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高效液相色谱法测定麦精中的低聚糖

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高效液相色谱法测定低热量食品中的葡萄糖,果糖,蔗糖,麦芽糖醇？…

高效液相色谱法测定低热量食品中的葡萄糖,果糖,蔗糖,麦芽糖醇？…

离葡萄糖、 果糖 的离 子 交 换 型 的 高 效液 相 色
１５ 标 准 曲线 的制 作 及样 品 的测定 ．
Ｌ ５ １ 标 准 曲 线 制 作 ．
谱 柱 ， 过对该柱 的进 一 步研究发 现 （ 通 见表
１ ， 柱 还 具 有 同 时 分离 麦 芽 糖 醇 和 山 梨糖 ）该 醇 的功 能 ， 用 于 对 葡 萄 糖 、 糖 、 芽 糖 醇 可 果 麦
和山 梨 糖 醇 四 种 组 分 的 同 时 测 定 （ 图 １ 如 、 图 ２ 图 ３所 示 ） 、 。由 于该 柱 对双 糖 组分 不 能
柱 的研 究发 现 （ 见表 ２ ， 管 ＮＨ ）尽 柱 可 以通 过 改变 流动 相 中 ＣＨ Ｃ 与 Ｈｚ 的 比例达 到 Ｎ Ｏ 分 离葡 萄糖 、 糖 、 果 蔗糖 、 芽 糖 的 目的 ， 不 麦 但 能 满 足麦 芽 糖 与 麦 芽糖 醇 、 萄 糖 与 山梨 糖 葡 醇 的 分 离 要 求 ； 使 通 过 提 高 Ｃ Ｎ 的 比 即 ＨＣ
维普资讯
ｌ ２
食品与发酵工 业
Ｆ ｏ ｎ ｅｍｅ ｔｔ ｎＩｄ ｓｒ ｓ ｏ ｄａ ｄＦ ｒ ｎａｉ ｎ ｕ ｔｉ ｏ ｅ
Ｖｏ． ４ １２ Ｎｏ ４
高 效液 相色 谱 法 测定 低 热 量 食 品 中的
葡萄糖 、 果糖 、 蔗糖 、 芽糖醇和 山梨糖醇的研究 麦
Ｆ 水解 后样品中果糖古 量 ２
２ 结果 与 讨 论
２ １ 分 离柱 的选 择 ． 分 离 柱 是 高 效液 相色 谱 的 核 心 ， 对 组 其 分 的 分 离 度将 直 接 影 响 分 析 结 果 ， 了研 究 为 低 热 量食 品 中 的葡 萄 糖 、 糖 、 糖 、 芽 糖 果 蔗 麦 醇 和 山梨 糖 醇 的高 效 液 相 色谱 分析 方 法 ， 本 研 究 对 常 用 来 分 离 和 测 定 糖 类 物 质 的 Ｗａ —

高效液相色谱测定婴儿配方食品中低聚半乳糖方法的研究

高效液相色谱测定婴儿配方食品中低聚半乳糖方法的研究

高效液相色谱测定婴儿配方食品中低聚半乳糖方法的研究
[摘要]本实验对高效液相色谱测定婴儿配方食品中低聚半乳糖的方法进行研究，使用β半乳糖甘酶对低聚半乳糖进行酶解，通过HPLC测量酶解前后乳糖及半乳糖的质量差来计算样品中低聚半乳糖的总含量。

【关键词】高效液相色谱；β半乳糖甘酶；低聚半乳糖
1、引言
低聚半乳糖是一类可溶性食用纤维素，是1-7个半乳糖残基与葡萄糖或乳糖的还原端相连的低聚糖。

低聚半乳糖的α糖甘键中含有β折叠，小肠中的β半乳糖甘酶可以消化α糖甘键，但是β半乳糖甘酶经常缺失或其活性受到抑制。

2、实验方法
2.1 样品的前处理
2.4 数据处理
3、结果分析
3.1 萃取时磷酸缓冲溶液用量对低聚半乳糖加标回收率的影响
本实验通过对加标回收率的测量，对前处理方法中低聚半乳糖萃取时磷酸缓冲溶液用量进行了优化。

前处理其他条件设为：加酶量1.0ml，酶解温度为60℃，酶解时间为30min。

由表3-1可以看出，磷酸缓冲溶液用量小于40ml时，低聚半乳糖加标回收率随着磷酸缓冲溶液用量的增加而显著增加，其中磷酸缓冲溶液使用量为40ml时低聚半乳糖的加标回收率最高。

