pH值使用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节溶液pH至7.0,并将溶液体积加至1 L)以上只是一些常用的试剂和缓冲液的配方,并不是全部。
常用试剂及配置方法(一)化学成分定性反应试剂1、5%α-萘酚试剂α-萘酚5g,加乙醇100ml溶解,如不澄清,可过滤,装棕色瓶备用;2、费林(Fehling)试剂甲液:6.92g硫酸铜结晶、溶于100ml水中。
乙液:34.6g酒石酸钾钠的结晶、10g氢氧化钠共溶于100ml水中,贮藏于带橡皮塞的试剂瓶中。
使用时取甲、乙二液等量混合。
3、10%盐酸盐酸27ml,加蒸馏水使成100ml。
4、10%氧氧化钠氢氧化钠10g,加蒸馏水使成100ml。
5、苦味酸钠试纸取滤纸条浸入苦味酸饱和水溶液中,浸透后取出晾干,再浸入10%碳酸钠水溶液中,迅速取出,晾干即得。
6、普鲁土蓝试剂(1)10%氢氧化钾试液氢氧化钾6.5g,加蒸馏水使成100ml。
(2)10%硫酸亚铁水溶液取硫酸亚铁结晶8g。
加新沸过的冷蒸馏水使成250ml。
应临用时新鲜配制。
(3)10%盐酸溶液。
(4)5%三氯化铁溶液三氯化铁5g,加适量的蒸馏水使溶解成100ml。
7、1%三氯化铁试剂三氯化铁1g,加蒸馏水使溶解成100ml。
8、1%氢氧化钠试液氢氧化钠1g,加蒸馏水使成100ml。
9、1%醋酸镁甲醇液醋酸镁1g,加甲醇100ml。
10、1%三氯化铝乙醇液三氯化铝1g,溶解于100ml乙醇中。
11、0.9%氯化钠溶液氯化钠0.09g,加水100ml。
12、1.8%氯化钠溶液氯化钠1.8g,加水100ml。
13、2%红细胞生理盐水混悬液兔血10ml,放在盛有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇10分钟,除去纤维蛋白,把脱纤维血倒在离心管中,加生理盐水混匀后,离心,使血细胞下沉,反复2~3次,至生理盐水不再显红色,取以上红细胞2ml,加生理盐水100ml,稀释成2%的红细胞混悬液(本液须置冰相保存,存期2~3天)。
14、0.15%三氯化铁-冰醋酸溶液1%三氯化铁溶液0.5ml,加冰醋酸100ml。
15、醋酸铅试液取醋酸铅9.5g,加新煮沸过的冷蒸馏水使成100ml。
实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液种类繁多,根据实验需求,可以根据不同的试剂和缓冲液配方来满足实验要求。
以下是一些常见的试剂和缓冲液配方,以及其用途和制备方法。
1. 磷酸缓冲液(Phosphate buffer)磷酸缓冲液常用于生化和分子生物学实验中,用于控制溶液的pH值,适用于酸性和碱性条件下。
常见的配方包括0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.2-7.4),需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。
2. 氯化钠溶液(Sodium chloride solution)氯化钠溶液是实验室中常见的缓冲液配方之一,通常用于调节生物样品的渗透压和离子浓度。
可以制备不同浓度的氯化钠溶液,常见的配方为0.9%氯化钠溶液(生理盐水)。
3. 碳酸氢盐缓冲液(Bicarbonate buffer)碳酸氢盐缓冲液常用于细胞培养和生理实验中,用于维持细胞培养基或实验液的pH稳定。
一种常见的配方为10mM碳酸氢盐缓冲液(pH7.2-7.4),需要用碳酸氢钠和盐酸来制备。
4. Tris缓冲液(Tris buffer)Tris缓冲液是一种常见的生化实验缓冲液,可以调节到不同的pH值。
常见的配方为50 mM Tris缓冲液(pH 7.4),需要用Tris(三氯甲烷磺酸,Tris-HCl)和盐酸来制备。
5. PBS缓冲液(Phosphate-buffered saline)PBS缓冲液是一种用于细胞和组织处理的常见缓冲液,具有稳定pH值和离子浓度的特点。
常见的配方为10mMPBS缓冲液(pH7.4),需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。
6. 甘氨酸缓冲液(Glycine buffer)甘氨酸缓冲液常用于蛋白质电泳实验中,用作电泳缓冲液和传递缓冲液。
常见的配方为25mM甘氨酸缓冲液(pH8.3),需要用甘氨酸和盐酸来制备。
7. BSA溶液(Bovine serum albumin solution)BSA溶液是实验室中常见的蛋白质标准物质,用于测定蛋白质浓度和酶活性等实验。
附录1 生物实验室常用试剂的配制一、检验酸碱性的试剂1.酚酞试液取0.1g酚酞,溶解在100mL60~90%的乙醇溶液里,装在试剂瓶内密闭保存。
酚酞试液在碱性溶液中呈红色。
2.甲基橙试液甲基橙是橙黄色粉末或晶状鳞片。
取0.1g甲基橙溶解在100mL蒸馏水里制成。
当pH值由3.1~4.4时,颜色为红至黄色。
