细胞培养4细胞分离与纯化和细胞系、细胞克隆

一、选择题1-5 BABBB 6-10 BDABB 11-15 ABCAC 16-18 CCC二、填空题1、根据线粒体和叶绿体起源内共生学说，认为线粒体起源于细菌，叶绿体起源于蓝藻。

2、协助扩散和主动运输的主要相同之处在于都需要载体，速度都很快,主要差别在于协助扩散只能顺浓度梯度进行，不消耗能量；主动运输可以逆浓度梯度进行，消耗能量。

3、核纤层结构的组成成分, 属于中间纤维蛋白家族4，核小体的核心由四种组蛋白（H2A、H2B、H3、H4）各两分子共8分子组成的八聚体，核心的外面缠绕了1.75圈的DNA双螺旋，其进出端结合有H1组蛋白分子。

5、YAC（酵母人工染色体）的构建成功说明：一个有功能的染色体至少有自主复制DNA序列,着丝粒DNA序列, 端粒DNA序列三个不可缺少的功能元件。

6、真核细胞和原核细胞中都存在的rRNA是5SrRNA。

7、细胞周期调控中的两个主要因子细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶（CDK 激酶）和。

细胞周期蛋白其中前者是催化亚基，后者相当于调节亚基。

三、名词解释1.常染色质(euchromatin):间期核中处于伸展状态，压缩程度相对较低、着色较浅的染色质。

2.双信号系统：以PIP2代谢为基础的信号通路中，胞外刺激使转化为IP3和DAG，引发IP3/Ca2+和DAG/PKC 两条信号转导途径，在细胞内沿两个方向传递，实现细胞对外界的应答，这样的信号系统称之为双信号系统。

3.细胞周期同步化：将一个细胞群体内处于不同时期的细胞处于细胞周期的同一时相的方法。

4.多聚核糖体：具有特殊功能与形态结构的核糖体与mRNA的聚合体。

5.细胞凋亡：为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。

6.Hayflick界限：正常的体外培养的细胞寿命不是无限的，只能进行有限次数的增殖。

7踏车行为：在一定条件下,微丝的正极由于肌动蛋白亚基不断添加而延长,负极由于肌动蛋白亚基去组装缩短,这种现象称为踏车行为。

IPSC重编程阶段1.概述IPSC（induced pluripotent stem cells）是一种由成年体细胞重新编程而来的多潜能干细胞，具有类似胚胎干细胞的多能性。

IPSC的重编程过程包括细胞采集、重编程因子的导入和多能性干细胞的诱导三个主要阶段。

2.细胞采集在IPSC重编程过程中，首先需要从成年体中采集细胞，主要包括皮肤细胞、血细胞等。

一般来说，细胞的采集需要经过严格的无菌操作和个体信息保护，以确保细胞的纯度和安全性。

3.重编程因子导入将采集到的细胞导入实验室中，通过转染或病毒导入等方法，将重编程因子（如Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc等）导入细胞内，重新激活细胞中的干细胞相关基因，从而使细胞发生重编程并获得多能性。

4.多能性干细胞诱导经过重编程因子的导入后，细胞将逐渐转变成多能性干细胞，拥有分化成各种细胞类型的潜能。

这一过程需要经过严格的培养和筛选，以确保所得到的IPSC具有多能性和稳定性。

克隆筛选阶段1.概述在IPSC的克隆筛选阶段，研究人员需要对获得的多能性干细胞进行克隆和筛选，以得到稳定的IPSC细胞系。

这一阶段包括细胞克隆、单细胞分离和细胞鉴定等步骤。

2.细胞克隆将获得的多能性干细胞进行克隆，得到同源性较高的细胞裙。

通常采用限稀稀释法或单细胞培养法，以保证每个细胞的同质性和纯度。

3.单细胞分离对克隆后的细胞裙进行单细胞分离，以得到单个细胞。

这一步骤需要经过精细的操作和严格的观察，确保每个细胞的完整性和活力。

4.细胞鉴定对分离得到的单个细胞进行鉴定，包括细胞形态观察、遗传学检测和表观遗传学分析等，以确认细胞的同源性和干细胞的多能性，保证所得到的IPSC细胞系达到研究要求。

