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近年，酵素产品深受广大消费者的追捧，《 酵素产品分类导则》（QB/T 5324—2018）规定，以动物、植物、菌类等为原料，经微生物发酵制得的含有特定生物活性成分的产品即为酵素。
酵素果冻口感好、体积小，具有促进肠道蠕动、改善肠道环境、改善便秘、降脂减肥等功能，受到消费者青睐[1]。
目前，市面上酵素果冻多为复合原料，高达10多种。
部分不法商家在生产过程中采用障眼法，利用决明子、芦荟等本身doi:10.16736/41-1434/ts.2023.22.067基金项目：赞宇科研基金项目（2023）。
作者简介：李远飞（1984—），男，大专，工程师，研究方向为食品安全检测。
通信作者：郑静（1990—），女，本科，工程师，研究方向为食品和农产品质量安全检测。
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浅析高效液相色谱-串联质谱法测定酵素果冻中大黄素和芦荟大黄素Determination of Emodin and Aloe-emodin Amounts in Enzyme Jelly by High Performance LiquidChromatography-tandem Mass Spectrometry ◎ 李远飞1,2，郑 静1，贺 璐1，魏寒桥1，林晓敏1（1.浙江宏正检测有限公司，浙江 宁波 315100；2.赞宇科技集团股份有限公司，浙江 杭州 310009）LI Yuanfei 1,2, ZHENG Jing 1, HE Lu 1,WEI Hanqiao 1, LIN Xiaomin 1 (1.Zhejiang Hongzheng Testing Co., Ltd., Ningbo 315100, China；2.Zanyu Technology Group Co., Ltd., Hangzhou 310009, China)摘 要：本文建立了高效液相色谱-串联质谱法，测定酵素果冻中大黄素和芦荟大黄素的分析方法。
中药制剂中大黄素提取工艺的进展摘要：本实验主要详细介绍了大黄素的几种常见的提取工艺，论述了提取工艺的进展，大黄素常见的提取方法有反相高效液相色谱法，葡聚糖凝胶分子筛及重结晶法，超声波－微波协同萃提取测定大黄素含量且获得较为满意的结果，实验证明该方法分离能力强、干扰少，具有广泛的应用性。
1 常用的大黄素提取方法1.1方法一：准确称取烘至恒重的本品粉末5 g，加硫酸液(2．5ml／1)30 ml，加热回流2h，冷却，加氯仿50ml，水浴回流1h，分取氯仿层，酸液再加氯仿40ml，继续回流，冷却后分取氯仿层，合并氯仿层，水洗三次，回收氯仿，残渣加甲醇溶解定容至5ml[1]。
1.2方法二：(双相水解提取法)精密称取样品粉末5g，加入60m1氯仿浓度为2．5M硫酸溶液，水浴回流4h，转至分液漏斗中静置，分出氯仿层再用氯仿60、50、40m1，萃取酸水层，合并回收氯仿液，残渣加甲醇溶解、定容至5m1，[1]1.3方法三：准确称取烘至干燥恒重的本品粉末5g，置圆底烧瓶内，加甲醇40m1，加热回流提取1h，过滤，滤液蒸干，残渣加2.5M硫酸液10m1，沸水浴中水解30 min，放冷后用乙醚萃取三次(20m1，15m1，15m1分取乙醚层，合并，回收乙醚，残渣加甲醇溶解、定容至5ml)。
将三种方法制得的样品液10m1点于同一块薄层板上，展开后观察。
[1]2 超声波－微波协同萃提取将萃取物先用硅胶层析板点样，初步确定萃取效果。
展开剂为石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸= 15∶ 5∶ 1的上层清夜。
然后将萃取物样品测试条件进行HPLC分析，萃取液中保留时间为8.288 min 的峰和对照品中大黄素(保留时间8.354 min)的出峰时间基本一致，且峰型对称，结合薄层层析分析结果可确定该组分为大黄素[2]。
实验表明，超声波功率内置为50W的仪器条件下，影响超声波－微波协同萃取大黄素的因素依次为: 乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、微波功率。
“中药化学实验技术”实验教学大纲实验 大黄中大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚的提取、分离和鉴定一 实验目的和要求：（1） 掌握pH 梯度萃取法的原理和操作技术。
（2） 学习硅胶柱色谱法分离精制大黄素。
（3） 学习离心薄层色谱法、快速制备液相色谱法分离精制大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚。
（4） 了解高速逆流色谱法的分离原理和方法。
（5） 学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法。
二 实验原理大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泻下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一味很早就被各国药典所收载的世界性生药。
