基因工程原理练习题及其答案
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第一章绪论名词解释:1.基因操作:将在细胞外产生的核酸(物质)分子插入到病毒,质粒或其它载体系统中,再整合到特定的宿主中,从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。
2.间断基因:序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA间隔区,使一个基因分隔成不连续的若干区段。
我们称这种编码序列不连续的基因为间断基因。
3.启动子:DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位,也就是使转录开始的部位。
4.亚克隆:当初始克隆中的外源DNA片段较长,含有许多目的基因以外的DNA片段时,在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行,将目的基因所对应的一小段DNA找出来,这个过程叫“亚克隆”。
填空题:1.基因操作的核心部分是基因克隆,基因克隆的基本要点有(克隆基因的类型),(受体的选择)和(载体的选择)。
2.(基因)是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的,也可以是(不连续的);可以是(DNA),也可以是RNA;可以存在于染色体上,也可以(存在于染色体之外如质粒、噬菌体)。
3.基因操作并不是一个法律概念,除了包括基因克隆外,还包括基因的(表达)、(调控)、(检测)和(改造)等与基因研究相关的内容。
4.启动子是指(基因转录过程中控制起始的部位)。
通常一个基因是否表达,(转录起始)是关键的一步,是起决定作用的。
在转录过程中,启动子还是(RNA聚合酶)的结合位点。
5.原核生物的RNA聚合酶主要由两部分组成:(核心酶)和(σ因子),其中σ-因子并不参与RNA的合成,它的作用主要是(识别要转录的起始位点)。
6.从(启动区)到(终止区)的这一段距离称为一个转录单位,或者一个转录产物,其中可包括一个或者多个基因。
7.转录终止子主要有两种,一种是(依赖ρ因子),另一种是(不依赖ρ因子)。
8.基因的书写方式,通常是写出的DNA序列总是与(mRNA)相同的那条链,方向是从(5')到(3')。
对于碱基的位置,一般自转录起始点向两个方向编号,其中转录起始点定为(+1),(在起始点上游第一个碱基)定为-1。
高中生物《基因工程》练习题(含答案解析)XXX《基因工程》练题题号得分一一、单选题(本大题共20小题,共20.0分)1.如图为DNA分子的某一片段,其中①②③分别表示某种酶的作用部位,则相应的酶依次为()二总分A.解旋酶、限制酶、DNA连接酶C.限制酶、DNA连接酶、解旋酶B.限制酶、解旋酶、DNA连接酶D.DNA连接酶、限制酶、解旋酶2.下列有关基因工程技术的叙述,正确的是()A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C.选用细菌为重组质粒受体细胞是因为质粒易进入细菌细胞且繁殖快D.只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达3.如图为基因表达载体的模式图。
以下有关基因工程的说法错误的是()A.基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建B.任何基因表达载体的构建都是一样的,没有差别C.图中启动子和终止子分歧与起始暗码子和终止暗码子D.抗生素抗性基因的作用是作为标记基因,用于鉴别受体细胞中是否导入了载体4.一些细菌能借助限制性核酸内切酶抵御外来入侵者,而其自身的基因组DNA经预先修饰能躲避限定酶的降解。
以下在动物体内发生的过程当中,与上述细菌行为相似的是()A.巨噬细胞内溶酶体杀灭病原体B.T细胞受抗原刺激分泌淋巴因子C.组织液中抗体与抗原的特异性结合D.疫苗诱导机体发生对病原体的免疫5.某目的基因两侧的DNA序列所含的限制性核酸内切酶位点如图所示,最好应选用下列哪种质粒作为载体()XXX.C.D.6.下图是研究人员使用供体生物DNA中无限增殖调控基因制备单克隆抗体的思路流程。
以下相关叙述精确的是()A.酶a、酶b作用位点分别为氢键和磷酸二酯键B.Ⅰ是经免疫的记忆细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞C.筛选出既能无限增殖又能产生专一抗体的Ⅱ必须通过分子检测D.上述制备单克隆抗体的方法涉及转基因技术和动物细胞核移植技术7.下列关于基因工程技术的说法,正确的是()A.切割质粒的限制酶均只能特异性地识别3-6个核苷酸序列B.PCR反应中两种引物的碱基间应互补以保证与模板链的正常结合C.载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为标记基因D.目的基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制8.在其他条件具备的情况下,在试管中进入物质X和物质Z,可得到相应产物Y.下列叙述正确的是()A.若X是DNA,Y是RNA,则Z是逆转录酶B.若X是DNA,Y是mRNA,则Z是脱氧核苷酸C.若X是RNA,Y是DNA,则Z是限制性内切酶D.若X是mRNA,Y是核糖体上合成的大分子,则Z是氨基酸9.下图透露表现的是三种黏性末端,以下说法精确的是A.甲、乙、丙黏性末端是由两种限制酶作用产生的B.若甲中的G处发生突变,限制酶可能无法识别该切割位点C.乙中的酶切位点在A与G之间D.目前常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等几类原核生物10.如图是利用基因工程技术生产可使用疫苗的部分过程,其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性核酸内切酶。
