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《环境工程实验Ⅰ》（环境工程微生物）教学大纲一、基本信息1二、教学目标及任务环境工程微生物学实验是一门操作技能较强的课程。
通过一系列的实验操作，强化学生无菌操作的理念，使学生掌握微生物实验的基本方法。
通过观察不同的实验材料，进行各项实验操作、分析实验结果、完成实验作业等环节，配合课堂教学，以验证和巩固课堂讲授的微生物学的理论知识。
本课程支撑环境工程专业毕业要求1、2、4和6。
三、学时分配教学课时分配四、实验内容及教学要求实验一:光学显微镜的使用及细菌形态的观察实验目的：学会光学显微镜的使用方法，观察细菌的形态。
本实验教学要求：了解光学显微镜的构造，理解光学显微镜成像原理，掌握显微镜的操作和保养方法。
观察细菌的个体形态，学会生物图的绘制。
本实验重点、难点：显微镜的操作和保养方法，油镜观察细菌的形态，生物图的绘制。
实验二:细菌的简单染色和革兰氏染色实验目的：学会细菌染色的操作技术。
本实验教学要求：了解细菌的图片及染色在微生物实验中的重要性，理解革兰氏染色的原理，掌握细菌染色的操作技术。
本实验重点、难点：掌握微生物的一般染色和革兰氏染色方法。
实验三:真菌的形态观察实验目的：学会用显微镜观察真菌的个体形态本实验教学要求：进一步熟悉和掌握显微镜的操作方法，掌握制作水浸片的方法，观察真菌（酵母、霉菌）的个体形态。
本实验重点、难点：学习制作水浸片的方法，观察真菌的个体形态实验四:微生物细胞的计数和测量实验目的：学会用血球计数板对微生物计数本实验教学要求：了解血球计数板的结构，理解血球计数板计数计微生物的原理和掌握计数方法。
学习测微技术，测量细胞（酵母菌）的大小。
本实验重点、难点：测微技术原理，测量细胞（酵母菌）的大小实验五:培养基的配制，器皿的包扎，灭菌方法实验目的：学习培养基的配制及灭菌方法本实验教学要求：了解配制培养基的过程，理解配制培养基的原理，掌握配制方法。
学会各种各种器皿的包扎，灭菌技术。
本实验重点、难点：培养基配制的原理及方法。
培养基的配制和灭菌细菌的纯种分离、培养接种技术及菌落形态的观察姓名：***学号：************ 课程名称：环境工程微生物实验一、实验目的1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。
2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。
3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。
4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。
5、学会几种接种技术。
6、平板菌落计数。
7、抗Cu菌的筛选。
8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。
9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。
二、实验原理1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。
调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。
由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。
本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。
2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。
加压蒸汽灭菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。
培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。
接种时对接种针等采用灼烧灭菌。
3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。
此法加样量不宜太多，只能在0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。
平板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。
4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。