大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L ），药用大黄（R. officinale Baill ）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim .et Regll）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所R 1 R 2 名 称晶 形 熔 点 -H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH 3 -OH 大黄素(Emodin)橙色针晶 256~257℃ -H-CH 2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin)橙色细针晶 206~208℃ -OCH 3 - CH 3 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H -CH 3 大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶196℃OOHOHR 2R 1酸性强弱：大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄酚≈大黄素甲醚 极性强弱：大黄酸＞芦荟大黄素＞大黄素＞大黄甲醚＞大黄酚 三 实验方法 1 酸水解取大黄粉10g ，加20%的硫酸水溶液100ml ，直火加热1小时，过滤，滤饼水洗中性，干燥。
2 总羟基蒽醌苷元的提取干燥的滤饼置索氏提取器中，加入乙醚，回流提取2.5小时，得乙醚提取液。
3 pH 梯度萃取法分离大黄中的蒽醌苷元分三次)碱液 盐酸调pH=2 350ml （分三次）沉 淀 (大黄酸)碱液 乙醚液 盐酸调360ml(分四次)沉淀(大黄素) 碱液沉淀(芦荟大黄素) 碱液 乙醚液(大黄酚+大黄素甲醚)萃取效果以TLC 来确定。
芦荟大黄素提取工艺流程
1. 芦荟采收、处理及萃取
（1）芦荟采收
采摘以芦荟叶的新鲜度为最主要考虑，以最佳分泌时间为采收时间，纯度最高；一般在晨曦挥去露水后的早晨采割。
（2）芦荟处理
采摘好的芦荟需要进行加工处理，去除芦荟叶的刺、切成小块。
可以选用冷冻食品机械压碎、热水熬煮等多种方法，以快速破损芦荟细胞壁为最终目的。
（3）芦荟萃取
一般选择萃取液中无毒、无味的有机溶剂，如二甲基丙烯酸甲酯或甲醇进行萃取。
也可以采用超声波、微波等物理萃取方法，以提高液固比和提取效果。
2. 芦荟大黄素的分离、纯化
（1）分离
选用分子筛层析、薄层分离、凝胶层析等技术，进行芦荟大黄素的分离，分离出的大黄素主要为芦荟大黄素的水解物-蜜环烷酸。
（2）纯化
再对分离出的芦荟大黄素水解物，进行紫外吸收谱、质谱等多种分析手段检测，通过硅胶柱、逆流层析、逆渗析、高效液相色谱等手段纯化出芦荟大黄素，产品纯度达到98%以上。
⼤黄中⼤黄素的提取实验报告⼤黄中⼤黄素的提取、分离和鉴定⼀、实验⽬的2）熟悉蒽醌类成分的提取分离⽅法 2）掌握PH梯度提取法的原理和操作技术3）掌握蒽醌类化合物鉴定⽅法 4）了解液液萃取法分离混合物的实验⽅法⼆、实验原理⼤黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉⾎解毒、逐瘀通经等功效。
其主要有效成分为⼤黄素、芦荟⼤黄素、⼤黄素甲醚等蒽醌类化合物 ,其中⼤部分为结合的蒽醌,少量为游离的蒽醌。
结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基,故呈弱酸性,能溶于⽔、⼄醇、碳酸氢钠溶液,但在有机溶剂中的溶解度很⼩。
游离的蒽醌易溶于氯仿、⼄醚等有机溶剂⽽不溶于⽔。
其中，⼤黄酸具有羧基，酸性最强；⼤黄素具有β-酚羟基，酸性第⼆；芦荟⼤黄素连有羟甲基，酸性第三；⼤黄素甲醚和和⼤黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可⽤碱性强弱不同的溶液进⾏梯度萃取分离。
⼤黄酸 R1=H R2=COOH⼤黄素 R1=CH3 R2=OH芦荟⼤黄素 R1=CH2OH R2=H⼤黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3⼤黄酚 R1=CH3 R2=H本实验主要⽤薄层层析法分离纯化⼤黄素，其Rf值由⼤到⼩分别为⼤黄酚和⼤黄素甲醚、⼤黄素、芦荟⼤黄素、⼤黄酸。
三、实验器材1)试药：⼤黄粗粉、20 %硫酸溶液、5 %碳酸氢钠溶液、5 %碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、⼄酸⼄酯、硅胶CMC-Na板、⽯油醚、⼤黄素标准品等2)仪器： 250 ml烧杯X2、200ml烧杯X2、100ml烧杯X1、10ml烧杯X3、250 ml分液漏⽃X1、100 ml量筒X1、10 ml量筒X1、索⽒提取器1套、中号铁圈X1、烧杯夹X1、250 ml上嘴抽滤瓶X1、8 cm布⽒漏⽃X1、药品匙X1、玻璃棒X1、胶头滴管X1、⾼⽅形染⾊缸X1、150 mm结晶⽫X1、硅胶管X2、洗瓶X1、⽑刷X1四、实验操作（⼀）酸⽔解⽤天平称取⼤黄粉10g，置500ml烧杯中，加20%H2SO4⽔溶液100ml，直⽕加热1⼩时，⽤布⽒漏⽃抽滤，滤饼⽔洗后于70℃左右⼲燥。