纯化扩增阶段1.概述在IPSC的纯化扩增阶段，需要对经过克隆筛选的IPSC细胞系进行纯化和扩增，以得到足够的细胞数量和纯度，用于后续的研究和应用。

2.细胞纯化通过细胞培养、培养基优化和细胞分选等方法，对经过筛选的IPSC细胞系进行纯化，去除杂质细胞和非干细胞成分，提高细胞的同质性和纯度。

动物细胞工程制药导语动物细胞工程制药是一种利用动物细胞进行生物制药的技术。

该技术已经取得了显著的进展，并在医药领域发挥着重要作用。

本文将介绍动物细胞工程制药的原理、应用和前景。

一、动物细胞工程制药的原理动物细胞工程制药是利用动物细胞系统表达和生产药物的一种技术。

其主要原理包括以下几个步骤：1.动物细胞培养：首先需要选择合适的动物细胞系，并进行培养。

常见的动物细胞系包括CHO细胞、HEK293细胞等。

细胞培养的条件包括培养基、培养温度、培养时间等。

2.基因克隆和转染：将药物的基因通过基因克隆技术导入到动物细胞中，使其具有产生目标药物的能力。

转染的方式包括质粒转染、病毒转染等。

3.细胞培养和增殖：转染后的细胞需要在培养条件下进行生长和增殖。

通常会添加适当的生长因子和培养基来促进细胞的生长。

4.产物分离和提纯：最后，通过适当的方法分离和提纯目标药物，可以使用离心、超滤、层析等技术进行分离纯化。

二、动物细胞工程制药的应用动物细胞工程制药已经广泛应用于医药领域，为药物的研发和生产提供了重要的技术支持。

其主要应用包括以下几个方面：1.蛋白质药物生产：利用动物细胞工程制药技术可以生产多种重要的蛋白质药物，如抗体、细胞因子等。

这些蛋白质药物在治疗癌症、免疫性疾病等方面具有重要作用。

2.疫苗生产：动物细胞工程制药技术也可以用于疫苗的生产。

通过导入相应的病原体基因到动物细胞中，使其产生病原体相关的抗原，从而制备疫苗。

3.基因治疗：动物细胞工程制药技术还可以用于基因治疗。

通过将目标基因导入到患者的细胞中，实现对基因相关疾病的治疗。

4.抗病毒药物：某些动物细胞工程技术还可以用于抗病毒药物的生产。

通过将抗病毒基因导入到动物细胞中，使其产生抗病毒蛋白，从而对抗病毒感染。

三、动物细胞工程制药的前景随着基因工程和生物技术的不断发展，动物细胞工程制药在未来的前景十分广阔。

以下是动物细胞工程制药的一些未来发展趋势：1.技术的进一步成熟：随着技术的不断发展，动物细胞工程制药技术将变得更加成熟，能够更准确、高效地生产药物。

细胞工程复习题一、名词解释[1]细胞工程：是指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。

[2]细胞融合：是指使用人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。

[3]细胞重组：从活细胞中将细胞器及其组分分离出来，再在体外一定条件下将不同来源的细胞器及其组分重新组合，使之重新装配成为具有生物活性的细胞或细胞器的一种实验技术[4]细胞培养：泛指所有体外培养，其含义是指从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境等特定的体内条件下，进行孵育培养，使之生存并生长[5]细胞全能性：指分化细胞保留全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。

[6]细胞分化：是指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程，包括时间上和空间上的分化。

[7]细胞核移植：是一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。

主要包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植。

[8]细胞悬浮培养：是将细胞接种于液体培养基中并保持良好的分散状态的培养方式[9]细胞系：由原代培养经传代培养纯化，获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。

第一次传代培养后的细胞即称之为细胞系[10]细胞株：是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株[11]细胞凋亡：也叫程序性细胞死亡是机体维持环境稳定、有基因控制的细胞自主的有序性死亡[12]细胞团培养：细胞培养时，本身代谢就慢或者脆弱，细胞密度太低或者太高都会导致细胞的凋亡，死亡的细胞裂解物包裹未凋亡的细胞形成絮状物，这些絮状物在显微镜下看就是细胞聚集。