3.甲基红试液甲基红是红紫色晶体或红色粉末。
把0.1g甲基红溶在100mL60%乙醇里制得。
当pH值由4.4~6.2时,颜色由红色至黄色。
4.麝香草酚酞(百里酚酞)试液把0.1g白色的麝香草酚酞溶解在100mL 90%乙醇里制得。
当pH值由9.4~10.6时,颜色为无色至蓝色。
5.溴甲酚紫指示剂将0.1g溴甲酚溶于9.25mL的0.02mol/L氢氧化钠溶液中,加蒸馏水稀释至250mL制得。
当pH值由6.2~6.8时,颜色由淡黄色变为淡紫色,变色点在pH 6.7。
6.溴甲酚绿试液溴甲酚绿是黄色晶体或红棕色粉末。
把0.1g溴甲酚绿溶于100mL 20%乙醇中,或把0.1g溴甲酚绿与2.9mL 0.05mol/L 氢氧化钠溶液研匀,用水稀释到100mL制得。
当pH值由3.8~5.4时,颜色由黄至蓝色。
7.甲基紫(结晶紫)试液把0.1g深绿紫色的甲基紫溶解在100mL的水里制得。
当pH值由0.13~0.5时,颜色由黄至绿;pH值由1.0~1.5时,颜色由绿至蓝;pH值由2.0~3.0时,颜色由蓝至紫。
8.甲酚红指示剂把0.1g深红色的甲酚红溶解于100mL 50%的乙醇中,或将0.1g甲酚红与5.3mL 0.05mol/L氢氧化钠研匀,用水稀释到100mL制得。
当pH值由0.2~1.8时颜色由红至黄;pH值由7.0~8.8时,颜色由亮黄至紫红。
甲酚红指示剂遇少量二氧化碳,能快速变色,反应灵敏,效果明显。
9.刚果红试纸(红色)把 0.5g峋果红溶解于1L水中,加入5滴乙酸,滤纸用温热溶解液浸透后,取出晾干。
实验室常用染色液和试剂配方【很全】实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液:美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液:氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液,然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液:碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液:石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中,配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中,配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液:结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液:草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后,加入95%酒精,使之溶解,配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水,配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,再将碘溶于碘化钾溶液中,溶时可稍加热,最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细,加少许95%酒精溶解,再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟,加入福尔马林作为防腐剂,用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液(真菌制片,短期保存)石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化,加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,溶解即成。
常用试剂配方常用试剂:储存于阴凉、通风的地方;远离火种、热源。
避免光照。
室温不超过30℃,相对湿度不超过80%。
包装必须密封,切勿受潮。
应与易(可)燃物、还原剂、碱类、醇类、食用化学品分开存放,切忌混储,储区应备有合适的材料收容泄漏物。
操作注意事项:尽量在通风橱操作,加强通风,避免粉尘扩散。
远离易燃、可燃物,避免与还原剂、碱类、醇类接触,防止包装及容器损坏。
使用后应留意剩余量,注意及时订购。
8M Urea(尿素)组份浓度: 8mol/L Urea(MW:60.07)配制量: 1L配制方法: 1.称取尿素480g,置于1L的蓝盖瓶中。
2. 加水至1L,置于磁力搅拌器上充分搅拌。
3. 于棕色瓶中,4℃保存。
4.使用前,先在常温放置,使析出的尿素溶解。
0.25%AgNO3 (硝酸银)组份浓度:0.25%(W/V)AgNO3(MW:169.87)配制量: 500ml配制方法: 1.准确称取硝酸银1.25g。
