分光光度法测定芦笋中总黄酮的含量

芦笋废弃物中黄酮化合物的纯化及其性质研究本论文研究了芦笋废弃物中的主要功能成分黄酮化合物,对其进行了提取、纯化、结构鉴定以及性质研究。

为芦笋废弃物的综合利用提供可行性途径,增加废弃物的附加经济价值,减少环境污染。

实验选取了北京市农林科学院的5个芦笋主栽品种,分别为V-1、V-2、V-3、V-4和V-5,比较不同品种的芦笋尖和废弃物中总黄酮的含量及其组成。

结果表明芦笋尖中总黄酮的平均含量高于芦笋废弃物中的27.58%,不同品种芦笋的总黄酮含量不同,但是黄酮化合物的组分基本一致。

其中V-4品种的芦笋废弃物中总黄酮含量最高(0.47%),可作为进一步研究开发的原料。

比较浸提提取和超声提取对总黄酮的提取效果,并通过正交实验优化了提取工艺。

浸提提取略优于超声提取。

最终确定采用浸提提取,最佳提取条件为:温度70℃,料液比1:35,乙醇浓度80%,提取时间90 min。

芦笋废弃物的黄酮提取液经过AB-8大孔树脂和LH-20凝胶柱纯化,得到两种主要组分(R1和R2),以芦丁作为标准品,纯度分别为75.34%,98.17%,得率分别为0.11%,0.05%。

通过颜色反应、紫外扫描光谱、红外光谱和质谱推测R1和R2分别具有槲皮素-3-芸香糖葡萄糖苷和芦丁的类似结构。

除此以外,在芦笋废弃物中还含有少量的另外三种黄酮类物质,分别具有槲皮素-三糖苷和香叶木素的类似结构。

研究了R1和R2在无机和有机体系中的抗氧化作用。

R1和R2都具有显著的清除DPPH自由基和羟基自由基的能力,但对超氧自由基的清除能力不显著,最高分别只有40.37%,29.08%。

R1和R2都可延缓和抑制亚油酸和脂质体的过氧化。

总体而言,R1的抗氧化能力高于R2。

运用高效液相色谱研究理化各因素对芦笋废弃物中的黄酮化合物的稳定性影响,R1和R2的苷元结构相同,稳定性差异并不大。

氧化剂和酸碱环境会显著影响R1和R2的稳定性;R1和R2在30-70℃的温度范围内比较稳定;光照超过16 h,R1和R2损失明显。

２９１　前言总黄酮是很多保健食品中的重要功效成份，能促进胰岛素的亲和力，在降压、降脂、降血糖方面有显著效果，同时还具有增强毛细血管通透性等作用。

因此，测定其含量对于保健食品的品质和功效具有重要的意义。

但目前国内还没有保健食品中总黄酮测定方法的国家标准。

国内外对保健食品中总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及平行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。

但是，总黄酮这种天然植物的组分非常复杂，分光光度法在实测过程中会产生各种干扰，影响结果的准确性，本方法有针对性地对此开展了研究，进行了创新并取得了较好的结果，建立了一个高效、准确的测定方法。

目前总黄酮的分析方法国外报道的有溶剂抽提法、聚酰胺薄层分析法等。

但是，柱法操作复杂、时间长，难以避免实测过程中会产生各种干扰。

因此比较而言，本方法立足于用常规的化学及物理检测方法，采用了超声波提取、聚酰胺吸附法经过改进系统，试验得到了快速、简易、良好的效果，在实际测定、应用中，具有更大的意义。

２　检测方法２．１　试剂与仪器２．１．１ 试剂与材料ａ）无水甲醇、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、三氯甲烷，均为分析纯，以下用水除特殊说明外，均为ＧＢ／Ｔ　６６８２－２００８中规定的三级水。

ｂ）聚酰胺粉：过８０目～１００目筛。

ｃ）５　％亚硝酸钠溶液：称取５．００　ｇ亚硝酸钠，加水至１００ｍｌ，溶解混匀，当天配制。

分光光度法测定保健食品中总黄酮孔鲁裔（国家农业标准化监测与研究中心黑龙江）ｄ）１　ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液：称取４．００　ｇ氢氧化钠，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。

ｅ）１０％硝酸铝溶液：称取１０．００ ｇ硝酸铝，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。

ｆ）３０　％乙醇溶液：吸取３０．０ｍｌ无水乙醇，加水至１００ｍｌ，溶解混匀。

ｇ）芦丁标准对照品：９９．５％ｈ）芦丁标准溶液：精确称取经１０５℃干燥至恒重并按其纯度折算为１００　％质量的芦丁标准对照品０．０１５０　ｇ，加无水甲醇溶解并定容至１００ｍｌ，此溶液浓度为１５０　μｇ／ｍｌ，０℃～４℃密封保存，保存期为两个月。