基因工程原理练习题及其答案一、填空题1.基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
2.基因工程的两个基本特点是:(1)____________,(2)___________。
3.基因克隆中三个基本要点是:___________;_________和__________。
4.碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用________________、_______________、______________________________。
5.同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为。
6.部分酶切可采取的措施有:(1)____________(2)___________ (3)___________等。
7.第一个分离的限制性内切核酸酶是___________;而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。
8.限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同,但识别的序列都是_________,它们属于_____________。
9.DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段,具有两种酶活性:(1)____________;(2)________________的活性。
10.为了防止DNA的自身环化,可用_____________去双链DNA__________________。
11.EGTA是____________离子螯合剂。
12.测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶,它只有_____________酶的活性,而没有_______酶的活性。
13.切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。
14.欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式,通常可采用_________或_______________。
基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是:A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案:D2. 基因工程中,用于将目的基因导入植物细胞的方法是:A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案:C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案:C二、填空题1. 基因工程中,常用的运载体有____、____和____。
答案:质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中,常用的筛选标记基因有____、____和____。
答案:抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。
答案:基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。
在农业中,基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物;在医学领域,基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等;在工业上,基因工程可以用于生产酶、疫苗等;在环境保护方面,基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。
2. 基因工程中,如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达?答案:确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面:首先,目的基因需要有合适的启动子和终止子,以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止;其次,需要考虑目的基因的密码子偏好性,以确保其在宿主细胞中能被高效翻译;再次,需要考虑目的基因的稳定性,避免其在宿主细胞中被降解;最后,还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。