2.加入500ml的去离子水,充分溶解。
3.于棕色瓶中,常温保存。
0.5M EDTA(PH 8.0)组分浓度: 0.5 mol/L EDTA(MW:372.24)配制量: 500ml配制方法: 1.称取93g Na2EDTA·2H2O置于500ml蓝盖瓶中。
2.加入400ml的去离子水,置于磁力搅拌器上充分搅拌。
3.用NaOH调节调节pH值至8.0(约需加入20g固体NaOH),当pH接近8.0时, EDTA方可完全溶解,加入去离子水定容至1L。
4.高温高压灭菌后,室温保存半年。
5M NaCl组份浓度: 5mol/L NaCl (MW:58.5)配制量: 1L配制方法: 1.准确称取氯化钠292.5g,置于1L的蓝盖瓶中。
2.用去离子水溶解并稀释至1L。
3.高温高压灭菌后,常温保存。
50% 甘油组分浓度: 50%(V/V) glycerol配制量: 100ml配制方法: 1. 量取下列试剂,置于250ml蓝盖瓶 中:100% glycerol 50ml2.加入50ml去离子水,充分搅拌溶解。
一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
常用试剂配方:1.0.075M KCL: KCL 5.6g+三蒸水1000ml2.1%枸橼酸钠:枸橼酸钠5g+三蒸水500ml3.磷酸缓冲液:甲液:KH2PO4 4.5g+三蒸水500ml乙液:Na2HPO4 5.9g+三蒸水500ml4.0.25%胰酶: 胰酶250mg+0.9%NaCL 100ml,溶解分装成20瓶5.1:1000肝素: 肝素2ml+ NaCL 10.5 ml6.BPS液: 甲液30ml+乙液30ml 混匀7.秋水仙素:秋素粉10mg+生理盐水9ml → 1mg/ml原液1mg/ml原液1ml+生理盐水9ml → 100ug/ml100ug/ml液2ml+生理盐水6 ml → 25 ug/ml100ug/ml液0.5ml+生理盐水12ml → 4ug/ml1mg/ml原液1ml+生理盐水3ml → 250ug/ml1mg/ml原液1ml+生理盐水4ml → 200ug/ml8.Giemsa原液:Giemsa 1g 甲醇66ml 甘油66ml,充分研磨溶解,60℃水浴加热,滤纸过滤备用.9.10 X 红细胞裂解液NH4CL 82.9g Array加双蒸水至1000ml(高压灭菌,4℃保存) KHCO3 10gEDTA0.37g10.3% Tris:Tris(三羟甲基氨基甲烷) 3g+NaCL100ml11.抽提缓冲液①1mol/L Tris-Hcl400mlH2O中溶解60.55gTris碱,加入浓Hcl调节PH值至所需:PH 7.4 Hcl 35mlPH 7.6 Hcl 30mlPH 8.0 Hcl 21ml溶解冷却至室温后调定PH 值,加H 2O 定容至500ml,高压灭菌② 0.5mol/L EDTA (PH 8.0)在800ml 水中加入186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na·2H2O ),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH 调节 溶液的pH 值至8.0(约需20g NaOH 颗粒)然后定容至1L ,分装后高压灭菌备用。
实验室常用试剂和缓冲液配方PBS(磷酸盐缓冲液)是一种常用的生物化学缓冲液,用于洗涤和稀释生物化学试样。
配方:-NaCl:8g-KCl:0.2g-Na2HPO4:1.42g-KH2PO4:0.24g将上述物质溶解在1升蒸馏水中,调节pH值至7.4、用1M(摩尔浓度)盐酸或1M氢氧化钠进行调节。
2. Luria-Bertani (LB) 培养基配方LB培养基是微生物学研究中常用的培养基,适用于大多数细菌和酵母菌的培养。
配方:- 水解酪蛋白(tryptone):10 g- 酵母粉(yeast extract):5 g-NaCl:10g将上述物质溶解在1升蒸馏水中,用1M盐酸或1M氢氧化钠调节pH 至7.0。
可以选择添加洗涤剂Tween-20(0.1%)以提高溶解度。
SSC缓冲液广泛用于核酸杂交实验等生物学研究中。
配方:-NaCl:175.3g- Na3Citrate·2H2O:88.2 g-EDTA:37.2g将上述物质溶解在1升蒸馏水中,调节pH值至7.0-7.2、可以选择添加DEPC(二硫酰二甲酯)处理,增强其功能。
4.甲醛溶液甲醛溶液常用于生物样品固定以及染色实验。
配方:-甲醛:37%-PBS或水将适量的甲醛加入PBS或水中,制备所需浓度的甲醛溶液。
5. β-羟丁酸钠(β-Hydroxybutyrate)溶液β-羟丁酸钠是一种常用的减少剂,用于生物化学实验中。
配方:-β-羟丁酸钠:1M根据需求将适量的β-羟丁酸钠溶解在合适的溶剂中。
这里只是列举了几个常见的试剂和缓冲液配方,实验室试剂和缓冲液种类丰富多样,具体使用取决于研究目的和实验要求。