本次实验采取斜面接种法、穿刺接种法，使用到的接种工具是接种环，接种针。
环境工程微生物学大实验实验报告实验十二环境中四环素抗性细菌的分离鉴定组员：吴富华，张真，，金炯震环5205一、实验目的1、自行设计实验方案从环境中分离四环素抗性菌的实验方法。
2、分离获得四环素抗行菌。
3、检测并分析获得的菌株的四环素抗性强弱。
4、学会通过16SrDNA鉴定实验获得的菌株的种属。
二、实验要求1、自行设计实验证明富集培养是否成功。
2、观察并记录实验现象，作适当的分析或解释。
3、获得至少一株四环素抗性菌（不要多于三株），并进行短期保存。
4、根据实验视频指导和说明，完成菌株基因组DNA纯化，16SrDNA的PCR扩增。
5、比较各组筛选出的抗性菌抗性强弱。
6、各组间交流实验过程和实验结果，分析抗性菌抗性的影响因素。
7、养成良好的实验习惯和团队合作的作风，并给出评价。
三、实验器材1、培养基（营养琼脂，琼脂粉，酵母膏，胰蛋白胨，氯化钠），提供四环素，琼脂糖，灭菌条件。
2、室温和37℃恒温培养箱和摇床。
3、离心机，漩涡震荡仪，PCR仪，电泳仪，紫外成像分析仪。
四、实验步骤（略）1、配置富集培养基和四环素梯度培养基2、四环素抗性菌富集培养3、单菌株筛选4、四环素抗性强弱比较5、单菌株基因组DNA的提取6、16SrDNA的PCR扩增7、PCR产物电泳实验内容、具体操作单菌株基因组DNA提取（5.17进行步骤1-4；5.18进行步骤5-10；5.20进行步骤11）（1）选择5.8号挑选的菌株进行DNA提取实验；（2）取200μL菌液转移到1.5mL灭过菌的EP管中，10000rpm常温离心1min，去掉上清（得到菌细胞）。
菌细胞可在-20℃冻存。
（3）如果是革兰氏阳性菌，取100μL，1mg/mL的溶菌酶/TE加到菌液中，漩涡震荡混匀，37℃温浴1h（溶菌步骤）。
（4）用取液器（移液枪）缓慢吸加500μL（革兰氏阳性）或600μL（革兰氏阴性）裂解缓冲液和20μL，20mg/mL蛋白酶K（proteinase K），充分混匀，50℃过夜（完全裂解细菌并降解所有蛋白质）。
《环境工程微生物学》课程实验教学大纲［适用对象］环境科学专业［实验学时］18学时一、实验教学任务和目的《环境工程微生物学实验》是与《环境工程微生物学》理论课程密切结合的一门重要的、非单独设课的环境科学专业基础实验课程。
课程学习的目的是让学生掌握本课程基本技能操作，为学习基础环境科学有关课程和为学生将来从事环境相关工作和科研工作奠定基础。
二、实验教学基本要求(1)训练学生掌握环境微生物学最基本的操作技能。
(2)加深理解课堂讲授的某些环境微生物学理论。
(3)培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力。
(4)培养学生实事求是、严肃认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神。
(5)培养学生树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。
三、实验教学内容实验一细菌的人工培养法1、实验目的和要求(1)掌握各种培养基接种技术。
(2)熟悉细菌在培养基中的生长现象；认识菌落、菌苔。
(3)了解常用的液体、固体和半固体培养基的成分、制备方法和用途。
2、实验内容(1)培养基的配制，摆斜面，倒平板(2)分离培养法(平板划线法)(3)斜面培养基接种方法(4)液体培养基接种法(5)半固体培养基的接种法(6)观察细菌在培养基上的生长情况：细菌各种培养物的示教；描述细菌在各种培养基上的生长现象；观察大肠杆菌与痢疾杆菌在半固体培养基上的现象。
普通琼脂平板，普通琼脂斜面，半固体培养基，肉汤培养基，接种环，接种针，酒精灯，大肠杆菌24小时斜面培养物等。
4、实验学时3学时实验二细菌的分布及消毒与灭菌1、实验目的和要求掌握高压蒸气灭菌器的使用方法及注意事项；证实热力和紫外线的杀菌效果；证实常用消毒剂的消毒效果；证明细菌在自然界和正常人体的存在，为在微生物学实践中树立严格的“无菌观念”提供依据。
2、实验内容(1)高压蒸气灭菌法(2)干热灭菌器(干烤箱)(3)紫外线的杀菌实验(4)热力对芽胞及繁殖体的作用(5)药物敏感性试验(6)化学消毒剂的杀菌的作用------ 手指皮肤消毒前后的细菌学检查(7)空气中的细菌检查(8)污水和净水中的细菌数检查(9)皮肤表面的细菌检查3、实验仪器普通琼脂平板、1%高层琼脂，血琼脂平板，无菌试管，无菌吸管，无菌平皿，灭菌棉签，咽拭子，酒精灯等。