四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。
答案:基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。
重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病;基因治疗可以用于治疗遗传性疾病;疾病诊断可以通过基因检测来实现;基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。
然而,基因工程的应用也带来了伦理问题,如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。
第一章测试1.1972年,P. Berg领导的研究小组在世界上第一次成功地实现了DNA体外重组。
( )A:对B:错答案:A2.基因工程诞生的意义毫不逊色于有史以来的任何一次技术革命。
( )A:对B:错答案:A3.基因工程受体只能是单个细胞,而不能是组织、器官、更不能是个体。
( )A:错B:对答案:A4.世界上第一例转基因植物是转基因烟草。
( )A:错B:对答案:B5.世界上第一个转基因动物是转基因小鼠。
( )A:对B:错答案:A第二章测试1.最早分离得到的限制性核酸内切酶是( )型限制性核酸内切酶。
A:ⅢB:ⅣC:ⅠD:Ⅱ答案:C2.分离得到的第一个Ⅱ型限制性核酸内切酶是( )。
A:EcoR IB:BamH ⅠC:Hind ⅡD:Hind Ⅲ答案:C3.进行不完全酶切消化时可采取的方法有( )。
A:增加反应体积B:缩短反应时间C:减少酶的用量D:降低反应温度答案:ABCD4.在大肠杆菌及其它细菌中,DNA连接酶催化的连接反应是利用NAD(或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)作能源。
在动物细胞及噬菌体中,则是利用ATP(或腺苷三磷酸)作能源。
A:对B:错答案:A5.选择在12℃~16℃之间用DNA连接酶进行黏性末端连接反应,是为了达到( )之间的平衡。
A:反应速率B:黏性末端的退火C:酶活性D:产物浓度答案:ABC第三章测试1.基因工程中的质粒载体必须包含哪些组成部分( )。
A:选择标记基因B:启动子序列C:酶切插入位点D:复制必需区答案:ACD2.第一个用于基因克隆的天然质粒是( )质粒。
A:pBR322B:pMB1C:pSC101D:pColE1答案:C3.在λ噬菌体裂解周期的早期,环状的λ DNA分子按( )方式进行复制A:γ型双向B:θ型单向C:θ型双向D:γ型单向答案:C4.在λ噬菌体裂解周期的晚期,环状的λ DNA分子按( )方式进行复制。
A:半保留复制B:γ型双向C:滚环D:θ型双向答案:C5.λ噬菌体头部外壳蛋白只能容纳相当于λ噬菌体基因组大小的( )比例的DNA分子。
高中基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程是指:A. 基因的自然选择B. 基因的人工选择C. 基因的人工重组D. 基因的自然重组答案:C2. 基因工程中常用的载体是:A. 质粒B. 病毒C. 染色体D. 线粒体答案:A3. 基因枪法属于哪种基因转移技术?A. 化学法B. 物理法C. 生物法D. 机械法答案:B4. 以下哪个不是基因工程的步骤?A. 目的基因的获取B. 目的基因的克隆C. 目的基因的表达D. 目的基因的自然选择答案:D5. 基因工程在医学领域的应用不包括:A. 基因治疗B. 基因检测C. 基因编辑D. 基因克隆答案:D二、填空题6. 基因工程的核心技术是________。
答案:重组DNA技术7. 基因工程中常用的受体细胞有________和________。
答案:大肠杆菌、酵母菌8. 基因工程在农业上的应用包括________和________。
答案:转基因作物、基因改良9. 基因工程在环境保护中的应用包括________和________。
答案:生物修复、污染物降解10. 基因工程在工业生产中的应用包括________和________。
答案:生物催化剂、生物制药三、简答题11. 简述基因工程的基本原理。
答案:基因工程的基本原理是利用分子生物学技术,将目的基因从一种生物体中提取出来,然后通过重组DNA技术将其插入到另一种生物体的基因组中,使其在新的宿主细胞中表达,从而获得具有特定性状的生物体或生产特定的生物产品。
12. 基因工程在医学领域有哪些应用?答案:基因工程在医学领域的应用包括基因治疗,通过将正常基因导入患者体内以治疗遗传性疾病;基因检测,用于疾病诊断和风险评估;基因编辑,通过修改基因序列来治疗疾病;以及生产生物药物,如胰岛素、干扰素等。
四、论述题13. 论述基因工程的伦理问题及其解决途径。
答案:基因工程的伦理问题主要包括对人类基因组的修改可能带来的未知风险、基因歧视、生物多样性的减少等。
基因工程复习题题型:名词解释(10个)30分;填空(每空1分) 20分;选择题(每题1分)10分;简答题(4个)20分;论述题(2个)20分。