[13]体细胞核移植：体细胞核移植又称体细胞克隆，原理即细胞核的全能性，是动物细胞工程技术的常用技术手段[14]冠瘿组织：是由根癌农杆菌感染引起的植物肿瘤组织，它能在无外加植物激素的培养基上生长。

细胞培养技术中的细胞纯化和分离随着生物技术和生物医学研究的不断发展，细胞培养技术也越来越成为一种重要的研究手段。

在进行细胞培养实验时，不仅需要在培养基中提供适宜的营养条件，还需要考虑如何保证细胞的纯度和分离。

因为如果细胞混合在一起，可能会对实验结果产生干扰，影响科学研究成果的准确性。

细胞纯化和分离技术的发展，为细胞培养实验提供了有力的支持。

一、细胞纯化技术所谓细胞纯化，即是指将同一类型的细胞从混合物中分离出来，获得纯种的细胞。

这种技术应用广泛，例如在干细胞研究中，需要将干细胞从其他细胞中纯化出来。

目前常用的细胞纯化技术主要有以下几种。

1.差速离心这种方法的原理是依靠细胞的不同沉降速度，在其它细胞和细胞碎片中分离出要纯化的细胞种类。

比如对于混合的细胞，进行差速离心后，重的细胞如肝细胞等就可以在离心管的底部沉淀下来；而轻的细胞比如造血干/祖细胞则可以在上层沉淀。

这种方法虽然方便快捷，但是由于离心速度的不同，有时会把不同的细胞类型离心到一个位置，分离效果并不理想。

2. 细胞排序技术细胞排序技术是一种可接受的方法。

这种方法利用一种叫做细胞分选仪（FACS）的设备来实现，FACS通过运用激光束可以捕捉到被染色的细胞，然后在细胞上打标签，这样细胞分选仪就能帮助实验人员将目标细胞分选出来。

不仅如此，FACS还可以根据设定的特定标记，为不同细胞类型分类和分选。

但是，这种方法价格昂贵，需要训练技能，限制了它的使用。

二、细胞分离技术与细胞纯化技术不同，细胞分离技术是将混合物中的不同细胞种类分离的过程。

这种技术在体外培养单一细胞的物种和组织研究中应用广泛。

1. 磁珠细胞分离技术这种技术广泛应用在制备纯化细胞的过程中。

基本原理是通过对细胞标记来实现磁性分离。

首先，将细胞和磁性珠以特定的方式结合在一起，对此进行特别处理，这样可以使细胞在磁场中受到磁力吸引。

然后，将细胞和磁珠贴附在磁性离心离心机上，以达到将细胞分离的目的。

植物细胞培养是指对从植物器（或小细胞团）进行培养，形官或由愈伤组织上分离的单细胞成单细胞无性系或再生植株的技术。

Haberlandt（1902）首次尝试分离和培养植物叶片单细胞技术。

植物组织培养：指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生完整植株的技术。

简称组培。

也称离体培养或试管培养。

植物细胞全能性：任何有完整细胞核的植物细胞，具有全部的遗传信息，在一定条件下均具有分化、发育成一个完整植株的潜在能力。

动植物细胞分化差异。

外植体：在组织培养中，由植物体上取下来进行离体培养的那部分组织或器官。

脱分化/去分化：由高度分化的植物器官、组织或细胞，经过离体培养，产生愈伤组织的过程。

（一个成熟细胞转变为分生状态的再分化：指脱分化的分生细胞重新恢复分化能力沿着正常的发育途径形成具有特定结构和功能的细胞的过程。

（脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程。

）植物细胞培养是指对从植物器官或由愈伤组织上分离的单细胞（或小细胞团）进行培养，形成单细胞无性系或再生植株的技术。

Haberlandt（1902）首次尝试分离和培养植物叶片单细胞技术。

平板培养法：是将悬浮培养的细胞接种到薄层培养基上进行培养的过程，是常用的单细胞培养法。

看护培养法:用同种或异种材料的愈伤组织作为看护组织来培养细胞的一种方法。

微室培养:将单个细胞放到人工制造的一个小室中进行培养的一种方法条件培养基培养法: 在培养基中加入高密度的细胞进行培养，经过一定时间后, 这些细胞向培养基中分泌一些促进细胞生长的活性物质，使培养基条件化。