在进行实验之前,建议仔细阅读相关文献和制造商提供的说明书,并按照正确的比例和步骤配制试剂和缓冲液。
生物试剂配方
一,健那绿:1,) 1%健那绿: 0.5g+50ml生理盐水
2)1/5000健那绿染液:取1%的健那绿1ml加入49ml生理盐水=20ml健那绿+980mll生理盐水
二,吡罗红甲基绿:A液:1)甲基绿2g+98ml水
2)吡罗红G5g+95ml水
3)取60ml甲基绿与20ml吡罗红加入到160ml水,放入棕色瓶备用。
B液:1)乙酸钠16.4g,加水至1000ml
2)乙酸12ml,加水至1000ml
3)乙酸钠溶液300ml+稀乙酸200ml+500ml水
吡罗红甲基绿试剂:A液200ml+B液800ml
三.牙签消毒:KMno4溶液,取0.1g~0.5g高猛酸钾溶于100蒸馏水中
四.生理盐水:0.9%:取9g盐溶于1000ml水中
五.30%蔗糖溶液:300g蔗糖加水至1000ml
六.1g龙胆紫溶于100ml水,稀释到500ml,存于棕色瓶中。
七.斐林试剂:甲液:100g氢氧化钠(NaOH)加水至1000ml
乙液:50g CuSO4加水至1000ml
苏丹:1g干粉加95%酒精至1000ml
双缩脲:A液:同甲液 B液:10g CuSO4加水至1000ml
八.淀粉酶:2%:20g酶+980ml水
淀粉3%:30g淀粉+970ml水
蔗糖3%:30g糖+970ml水
过氧化氢(H2O2)3%:100ml(30%H2O2)+900ml水
3.5%FeCl3:35g(Fecl3)+965ml水
15%HCL:202ml (37%HCL)加水至500ml
九.层析液:石油醚+丙酮+苯20:2:1=1000:100:50。
1.常用PBS:称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可,高压灭菌。
2.常用PBS(不含K盐):8.5g NaCl、0.8736g NaH2PO4•2H2O、5.531g Na2HPO4•12H2O,800ml三蒸水搅拌,无需调PH,1L定容。
3.DMEM培养基:DMEM干粉溶入800ml三蒸水中,加入3.7g NaHCO3,搅拌后调PH至7.2~7.4,最终用1000ml容量瓶定容,无菌层流间中过滤分装。
4.1640培养基:1640干粉溶入800ml三蒸水中,加入2.0g NaHCO3,搅拌后调PH至7.2~7.4,最终用1000ml容量瓶定容,无菌层流间中过滤分装。
5.胰酶:浓度为0.25%~0.4%,通常是用生理盐水或PBS等平衡盐溶液作为溶剂。
6.胰酶(含EDTA):普通胰酶中额外加入0.01%~0.02%的EDTA7.细胞冻存液:多数细胞配方为10%DMSO+20%血清+70%细胞培养基,也有介绍直接10%DMSO加90%含血清培养液,部分细胞需10%DMSO+90%血清。
理论上血清越多冻存效果越好。
8.谷氨酰胺:标准的谷氨酰胺100×液为200mmol/L(29.22g/L)。
通常培养液中浓度为1~4mmol/L (0.146~0.5844g/L),4o C下半衰期为7天,两周以上需要重新加入。
9.双抗:青霉素—100IU/ml(通常培养液中终浓度为20~100IU/ml均可),链霉素—100ug/ml(通常培养液中浓度为50ug/ml)。
多数体外培养都是使用青霉素和链霉素,上述的工作浓度可在37o C长时间控制轻度污染而对细胞无毒性作用。
10.MTT:0.5克MTT,溶于无酚红的培养基中(就用培养细胞的培养基),浓度为5mg/ml,过滤除菌,4℃避光保存。
常用试剂配方1. 10×YNB(13.4%的无氨基酸酵母氮源):100mL : 13.4gYNB(含硫酸铵)固体溶于100mL 去离子水,过滤灭菌,4℃保存;2. 500×B (0.02%生物素):100mL :生物素(Biotin)20mg 溶于100mL 去离子水,过滤灭菌,4℃保存;3. 10×M(5%甲醇):100mL :5mL 甲醇与95mL 去离子水混合,过滤除菌,4℃保存。
4. 1M 山梨醇:100mL :18.2g D-山梨醇溶于100mL 去离子水,过滤除菌,4℃保存。
5. 1M 的磷酸缓冲液(pH6.0):1L :将 132mL 1M 的磷酸氢二钾(K 2HPO 4)和 868mL 1M的磷酸二氢钾(KH 2PO 4),用磷酸和氢氧化钾调pH 值到6.0, 过滤灭菌,常温保存;6. 10×GY(10%的甘油):1L :100mL 甘油溶于900mL 去离子水,过滤灭菌,室温保存;7. 10×D (20%葡萄糖):1L :200g D-葡萄糖溶于1L 去离子水,过滤灭菌,4℃保存;6. YPD 完全培养基:1L :酵母粉 l0g ,蛋白胨 20g ,溶于900mL 去离子水,湿热灭菌30min ,冷却后加入100mL 10×D ,4℃保存(固体培养基含1.5%琼脂,一同湿热灭菌)7. 选择培养基MD :100mL :向80mL 水中加琼脂糖2g(终浓度20 g/L) 121℃湿热灭菌 20分钟,待温度降至60℃以后在超净台上加入10×YNB 10mL(终浓度13.4 g/L),500×生物素0.2mL(终浓度4×10-4 g/L),10×D(20%葡萄糖)10mL(终浓度20 g/L)。