第一章绪论1.名词解释:基因工程:按照预先设计好的蓝图,利用现代分子生物学技术,特别是酶学技术,对遗传物质DNA直接进行体外重组操作与改造,将一种生物(供体)的基因转移到另外一种生物(受体)中去,从而实现受体生物的定向改造与改良。
遗传工程广义:指以改变生物有机体性状为目标,采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作,以改良品质或创造新品种。
包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。
狭义:基因工程。
克隆:无性(繁殖)系或纯系。
指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的DNA分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。
2.什么是基因克隆及基本要点?3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。
A) 限制性内切酶和DNA连接酶的发现(标志着DNA重组时代的开始);B) 载体的使用;C) 1970年,逆转录酶及抗性标记的发现。
4.基因工程研究的主要内容是什么?基础研究:基因工程克隆载体的研究基因工程受体系统的研究目的基因的研究基因工程工具酶的研究基因工程新技术的研究应用研究:基因工程药物研究转基因动植物的研究在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究第二章基因克隆的工具酶1.名词解释:限制性核酸内切酶:一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列,并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。
回文结构:双链DNA中的一段倒置重复序列,当该序列的双链被打开后,可形成发夹结构。
同尾酶:来源不同、识别序列不同,但产生相同粘性末端的酶。
同裂酶:不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列黏性末端:DNA末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的DNA末端通过互补配对粘合,这样的DNA末端,称为粘性末端。
平末端:DNA片段的末端是平齐的。
基因工程原理习题集1、DNA分子克隆技术:克隆,指含有单一的DNA重组体的无性繁殖系,或指将DNA重组体引入宿主细胞建立无性繁殖系的过程。
DNA分子克隆技术也称基因克隆技术,是在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接,转入细胞获得大量拷贝的过程。
其基本步骤包括:制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接,制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。
载体在细胞内自我复制,并带动重组的分子片段共同增殖,从而产生大量的DNA分子片段。
主要目的是获得某一基因或DNA 片段的大量拷贝,有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆,就可以深入分析基因的结构与功能,随着引入的DNA片段不同,有两种DNA库,一种是基因组文库,另一种是cDNA库.2、分子杂交:两条不同来源的DNA(或RNA)链或DNA与RNA之间存在互补顺序时,在一定条件下可以发生互补配对形成双螺旋分子,这种分子称为杂交分子。
形成杂交分子的过程称为分子杂交。
3、限制性片段长度多态性:从不同个体制备的DNA,使用同一种限制性内切酶酶切,切得的片段长度各不相同。
酶切片段的长度可以作为物理图谱或者连接图谱中的标记子.通常是在酶切位点处发生突变而引发的。
4、报告基因:一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个表达产物非常容易被鉴定的基因、5、多聚酶链式反应(PCR):一种体外扩增DNA的方法.PCR使用一种耐热的多聚酶,以及两个单链引物。
以过高温变性将模板DNA分离成两条链。
低温退火使得引物和一条模板单链结合,然后是中温延伸,反应液的游离核苷酸紧接着引物从5/端到3/端合成一条互补的新链。
而新合成的DNA又可以继续进行上述循环,因此DNA的数目不断倍增。
6、核酸的凝胶电泳:将某种分子放到特定的电场中,它就会以一定的速度向适当的电极移动。
某物质在电场作用下的迁移速度叫做电泳的迁移率,它与电场强度成正比,与该分子所携带的净电荷数成正比,而与分子的摩擦系数成反比(分子大小、极性、介质的粘度系数等)。
基因工程试题及答案# 基因工程试题及答案## 一、选择题1. 基因工程中常用的工具酶是:A. 限制性内切酶B. DNA聚合酶C. 逆转录酶D. DNA连接酶2. 基因工程中,用于目的基因的克隆通常使用:A. 质粒B. 噬菌体C. 人工染色体D. 转座子3. 下列哪项不是基因工程的应用领域?A. 农业改良B. 疾病治疗C. 能源开发D. 武器制造## 二、填空题1. 基因工程中,常用的宿主细胞包括________、________和________。