分光光度法测定芦笋中总黄酮的含量　宋元清 王艳平 毛远菁 (鸡西市人民医院,鸡西　158100)　(枣庄市市中区人民医院,枣庄　277100)　(日照市汽车运输总公司医院,日照　276800) 摘要　黄酮类化合物与铝盐形成配合物,该配合物在紫外可见光区有吸收,选择510n m为测定波长,芦丁作为对照品,用分光光度法测定芦笋中的总黄酮,平均回收率为97.23%,测定结果的相对标准偏差为2.13%(n=5)。

关键词　分光光度法　总黄酮　芦笋 芦笋,又名石刁柏,为百合科植物石刁柏的干燥地下嫩茎。

芦笋有温肺祛痰、活血化瘀作用,用于痰瘀互结、乳腺结块、肿胀疼痛及乳腺小叶增生等疾病的治疗。

芦笋的化学成分主要有黄酮类化合物、游离氨基酸、多种甾体皂苷、维生素、微量元素及其它活性物质[1]。

其中的黄酮类化合物主要包括槲皮素、香橼素、山柰素和芦丁等,具有消炎、镇痛等多种药理作用。

黄酮类化合物的测定现多用高效液相色谱法[2,3],该法专属性强,准确度高,但样品处理复杂,仪器昂贵,实验成本较高。

芦笋现主要用作食品及保健品,分光光度法能较快速地测定其中的黄酮类成分,且实验成本较低,易于在食品行业中推广。

1　实验部分1.1　主要仪器与试剂 紫外可见分光光度计:UV757CRT型,上海分析仪器总厂; 电子精密天平:F A2004型,上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂; 芦丁对照品:中国药品生物制品检定所; 芦丁对照品溶液:0.28mg/mL。

精密称取用五氧化二磷干燥至恒重的芦丁对照品7.00mg,用30%乙醇溶解并定容至25mL; 芦笋样品:市售; 芦笋样品溶液:取芦笋样品,研细,精密称取约0.3g,用80%乙醇回流提取2次(每次用30mL),过滤,滤液合并后蒸干,用30%乙醇溶解并定容至10mL; 实验所用试剂均为分析纯;实验用水为二次蒸馏水。

1.2　实验方法 (1)标准工作曲线的绘制 精密量取芦丁对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于10mL容量瓶中,各加入30%乙醇至1.0mL,加入0.5mL0.05g/mL Na NO2溶液,放置6m in后再加入0.3mL0.1g/mL A l(NO3)3溶液,摇匀,放置6m in后加入3mL0.04g/mL Na OH溶液,用水定容至标线,摇匀,放置15m in,在510nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,芦丁对照品溶液的浓度为横坐标,绘制标准工作曲线。

黄酮含量的测定方法黄酮含量的测定方法1、对照法1）①对照品制备：精密称取芦丁对照品20.8mg，置于100ml容量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。

②样品溶液制备精密称取样品0.50g，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，称定重量，用70%乙醇补足减失重量，即得。

③标准曲线的制备精密称取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml比色管中，加70%乙醇10ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加1mol/L 氢氧化钠溶液10ml，加70%乙醇置刻度，摇匀，放置15分钟。

各取10ml 置于50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度。

在510nm的波长下测定吸光度。

2）①样品溶液的制备：分别精确称取80℃恒温干燥的样品用50%甲醇回流提取，料液比1：15,提取两次，每次30min，将两次提取液合并浓缩至一定体积，用30%甲醇定容至50ml 容量瓶中。

从其中取出12ml溶液放入100ml 容量瓶中，稀释至刻度，再从100ml 容量瓶中取出1.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，为待测样品液Ⅰa和Ⅱa。

②最大吸收波长的选择：分别作样品液Ⅰa、Ⅱa及芦丁标准品的吸收曲线，均在350 nm 处有一强吸收，因此选择350 nm为测定波长。

③标准曲线的制定：精密称取芦丁对照品10.3mg，用少量30%乙醇溶解后，转移至50ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。

分别精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml芦丁溶液置于100ml 容量瓶中，于350 nm 波长处测定吸光值，以芦丁空白为参比，以芦丁浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，提示在4.12～12.36mg／103ml浓度之间，吸光度值与浓度呈现良好的线性关系。

④含量测定结果：分别吸取2．2．1中Ⅰa和Ⅱa待测样品液各适量于石英比色池中，按标准芦丁一吸光度测定法，以样液空白参比，于350nm 波长下测定吸光值，计算各提取液中总黄酮含量。