8. 选择培养基MM :100mL :向80mL 水中加入琼脂糖2g(终浓度20 g/L) 121℃湿热灭菌20分钟,待温度降至60℃以后在超净台上加入10×YNB 10mL(终浓度13.4 g/L),500×生物素0.2mL(终浓度4×10-4 g/L),10×M(5%甲醇) 10mL(终浓度0.5%V/V) 9 .诱导表达培养基BMGY :1L :酵母粉 10g ,蛋白胨 20g ,溶于700mL 去离子水,湿热灭菌20min ,冷却后加入100mL 1M ,pH6.0,磷酸钾缓冲液,100mL 10×YNB ,2mL 500×B ,100mL 10×GY ,4℃保存10.诱导表达培养基BMMY :1L :酵母粉 l0g ,蛋白胨20g ,溶于700mL 去离子水,湿热灭菌30min ,冷却后加入100mL 1M pH6.0磷酸钾缓冲液,100mL 10×YNB ,2mL 500×B ,100mL 10×M ,4℃保存。
生物化学实验常用试剂的配制方法使用Ctrl+F 组合键可以快速的查找所需的配方。
1、0.5mol/L氢氧化钠溶液组份浓度0.5mol/L ;配制量2L配置方法1.准确称取氢氧化钠40g。
2.用去离子水溶解并稀释至2L。
2、0.5mol/L盐酸溶液组份浓度0.5mol/L ;配制量2L配置方法1.准确量取盐酸83.4mL。
2.用去离子水稀释至2L。
3、含0.5mol/L氯化钠的0.5mol/L氢氧化钠溶液组份浓度0.5mol/L氯化钠、0.5mol/L氢氧化钠;配制量1L配置方法1.准确量取氯化钠29.3g。
2.准确量取氢氧化钠20g。
3.用去离子水稀释至1L。
注意:此溶液供回收纤维素时使用。
4、0.2%葡萄糖标准溶液组份浓度0.2%;配制量1L配置方法1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中,在70℃干燥2小时。
2.干燥器中冷却至室温,重复干燥,冷却至恒重。
3.准确称取葡萄糖2.000g。
4.用去离子水溶解并定容至1L 5.于4℃保存。
5、250μg/mL牛血清白蛋白标准液组份浓度250μg/mL ;配制量2L配置方法1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。
2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。
3.4℃保存。
6、Folin试剂甲配置方法1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中,加入50g无水碳酸钠,溶解,待用。
2.称取0.5g 酒石酸钾钠,溶于80mL去离子水中,加入0.25g硫酸铜?5水,溶解。
3.将1:2:去离子水按20:4:1的比例混合即可。
4. 4℃保存,可用一周。
7、Folin试剂乙配置方法:1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠?2水25.0359g,钼酸钠?2水6.2526g,去离子水175mL,85%磷酸12.5mL,浓盐酸25mL,充分混合。
2.回流10小时,再加硫酸锂37.5g,去离子水12.5mL及数滴溴。
3.然后开口沸腾15min,以驱除过量的溴,冷却后定容到250mL。
PBS:我们去买复合片,直接配制。
试剂名称:4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠:40ml500ml 配方操作过程A 液最好在500ml 的三角烧瓶中加热配制(低温比较难溶),至多聚甲醛完全溶解后冷却待 用。
注意,在溶解多聚甲醛时,要尽量避免吸入气体或溅入眼内。
B 液和C 液配制好后, 将B 液倒入。
液中,混合后再加入A 液,将pH 调至7.2〜7.4,最后,补充蒸馏水至500ml 充分混合。
或者将多聚甲醛 20g 、Na 2HPO4・2H 2O 3.44g 、NaOH 1.93g 直接溶于500ml 蒸馏水,将pH调至7.2〜7.4即可。
5>Tris-硼酸(TBE )缓冲液(配制1L 溶液各成分的用量)Tris 碱54 g 硼酸27.5 g EDTA 2.92 g实际配 500ml ,那么 Tris 碱 27g ,硼酸 13.75g ,EDTA 1.46gWestern bloting 10%分离胶(两块胶,15ml ) 4%浓缩胶(两块胶 ,5 ml ) 超纯水6ml 超纯水 3.2ml 40%Acr/Bic5.25ml 40%Acr/Bic 0.55ml (37.5: 1)(37.5: 1) LT3.75 HT 1.25 10%AP80 m 10%AP 50 m TEMED 7.6 m TEMED 12.5 mRunning buffer (IX): Trisbase 3.03g;Glycine 18.8g;SDS1.0g 加水至1L所需药品及剂量:A 液:多聚甲醛20g溶于200ml 蒸馏水 B 液:N a HPO4-2H O 3.44g 溶于150ml 蒸馏水 C 液: NaOH1.93g 200ml 蒸馏水可以配成5X(5X电泳缓冲液配方:总量为1L; 15.1g Tris碱;72.0g甘氨酸;5.0gSDS)Transfer Buffer (IX):甘氨酸 2.9gTris (MW121.14) 5.8gSDS 0.37g甲醇200ml,加蒸馏水至1000ml溶解后4°C保存,溶液可重复使用2-3次。