4、结论
本实验使用单因素分析法对HPLC检测婴儿配方食品中低聚半乳糖的方法进行研究，使用β半乳糖甘酶对低聚半乳糖进行酶解，通过使用HPLC测量酶解前后乳糖及半乳糖的质量差来计算样品中低聚半乳糖的总含量。

本实验对前处理中的磷酸缓冲溶液用量，加酶量，酶解时间和酶解温度进行优化，其最佳前处理条件为：萃取时磷酸缓冲溶液用量为40ml，加酶量为1.0ml，酶解时间为30min，酶解温度为60℃，其加标回收率达到82.40%。

利用高效液相色谱法测定食品中五种糖的含量

利用高效液相色谱法测定食品中五种糖的含量

图1 分离效果图
样品前处理
将苹果样品洗净、擦干、切碎并混匀，称取5.00 g 于研钵中，加入6 mL的蒸馏水磨制均匀。

磨制均匀后全部移入离心管中，4000 r·min-1离心6 min。

分离出离心液之后，将离心液导入干净的试管中，再向盛有沉淀的离心管中加入12 mL蒸馏水并搅拌，然后再进，最后将所有的离心液放入150 mL容量瓶中，并加蒸馏水稀释至相应刻度。

稀释液再用微孔滤膜过准备HPLC分析用。

色谱分析
对过滤后的稀释液进行HPLC分析。

结果与分析
色谱的保留时间
1.3的色谱条件下，分别对5种糖溶液、苹果样品和酸奶样品进行测定，发现果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及乳糖的保留时间分别是7.1、8.0
13.6 min及15.7 min，分离效果良好，样品图中也未见干扰部分。

2.2 标准曲线和最低检出限
精密配制5种糖组分的混合标准溶液，按照上述操作条件分离检测，用质量浓度（X，单位为
作为横坐标，色谱峰峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，最后得5种糖组分标准曲线的回归方程
系数及最低检测限见表1。

2.3 精密度实验
配制5种糖组分的混合标准液4份，并依次进样计算变异系数，结果见表2，RSD在4.5%～
均小于10%。

实验表明，5种糖组分的回收率均大于90 RSD均小于10%，说明本测定方法有较好的准确性和重复性。

现代食品XIANDAISHIPIN
食之不完的美筵。

——爱默生。

高效液相色谱-示差折光法测定饲料中大豆低聚糖含量

高效液相色谱-示差折光法测定饲料中大豆低聚糖含量

高效液相色谱-示差折光法测定饲料中大豆低聚糖含量潘城;欧阳立群;林钦;黄永辉;刘芳;梁敏【摘要】A method for the determination of soybean oligosaccharides in feeds by high performance liquid chro-matography method of refractive index(HPLC-RID)was developed.The samples were extracted with50%ethanol.The sep-aration was carried out with a mobile phase of water-acetonitrile.The analytes were detected by refractive index detector. The results showed that,there was a good linear correlation(R=0.9999~1.0000)between the peak area and concentration of sucrose,raffinose and stachyose within 0.5 ~ 10 mg/mL.The qualitative detection limit (LODs)of sucrose,raffinose and stachyose were less than 0.020%,and the quantitative detection limit (LOQs)were 0.036%,0.053% and 0.066%,respec-tively.The average recoveries for samples of soybean oligosaccharide were 90.6% ~106%,and the relative standard devia-tions (RSDs)were in the range of 1.6% ~ 3.5%.The results obtained by experimental verification showed the method was simple,rapid and reliable for the determination of soybean oligosaccharides in feeds.%本实验建立了饲料中大豆低聚糖的高效液相色谱分离检测方法。

高效液相色谱法测定食品中功能性低聚异麦芽糖

高效液相色谱法测定食品中功能性低聚异麦芽糖

高效液相色谱法测定食品中功能性低聚异麦芽糖高效液相色谱法测定食品中功能性低聚异麦芽糖（续）三、结果与分析3.1标准曲线的制作按照表1所示对标准混合液进行色谱测定。

表1 标准混合液浓度表（略）标准曲线的线性：根据实验数据求得麦芽糖、异麦芽糖、麦芽三糖、潘糖、异麦芽三糖、麦芽四糖、异麦芽四糖、麦芽五糖的线性回归方程依次为：y = 0.00000550 x + 0.09949685（R2=0.9912）；y = 0.00000769 x - 0.02658243（R2=0.9751）；y = 0.00000552 x + 0.00145331（R2=0.9877）；y = 0.00000643 x - 0.00042279（R2=0.9989）；y = 0.00001441 x - 0.00411445（R2=0.9998）；y = 0.00000630 x - 0.00224903（R2=0.9997）；y = 0.00001437 x - 0.00582476（R2=0.9996）；y = 0.00001451 x - 0.03036338（R2=0.9979）。