使原来在合成培养基上不能分裂的细胞发生分裂。

Torres(1989)设计。

悬浮培养:指将游离的植物单细胞或小细胞团,按一定的细胞密度,在受到不断搅动或摇动的液体培养基中进行培养的一种方式。

分批培养:指把细胞分散在一定容积的培养基中进行培养，建立单细胞培养物的培养方式。

细胞生物学技术与实验方法细胞生物学技术与实验方法是研究和应用于细胞的科学技术和实验方法的总称。

通过这些技术和方法，科研人员可以深入了解细胞的结构、功能和代谢，揭示细胞的生理、病理过程以及相关疾病的机制，更好地应用于生物医学研究和药物开发领域。

本文将重点介绍一些常用的细胞生物学技术和实验方法，并进行简单的介绍和说明。

1. 细胞培养技术细胞培养技术是在人工环境中保持和繁殖细胞的方法。

细胞培养是细胞生物学研究的基础，可以通过建立细胞系来进行体外实验。

细胞培养技术的主要步骤包括细胞分离、细胞培养基的配制、细胞培养器的选择和细胞培养条件的控制等。

2. 蛋白质分离与纯化技术蛋白质是细胞中最重要的功能分子之一，从细胞中提取和纯化蛋白质对于研究蛋白质的结构、功能和相互作用至关重要。

蛋白质分离与纯化技术可以通过离心、电泳、层析、电泳转印等方法来分离和纯化目标蛋白质。

3. 免疫学技术免疫学技术是研究细胞和分子免疫学的重要手段。

包括酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫组化、流式细胞术、免疫沉淀等技术。

通过这些技术，可以检测和分析细胞表面标记物、细胞因子的表达和分泌以及分析免疫相关的细胞相互作用等。

4. 分子生物学技术分子生物学技术是研究细胞和生命分子水平的重要工具。

包括基因克隆、DNA测序、聚合酶链反应（PCR）、蛋白质组学技术、基因组学技术等。

这些技术可以用来研究细胞的基因表达、转录调控、基因突变和DNA修复等。

5. 显微镜技术显微镜技术可以观察和研究细胞的结构和功能。

常见的显微镜技术包括光学显微镜、荧光显微镜、透射电子显微镜等。

通过显微镜技术，可以观察细胞的形态、亚细胞器的位置和运动，以及研究细胞内各种细胞器和分子的分布和相互作用。

总结：细胞生物学技术与实验方法在现代生物医学研究中起到了至关重要的作用。

通过这些技术和方法，科研人员可以研究和探索细胞的微观世界，深入了解细胞的结构、功能和代谢过程。

这些技术不仅可以增加我们对人体健康和疾病的认识，还为新药研发提供了重要的参考和依据。

细胞工程原理与技术
细胞工程是一门综合性学科，涉及生物学、化学、物理学、工程学等多个领域。

其原理和技术主要包括以下几个方面：
1. 细胞培养技术：细胞培养是细胞工程的基础，包括细胞的培养基、培养条件、培养器具等方面的技术，用于维持细胞的生长和繁殖。

2. 细胞分离和纯化技术：细胞分离和纯化技术是细胞工程的重要手段，包括离心、滤过、渗透压等技术，用于分离和纯化细胞。

3. 基因工程技术：基因工程技术是细胞工程的核心技术，包括基因克隆、基因转染、基因编辑等技术，用于改变细胞的基因组成和表达。

4. 蛋白质工程技术：蛋白质工程技术是细胞工程的另一个重要技术，包括蛋白质表达、纯化、修饰等技术，用于生产和改良蛋白质。

5. 细胞生物反应器技术：细胞生物反应器技术是细胞工程的关键技术，包括反应器设计、操作、控制等技术，用于实现大规模细胞培养和生产。

细胞工程的发展将有助于解决许多医学、工业和环境等领域的问题，例如制造生物药物、生产工业酶、清除污染物等。

海南大学生物工程学院2021年《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（40分，每题5分）1. 胞间连丝的管状结构直径达40nm，因此它对细胞间的物质运输不具有选择性。