实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)□配制量1L□配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓HCl7.4 约70mL7.6 约60mL8.0 约42mL4. 将溶解定容至1L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl(pH8.8)□配制量1L□配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA (pH 7.4,7.6,8.0)□配制量1L□配置方法1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0)100mL500 mM EDTA(pH8.0)20mL2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
3. 将溶液定至1L后,高温高压灭菌。
4. 室温保存。
4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠(pH5.2)□配制量100mL□配置方法1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
实验室常用生化试剂配方实验室中常用的生化试剂有很多种,下面是一些常见的生化试剂及其配方的介绍:1.磷酸缓冲液(PBS)PBS是一种常用的缓冲液,用于洗涤细胞和组织,以及稀释试剂等。
它的配方通常包括:-NaCl:8g-KCl:0.2g-Na2HPO4:1.44g-KH2PO4:0.24g将以上试剂溶解于1L去离子水中,调节pH至7.42. Tris缓冲液Tris缓冲液用于调节溶液的pH值,常用于分子生物学实验。
其配方为:- Tris-HCl:12.11 g将Tris-HCl溶解于1L去离子水中,调节pH至所需值。
3.氢氧化钠(NaOH)溶液NaOH是一种常用的碱试剂,可用于调节pH、溶解蛋白质等。
其常见配方为:-NaOH:4g将NaOH溶解于1L去离子水中。
4.氯仿/异丙醇提取液氯仿/异丙醇提取液常用于分离DNA或RNA。
其配方为:-氯仿:24mL-异丙醇:25mL-TE缓冲液:1mL将以上试剂混合,并轻轻摇匀。
5.碳酸氢钠(NaHCO3)缓冲液NaHCO3是一种常用的缓冲液,可用于调节溶液的pH值。
其配方为:-NaHCO3:8.4g将NaHCO3溶解于1L去离子水中,调节pH至所需值。
6.绿色荧光蛋白(GFP)提取液GFP提取液用于提取含有GFP标记的蛋白质。
其配方为:- Tris-HCl(pH 7.5):50 mM-NaCl:150mM-EDTA:1mM- Triton X-100:1%将以上试剂混合,并用PBS稀释至所需浓度。
7.锌离子(Zn2+)溶液锌离子溶液可用于一些酶活性实验。
其配方为:-ZnSO4·7H2O:2.19g将ZnSO4·7H2O溶解于1L去离子水中。
8.溶血液溶血液常用于红细胞计数等实验。
其配方为:-生理盐水:9mL-甲苯:1mL将以上试剂混合,即可得到溶血液。
这只是一小部分生化试剂配方的介绍,实验室中常用的试剂配方非常多,根据具体实验的需要,需要选择合适的试剂及其配方。
一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。
分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA 酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。
溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。
用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。
(配制过程中要戴手套)5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。
10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
(稀释液应在临用前配制)2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml 的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂(Denhardt's regent)依照上表称取各组分,溶于水中定容。
过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接)将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃。
100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/L dNTP混合液20%PEG 8000/2.5M NaCl加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH 为7.0,用水补足体积至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水加100ul DEPC 于100ml 水中,使DEPC的体积分数为0.1%。
在37℃温浴至少12h,然后在15 psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。
DEPC 会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺(deionized formamide)直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。
经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。
磷酸缓冲液(phosphate buffer)按照下表所给定的体积,混合1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。
配制1 mol/L 的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。
TE(用于悬浮和贮存DNA)Tris缓冲液(Tris-HCl buffer)将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液染料1%溴酚蓝(bromophenol blue)加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。
用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gel loading solutions)6×碱性凝胶上样液(室温贮存)6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)三.常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。
注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:用水补足体积到1L。
分成100ml的小份,高压灭菌。
培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml 的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g 葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。
TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。
2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中:如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。
注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中:用水补足体积为1L后,高压灭菌。
建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。
为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
四.常用抗生素氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素(streptomycin)(50mg/ml)溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素(tetracyyline)(10mg/ml)溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。