HPLC法测定大黄提取物中芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量闫海燕【摘要】建立了同时测定大黄提取物中芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的HPLC方法.色谱条件:色谱柱为Prontosil-C18-ace-Eps (250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇—水(90∶10,体积比),流速1.0 mL·min-1,检测波长254 nm,柱温25℃,进样量20 μL.结果表明,芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在1.3～10.4 μg·mL-1、1.3～6.5μg· mL-1、3.0～12.0 μg·mL-1范围内线性关系良好,R2分别为0.9997、0.9999、0.9992,平均加标回收率分别为115.5％、98.1％、99.9％.该方法操作简单、结果准确、灵敏度高,可用于大黄提取物的质量控制.%A HPLC method was established for simultaneous determination of aloe-emdion, chrysophanol and physcion in Rheum palmatum L. Extract. HPLC Analysis was performed on a Prontosil-Cu-ace-Eps column (250 mm × 4. 6 mm,5 μm) with the mixture of methanol and water(90 ! 10,volume ratio) as mobile phase at a flow rate of 1. 0 mL ? Min-1 with a sample volume of 20 μL. The detection wavelength was 254 nm at 25 °C. The linear range of aloe-emdion,chrysophanol and physcion was 1. 3 ～10. 4 μg ? mL-1 (R2 =0. 9997) ,1. 3 ～6. 5 μg ? mL-1(R2=0. 9999) and 3. 0 ～12. 0 μg ? mL-1(R2=0. 9992) with the average recovery of 115. 5%,98. L%,and 99. 9%,respectively. This method is simple, accurate with high sensitivity. Therefore, it can be used for the quality control of Rheum palmatum L. Extract.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2012(029)010【总页数】3页(P87-88,94)【关键词】高效液相色谱法;大黄;芦荟大黄素;大黄酚;大黄素甲醚【作者】闫海燕【作者单位】宝鸡文理学院陕西省植物化学重点实验室,陕西宝鸡721013【正文语种】中文【中图分类】O657.72大黄(Rheum palmatum L.)为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄的干燥根及根茎，是一种多年生草本植物，其主要药用成分为蒽醌类衍生物[1]。
1 引言芦荟大黄素（AE）是蓼科植物掌叶大黄的根和块茎中含有的一种活性成分,也是芦荟中含有的重要的药理成分羟基蒽醌衍生物中的一种[1]。
其作为中药中的一种重要的活性成分，已经发现了很多的药理作用，对诱导癌细胞凋亡，与DNA作用、对免疫细胞的增殖都有一定的作用。
人们对它的研究已经从分离提取等方法的研究逐步上升到在医学领域的应用作用。
本文就近些年有关芦荟大黄素的提取方法、测定方法以及其应用进行了简单综述。
2芦荟大黄素的性质芦荟大黄素的分子式C15H10O5，分子量270.2 ，结构式如图1，其为橙色针状结晶(甲苯中), 或土黄色结晶粉末。
熔点223～224°，易升华。
可溶于乙醛、苯、热乙醇、稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液。
在乙醚及苯中呈黄色, 氨水及硫酸中呈绯红色。
在酸性溶液中被还原则生成蒽酚及其互变异构体的蒽酮。
图1 芦荟大黄素的化学结构式Fig1 Chemical structure of aloeemodin3 芦荟大黄素的提取方法3.1一般萃取陈伟[2]等以无水乙醇为萃取剂，从芦荟叶片和渗出汁液中提取芦荟大黄素。
把熟库拉索芦荟叶片切割成10片，清洗干净后，收集渗出来的汁液，水浴加热蒸干，得到黄色的芦荟大黄素的粗产品，把产品放置在烧杯中，每次用5ml的无水乙醇提取4次，过滤，即可得到芦荟大黄素。
3.2超临界CO2流体萃取卢智[3]等采用最常用的等温降压技术，在此过程中，芦荟萃取物和夹带剂随CO2流出萃取釜，然后流入低压的分离釜。
压力降到二氧化碳临界压力以下时，会极大地降低芦荟大黄素在CO2的溶解度，最后芦荟大黄素和夹带剂会被留在分离釜中，进而达到分离提取的目的。
3.3 微波辅助萃取马稳等[4]利用微波辅助正交实验法研究芦荟中芦荟大黄素的最佳提取工艺，考察微波辐射功率、乙醇浓度、料液比及辐射时间等单因素对提取率的影响，进行正交实验。
结果表明微波辅助萃取使得芦荟大黄素的提取率为1.25%，与传统醇提法相比，该法省时、提取率高。
基金项目：甘肃省药品监督管理局科研项目（项目编号：２０１８ＧＳＦＤＡ０２８） 第一作者简介：徐向恩，副主任中药师；研究方向：中药材、中药饮片检验及质量标准。