2. 基因枪法是一种________技术,可以将目的基因直接导入植物细胞。
## 三、简答题1. 简述基因工程的基本操作步骤。
2. 基因工程在医药领域的应用有哪些?## 四、论述题1. 论述基因工程对现代农业的影响及其潜在风险。
## 参考答案### 一、选择题1. 答案:A, D。
限制性内切酶和DNA连接酶是基因工程中用于切割和连接DNA片段的常用工具酶。
2. 答案:A。
质粒是基因工程中常用的载体,用于克隆和表达目的基因。
3. 答案:D。
基因工程的应用领域广泛,但武器制造不属于其应用范围。
### 二、填空题1. 答案:大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞。
这些是基因工程中常用的宿主细胞,用于表达外源基因。
2. 答案:基因转移。
基因枪法是一种基因转移技术,通过高速微粒子将DNA射入细胞内。
### 三、简答题1. 答案:基因工程的基本操作步骤包括:目的基因的获取、载体的选择与构建、目的基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有目的基因的细胞、目的基因的表达与检测。
2. 答案:基因工程在医药领域的应用包括:生产重组蛋白药物、基因治疗、疫苗开发、疾病诊断等。
### 四、论述题1. 答案:基因工程对现代农业的影响主要体现在作物改良、提高产量、增强抗病虫害能力等方面。
通过基因工程,可以培育出抗旱、抗盐碱、抗病的作物新品种,提高作物的适应性和产量。
然而,基因工程也存在潜在风险,如基因流可能导致非目标物种的基因改变,以及转基因作物对生态环境的影响等。
高考生物《基因工程》真题练习含答案1.[2024·山东卷]关于“DNA的粗提取与鉴定”实验,下列说法正确的是()A.整个提取过程中可以不使用离心机B.研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后,应充分摇匀再倒入烧杯中C.鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变D.仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰答案:A解析:研磨后,可以将研磨液过滤到烧杯中,在4 ℃冰箱中放置几分钟后,再取上清液,可以不使用离心机,A正确,B错误。
鉴定过程中的沸水浴加热可使DNA双螺旋结构发生改变,C错误。
该实验中,为排除二苯胺加热后可能变蓝对实验结果造成干扰,可设置加二苯胺不加DNA的对照组,D错误。
2.[2023·新课标卷]某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具,将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接,以构建重组表达载体。
限制酶的切割位点如图所示。
下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是()A.质粒和目的基因都用酶3切割,用E.coli DNA连接酶连接B.质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割,用T4 DNA连接酶连接C.质粒和目的基因都用酶1和酶2切割,用T4 DNA连接酶连接D.质粒和目的基因都用酶2和酶4切割,用E.coli DNA连接酶连接答案:C解析:只用一种限制酶切割质粒和目的基因,会使质粒和目的基因发生自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接,A错误;用酶1切割目的基因,产生的是黏性末端,用酶3切割质粒,产生的是平末端,无法连接,B错误;质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后,可使用T4 DNA连接酶连接,使目的基因定向插到质粒中,C正确;酶2和酶4切割后产生的黏性末端相同,易导致目的基因和质粒自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接,并且用酶4切割会破坏标记基因,D错误。
3.[2023·浙江6月]某研究小组利用转基因技术,将绿色荧光蛋白基因(GFP)整合到野生型小鼠Gata3基因一端,如图甲所示。
基因工程复习题题型:名词解释(10个)30分;填空(每空1分) 20分;选择题(每题1分)10分;简答题(4个)20分;论述题(2个)20分。
第一章绪论1.名词解释:基因工程:按照预先设计好的蓝图,利用现代分子生物学技术,特别是酶学技术,对遗传物质DNA直接进行体外重组操作与改造,将一种生物(供体)的基因转移到另外一种生物(受体)中去,从而实现受体生物的定向改造与改良。
遗传工程广义:指以改变生物有机体性状为目标,采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作,以改良品质或创造新品种。
包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。
狭义:基因工程。
克隆:无性(繁殖)系或纯系。