（）答案：错误解析：2. 正常细胞发生癌变时游离的核糖体增多，而附着的核糖体和内质网的数目相应减少。

（）答案：错误解析：正常细胞发生癌变后，与癌细胞恶性增殖、漫延扩散等处理过程相关的蛋白成分会过表达，从而使得粗面内质网的数目增多，附着核糖体的数目增多。

3. G蛋白偶联受体中，霍乱毒素使G蛋白α亚基不能活化，百日咳毒素使G蛋白α亚基持续活化。

（）答案：错误解析：霍乱毒素，使α亚基丧失GTP处于酶的活性并处于持续再生状态；百日咳毒素抑制Gi的活性。

4. 细胞周期蛋白及其磷酸化状态两者决定一个Cdk蛋白是否具有酶活性。

（）答案：正确解析：5. 大多数真核基因是不连续基因，在RNA中出现的部分称为外显子。

（）答案：错误解析：外显子是指由在成熟的RNA上的序列。

在基因中外显子被内含子隔开，转录后经过加工被连接在并肩，生成成熟的RNA分子。

6. 染色体上由于“位置效应”形成的非活性区在所有细胞后代中都能稳定的遗传下去。

（）答案：错误解析：基因表达有横杆效应，有的活性基因变位到异染色质区附件使会失活。

7. SDS是离子型去垢剂，可以用于膜蛋白的纯化。

（）答案：错误解析：8. 病毒的包膜是特化的细胞膜，与细胞膜在结构与功能上并无太大差异。

（）答案：错误解析：病毒的锥状包膜是特化的线粒体，吕纳县是在病毒从被感染的体细胞分离时带过来的，也是磷脂绒兰分子层，与细胞膜不同的是，病毒包膜上还有病毒的糖蛋白。

2、名词解释（40分，每题5分）1. 凋亡复合体（apotosome）答案：凋亡复合体（apotosome）是指凋亡分子Apaf1与细胞色素c形成的复合体，相对分子量为（700～1400）×103，细胞质中Caspase9的前体被募集到复合体上并发生自动切割活化，引起细胞凋亡。

一名词解释：细胞、细胞生物学二填空题：1.细胞最初是由___在__年首先发现的.2.在1902年提出的"染色体遗传理论"将____的行为与孟德尔的_____联系了起来.3.“细胞生物学”一词是_____年代出现的，它的形成得益于以下三方面的研究______、____和____。

4我国基础科学发展规划中生命科学的四大基础学科是_____、______ 、______、_______。

三选择题：1首先把植物细胞中的物质称为“原生质”（protoplasm）的是（）A J. PukinjeB E. DujardinC R. HookeD W. Flemming2 1943年（）创立细胞组分分离方法。

A ClaudeB Harrison和CarrelC HertwigD Weissman四简答题细胞学说的内容和意义。

练习题判断题1电子显微镜的镜筒是真空的，其目镜与光学显微镜的也有很大区别。

（）2染色后的电镜样品所成的像是彩色的。

（）3CsCl密度梯度离心法分离纯化样品时，样品要和CsCl混匀后分装，离心时，样品中不同组分的重力不同，停留在不同区带。

（）4去壁的植物细胞称为原生质体，它不再能分化长成完整植株。

（）5进行流式细胞术时，所用的细胞需染色，而且还需对组织块中的细胞进行分散处理。

（）填空题：1显微镜成像的三个基本要素是__________、________和_____________。

2相差显微镜的特殊构件________和_________使通过标本的光的相位差转变成振幅差，表现为_______的差别。

3介导细胞融合的方法有__________、________和_____________。

4细胞培养必须注意三个环节__________、________和_____________。

名词解释：显微结构和亚显微结构、分辨率、细胞培养、细胞融合、细胞系、细胞株、克隆、基因剔除简答题：单克隆抗体技术。