果蔬中黄酮类物质的研究进展王岸娜;向琳;吴立根;屈凌波;周瑜【摘要】果蔬营养物质丰富,含有多种对人体健康有益的成分,黄酮类物质是其重要的生物活性物质,能防治心血管疾病、抑菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗癌及抗病毒等,对人体健康起着重要作用.与人工合成的多种防治人类疾病的物质相比较,黄酮类物质作为天然活性成分,在减少疾病风险时更具安全性.由于果蔬种类的多样性、果蔬营养基质的复杂性以及果蔬黄酮类物质的低量性,有关黄酮类物质低成本、低污染、高提取率、高效率的提取方法及简便、快速、准确、稳定的检测方法近年来得到了研究人员的广泛关注.综述了部分果蔬中黄酮类物质的作用、优化的提取工艺、检测技术及应用,旨在为果蔬中黄酮类物质的开发及综合利用提供依据.【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(040)003【总页数】8页(P118-125)【关键词】果蔬;黄酮类;生物活性;提取;检测【作者】王岸娜;向琳;吴立根;屈凌波;周瑜【作者单位】河南工业大学粮油食品学院,河南郑州450001;河南工业大学粮油食品学院,河南郑州450001;河南工业大学粮油食品学院,河南郑州450001;河南工业大学粮油食品学院,河南郑州450001;河南工业大学粮油食品学院,河南郑州450001【正文语种】中文【中图分类】TS201.20 引言水果和蔬菜在人们日常饮食中的地位重要，富含多种营养物质、生物活性物质以及在人体健康中发挥重要作用的成分[1]。

随着人们的健康意识日渐提高以及对绿色食品功能性的关注，越来越多的研究表明，水果和蔬菜中的许多生物活性物质对人类健康有着重要意义。

新鲜的黑葡萄和绿葡萄能保护心脏[2]；蓝莓浆果能抗炎[3]；苦瓜能抗氧化[4]；柑橘果皮能抗肿瘤[5]等，都与其所含的黄酮类物质紧密相关。

通常把通过三碳链（C 环）连接具有酚羟基的两个苯环（A 环、B 环）的含15 个碳原子的多酚类物质称作黄酮类物质，其骨架可用 C6-C3-C6 表示（图1）。

菜豆中总黄酮提取工艺及含量测定涂建飞;卢立;张晶【摘要】目的测定菜豆豆荚总黄酮含量,优化菜豆中黄酮提取工艺.方法以芦丁为对照品通过紫外分光光度法测定总黄酮含量,将回流法、超声法、煎煮法提取黄酮类化合物的提取效率进行对比,采用正交法优化了超声提取工艺,用最佳提取工艺验证实验结果.结果提取次数对黄酮提取率影响显著,超声时间和乙醇浓度对提取率影响不显著.结论最佳提取工艺为85％乙醇、超声60min、提取3次,菜豆中总黄酮含量为158.86mg/100g.【期刊名称】《人参研究》【年(卷),期】2013(025)002【总页数】3页(P43-45)【关键词】菜豆;芦丁;最佳提取工艺【作者】涂建飞;卢立;张晶【作者单位】吉林农业大学中药材学院吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院吉林长春·130118【正文语种】中文菜豆(Phaseolus vulgaris L.)又名豆角，芸豆，四季豆等，属豆科(Fabaceae)，蝶形花亚科(Faboideae)，为一年生草本矮生或蔓生植物，色泽嫩绿，味道鲜美，是人们日常生活中经常食用的一种蔬菜[1]。

菜豆营养价值高，含有丰富的碳水化合物、蛋白质、维生素和矿物质，且有增进食欲，防治癌症，改善心脑血管系统，防止便秘，增加胃肠揉动等功效，适合肥胖，糖尿病，冠心病，癌症患者食用，是人们生活生产中重要的作物之一[2～3]。

黄酮类化合物具有抗癌、防癌作用、抗自由基活性、抗脂质过氧化、抗病毒、抗急性胰腺炎等药理作用,可用于多种疾病的治疗[4～5]。

对菜豆中黄酮类化学成分研究十分缺乏，具有很好的发展前景，菜豆中的黄酮的含量未有文献报道，本文测定菜豆中黄酮含量，为以后的研究提供理论依据。

1.1 材料菜豆(Phaseolus vulgaris L.)由吉林农业大学园艺学院韩玉珠教授提供及鉴定。

1.2 仪器752紫外可见分光光度计(上海成光仪器有限公司)；KQ-250DB数控型超声清洗器；101型电热温度干燥箱(北京科伟永新仪器有限公司)。