Ｔｅｌ：１８９９３３７７８６４；Ｅ ｍａｉｌ：９４７９４９６０９＠ｑｑ ｃｏｍ通讯作者简介：李玲，副主任药师；研究方向：药品检验和质量分析。
Ｔｅｌ：１３９９３３８３６３０；Ｅ ｍａｉｌ：６９３６８７７２１＠ｑｑ ｃｏｍ大黄中芦荟大黄素等５种蒽醌成分含量测定方法的探索研究徐向恩１，朱爱丽１，薛金龙１，蒋文霞１，徐义明２，李玲１（１．平凉市药品检验检测中心，甘肃平凉７４４０００；２．泾川县食品药品检验检测中心，甘肃泾川７４４３００）摘要 目的：为大黄中游离蒽醌的含量测定探索更加适宜的检测条件。
方法：通过对在２５４ｎｍ和４４０ｎｍ检测波长处获得的５种指标性蒽醌类成分图谱形状、分离程度的分析，对比此两个波长处检出结果的优劣。
结果：在４４０ｎｍ处芦荟大黄素和大黄酸受干扰最小，图谱基线平稳，干扰峰较少，分离效果理想。
结论：大黄中游离蒽醌含量测定在４４０ｎｍ检测波长处测定结果更加准确，建议将４４０ｎｍ作为游离蒽醌的检测波长。
关键词：大黄；游离蒽醌；含量测定；检测波长中图分类号：Ｒ９２１ ２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－３６５６（２０２１）０１－００８４－０５ｄｏｉ：１０ １９７７８／ｊ ｃｈｐ ２０２１ ０１ ０１６Ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ５ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇａｌｏｅｅｍｏｄｉｎｉｎｒｈｕｂａｒｂＸＵＸｉａｎｇｅｎ１，ＺＨＵＡｉｌｉ１，ＸＵＥＪｉｎｌｏｎｇ１，ＪＩＡＮＧＷｅｎｘｉａ１，ＸＵＭｉｎｇｙｉ２，ＬＩＬｉｎｇ１（１．ＰｉｎｇｌｉａｎｇＣｉｔｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｐｉｎｇｌｉａｎｇ７４４０００，Ｃｈｉｎａ；２．ＪｉｎｇｃｈｕａｎＣｏｕｎｔｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｊｉｎｇｃｈｕａｎ７４４３００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｍｏｒｅｓｕｉｔａｂｌｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｒｅｅａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓｉｎｒｈｕ ｂａｒｂ Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｐｅａｋｓｓｈａｐｅａｎｄｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓｏｆｆｉｖｅｉｎｄｅｘａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓｉｎＲｈｕｂａｒｂａｔｔｈｅｄｅ ｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｓｏｆ２５４ｎｍａｎｄ４４０ｎｍｗａｓｍａｄｅ，ａｎｄｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓａｔｔｈｅｓｅｔｗｏｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｌｏｅｅｍｏｄｉｎａｎｄｒｈｕｂａｒｉｃａｃｉｄｈａｄｌｅｓｓｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｗｉｔｈｓｔａｂｌｅｂａｓｅｌｉｎｅ，ｇｏｏｄｐｅａｋｓｈａｐｅａｎｄｉｄｅａｌｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎａｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆ４４０ｎｍ Ｃｏｎｃｌｕ ｓｉｏｎ：Ｉｔｉｓｍｏｒｅａｃｃｕｒａｔｅｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｆｒｅｅａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓｉｎｒｈｕｂａｒｂａｔｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆ４４０ｎｍ，ａｎｄｉｔｉｓｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄｔｏａｄｏｐｔ４４０ｎｍａｓｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｆｏｒａｓｓａｙｏｆｆｒｅｅａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｈｕｂａｒｂ；ｆｒｅｅａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ；ａｓｓａｙ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ 大黄为常用中药，《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）２０１５年版一部“含量测定”项以高效液相色谱法分别测定五种蒽醌类成分的总量（总蒽醌和游离蒽醌），作为其质量控制指标。