指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的DNA分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。
2.什么是基因克隆及基本要点?3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。
A) 限制性内切酶和DNA连接酶的发现(标志着DNA重组时代的开始);B) 载体的使用;C) 1970年,逆转录酶及抗性标记的发现。
4.基因工程研究的主要内容是什么?基础研究:基因工程克隆载体的研究基因工程受体系统的研究目的基因的研究基因工程工具酶的研究基因工程新技术的研究应用研究:基因工程药物研究转基因动植物的研究在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究第二章基因克隆的工具酶1.名词解释:限制性核酸内切酶:一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列,并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。
回文结构:双链DNA中的一段倒置重复序列,当该序列的双链被打开后,可形成发夹结构。
同尾酶:来源不同、识别序列不同,但产生相同粘性末端的酶。
同裂酶:不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列黏性末端:DNA末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的DNA末端通过互补配对粘合,这样的DNA末端,称为粘性末端。
平末端:DNA片段的末端是平齐的。
限制性核酸内切酶的酶活性单位(U):在酶的最适反应条件下,在50μl容积中,60分钟内完全切割1μg λDNA所需的酶量为1个酶活性单位(unit 或U)限制性核酸内切酶的星活性:指限制性内切酶在非标准条件下,对与识别序列相似的其它序列也进行切割反应,导致出现非特异性的DNA片段的现象。
连杆(linker):化学合成的8~12个核苷酸组成的寡核苷酸片段。
以中线为轴两边对称,其上有一种或几种限制性核酸内切酶的识别序列,酶切后可产生一定的粘性末端,便于与具有相同粘性末端的另一DNA片段连接。
衔接头(adaptor):化学合成的寡核苷酸,含有一种以上的限制性核酸内切酶识别序列。
其一端或两端具有一种或两种内切酶切割产生的黏性末端。
底物位点优势效应:酶对同一个DNA底物上的不同酶切位点的切割速率不同。
激酶:对核酸末端羟基进行磷酸化的酶。
2. 说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
用属名第一个字母和种名的头两个字母组成的3个字母斜体的略语表示寄主菌的物种名以及菌株(型)的代号命名。
该菌株(种)中发现的不同的酶按照顺序以罗马字母编号I, II, III等。
如:Escherichia coli用Eco表示。
第四个字母代表菌株或株型、变种名,若酶存在于质粒上,则需大写字母表示非染色体遗传因子。
例:Hin d III 从流感嗜血菌株(Haemophilus Influenzue)d 株中分离的第三个酶。
Eco R I 表示基因位于Escherichia coli中的抗药性R质粒上。
前三个字母用斜体,其他用正体表示。
如果酶存在于一种特殊菌株中,三个字母后加上菌株名称符号,名称最后部分往往包含罗马数字,•表示在该特殊菌株中发现这种酶的先后次序。
3. 引起限制性核酸内切酶星活性的可能因素有哪些?若使用buffer不当, 会有star activity,而star activity是指限制酶对所作用的DNA 及序列失去专一性, 当酶辨认切割位置的能力降低,导致相似的序列或是错误的辨认序列长度也会作用,而产生错误的结果。
所以当DNA同时以两种限制酶处理时,选择可使两种酶之活性反应均可达75﹪以上的restriction buffer,若找不到适当的buffer则先加低盐的buffer使其中一酶作用后,在加入高盐buffer使另一酶作用,若无法以盐的高低分别加入不同的buffer,则先加入一种buffer作用后,加3M NaOAc/95﹪alcohol沉淀DNA,再加另一种buffer作用。
4. DNA片段之间的连接方式有哪些?具黏性末端的DNA片段之间的连接、具平末端DNA片段之间的连接、DNA片段末端修饰后进行连接、DNA片段加连杆(linker)后的连接。
5. 什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase Ⅰ经蛋白酶(枯草杆菌蛋白酶)裂解而从全酶中除去 5'--3' 外切活性的肽段后的大片段肽段,而聚合活性和 3'--5' 外切活性不受影响。
也称为 Klenow 片段(Klenow fragment),或E.coli DNA 聚合酶Ⅰ大片段。
5→'3'聚合酶3→'5'外切酶无小亚基活性6. DNA聚合酶、RNA聚合酶、反转录酶、末端转移酶、多核苷酸激酶和碱性磷酸酯酶有哪些主要特性?它们在基因工程中的主要用途分别是什么?第三章基因工程的载体1.名词解释:载体:指能够运载外源DNA片段(目的基因)进入受体细胞,具有自我复制能力,使外源DNA 片段在受体细胞中得到扩增和表达,不被受体细胞的酶系统所破坏的一类DNA分子。
克隆载体:用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体。
一般具有较低的分子量、较高的拷贝数和松弛型复制子。
主要由细菌质粒或与其它质粒、噬菌体及真核生物病毒的DNA重组构建。
表达载体:使目的基因在宿主细胞中得以表达的载体。
可将重组体DNA导入适合的受体细胞,使所载的目的基因能够复制、转录和翻译。
穿梭载体:称双功能载体(bifunctional vector)。
能在两种不同的生物体内复制的载体。
质粒:指独立存在于宿主细胞染色体外、能够自我复制的DNA分子。
松弛型质粒:拷贝数多于10个的质粒。
严谨型质粒;拷贝数为1至几个的质粒。
接合质粒;指质粒所携带的基因的功能是使细胞彼此有效地接触,以便将质粒DNA从供体细胞转移至受体细胞。
如:质粒上的tra基因使宿主细胞(大肠杆菌)产生菌毛,合成细胞表面物质,促使宿主细胞与受体细胞接合。
质粒的不亲和性;显性质粒;隐性质粒;质粒的迁移作用;多拷贝质粒;整合质粒;穿梭质粒;表达质粒;探针质粒;pUCl8质粒;pBR322质粒;溶菌生长;溶源生长;原噬菌体;烈性噬菌体;溶原化;柯斯载体或粘粒(cosmid);cos位点;人工染色体2. 作为工程载体必备哪些基本条件?3. 试述质粒载体、噬菌体载体、柯斯载体、M13单链丝状噬菌体载体和酵母人工染色体载体各自的组成特点及其在基因工程中的应用。
4.简述质粒的生物学特性有哪些?5.构建人工质粒的目的?6.理想质粒载体应具备的条件及构建需遵循的原则是什么?7.λ-DNA作为载体的优点是什么?8. 为什么野生型的 噬菌体DNA不宜作为基因工程载体?该如何改造?第四章目的基因的制备1.名词解释:目的基因;基因文库 cDNA文库;2.常规分离目的基因的方法有哪些?其原理分别是什么?3.克隆目的基因的方法有哪些?4.什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库的原理,涉及哪些基本过程?它同遗传学上的基因库、cDNA文库有什么不同?第五章目的基因的导入和重组子的筛选1.名词解释:受体细胞;感受态细胞;转化;转导;转染;体外装配;转换子;重组子;转化率;负筛选;正筛选;a-互补筛选2. 试述几种常用的转化方法。
3.试述根据载体的选择标记进行重组子筛选的方法和原理。
4.试述根据插入序列的表型特征进行重组子筛选的方法和原理。
5.DNA片断之间的连接方式有哪些?各种连接方式的优缺点及DNA重组中需要注意什么问题?6.受体细胞选择的原则?第六章外源基因的表达1.名词解释:融合蛋白;分泌蛋白;包涵体;外源基因表达体系2. 大肠杆菌表达载体构成的重要元件有哪些?3.试比较大肠杆菌、酵母、植物和动物细胞基因表达载体各自组成的特点。
4. 真核基因在大肠杆菌中表达存在的问题和高效表达的对策是什么?5.基因表达产物的检测方法有哪些?第七章基因操作的基本技术1.名词解释:分子杂交;探针;PCR; 引物;随机引物;切口位移;热启动;缺口翻译;Northern 印迹;Southern印迹2.DNA制备的基本步骤有哪些?3.碱裂解法和CTAB法的原理。
4.凝胶电泳有哪几类?影响琼脂糖凝胶电泳的参数有哪些?5.PCR的基本原理是什么?PCR反应体系的组成成份是什么?6.试述PCR反应的程序及参数。
7.PCR反应引物设计需遵循的原则有哪些?8.试述核酸分子杂交的类型和基本步骤。
9.探针标记的方法有哪些?10.说明Southern杂交的原理和方法。
11.Northern印迹与Southern印迹有什么不同?第八章植物基因工程及应用1.植物遗传转化方法主要有?2.基因枪转化的优点?3.天然的Ti质粒能作为表达载体使用吗?为什么?4.理想杀虫剂应具备什么特性?第九章动物基因工程及应用1.名词解释:转基因生物;共抑制效应;多效性胚胎干细胞2.转基因共机制效应的特征?3.导致转基因失活的原因可能有哪些?4.试述动物基因工程的载体有?5.如何筛选转基因多效性干细胞?第十章医学基因工程及应用1.名词解释: 胰岛素;基因诊断;基因治疗;2.基因鉴定的作用?3.如何进行基因治疗?基因工程原理练习题及其答案一、填空题1.基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
2.基因工程的两个基本特点是: (1)____________,(2)___________。
3.基因克隆中三个基本要点是:___________;_________和__________。
4.通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段,可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。
5.限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的,第一个大写字母取自_______,第二、三两个字母取自_________,第四个字母则用___________表示。
6.部分酶切可采取的措施有:(1)____________(2)___________ (3)___________等。