3.2样品的测定样品经溶解、除蛋白、定容、过滤进样，利用标准回归方程求得样品中各组分的含量，表2列出所测样品中各糖含量（%）。

表2 样品中各糖的含量（%）（略）四、讨论4.1样品前处理方法的选择4.1.1除蛋白试剂的选择样品中含有大量蛋白对糖测定时色谱出峰产生影响，本方法共采用了两种除蛋白试剂，结果显示：21.9%乙酸锌和10.6%亚铁氰化钾各加5mL去除蛋白样品测定时在固定时间出现同样的峰，而用50%三氯乙酸去除蛋白不会出现这一问题。

故，本方法采用50%三氯乙酸去除蛋白。

4.1.2样品超声时间的选择超声时间对样品中糖的溶出程度影响不大。

故，本方法对样品进行20min超声振荡处理。

4.2色谱柱的选择本方法先后采用了两类不同原理的色谱柱，分别为氨基（键合相）色谱柱和阳离子交换色谱柱（专用糖柱）。

高效液相色谱测定麦芽低聚糖的组分

高效液相色谱测定麦芽低聚糖的组分
分钟 内完成， 可用于研究或生产麦芽低 聚糖 的质 量 分析控制 。
（）Ｂｎａａ Ｃ８ Ｗａ ｒ） ２ ｏｄｐｋ 柱（ ｔｓ与纯水；３Ｎ ｃｏｉ １ ｅ （） ｕｌｓ ｅ ｌ
２ 实验部分
２１ 仪 器 ． Ｌ －Ａ高效液相色谱仪 ，Ｉ－ Ｓ示差折光 检 Ｃ４ ＲＤ ２ Ａ 测 器 ，－ ２ Ｘ数据 处理机 （ ＣＲ Ａ 以上 均 为 日本 岛津 产
表２ 数据表 明已处 理的样品液 同一天 内分析的
１８ ；５ （ ）１ ３ ９ ３ ２ ４ １ ：４
Ｑｕｎｉ ｔ ｅ ａｙｉ ｏ Ｆ ａｔ ｎ ｏ ａ ｔ ａｉ Ａ ｌｓ ｆ ｃｉ ｓ ｔ ｖ ｎ ｓ ｒ ｏ ｆ Ｍａｔｏｉｏａｃａｉｅ ｂ Ｈ ｇ Ｐ ｒｏｍａ ｃ ｌ ｌ ｓｃｈ ｒ ｓ ｉｈ ｆｒ ｎｅ ｏ ｇ ｄ ｙ ｅ
化物理研究所）流动相： ， 蒸馏水， 流速： ８ Ｌｍｎ ０ ｍ ／ ｉ； ． 实验在室温进行。 ２４ 测标准曲线 ．
储备液 精确 称取 无水葡 萄糖 、 麦芽糖 以及麦
３２ 标准曲线 ． 分别吸取六种糖混合液５１，５２，５Ｌ绘制 ， １，０２ ， ０
各峰面积与进样量的定量校正曲线， 得到六条通过 原 点的直线 ， 经回归分析 ，１－６ Ｇ Ｇ的相关系数分别是
２２ ４
表２ 麦芽低聚糖样品同一天重复分析结果 馗
（ ｎ＝ ５ ）
２ ｒｃ Ｐ Ｒ ｕ ｔ ．Ｊ ｒ ａ ｇ， ９２ ２４ １ ： Ｗｕ ｈ ｏｌ Ｐ ｓ ， ｅ ｈ Ｃ ｏ ｔ ｒ １８ ；４ （ ） ｈｍ ｏ
１７ ７
３ ｈｅ ａ Ｎ Ｈ， ｉｍ ｎｅ ａ Ｗ ．Ｊ ｒ－ Ｃ ｅｔ ｍ Ｗ Ｓｒ ａｎ Ｐ ｈ ｉ ，Ｄ ｙ Ｒ Ｃ ｏ ｈ ｍ ｔ ｒ１８ ；０（）４９ ａｏ ， １２７３ ：３ ｇ ９ ４ ｒ ｎ Ｐ Ｃ ｕｅ Ｊ Ｖ ｚａ ｔ Ｃ ｒｍ ｔ ｒ Ｖａ ｙ ｏｐｋ ｏｋ Ｓ ａ．Ｊ ｏ ａｏ ， ｔ ， ， ｅ ｌ ｈ ｇ

低聚木糖的测定（高效液相色谱测定方法）

低聚木糖的测定（高效液相色谱测定方法）五．低聚木糖的测定(高效液相色谱测定方法)本方法适合食品中低聚木糖的含量的测定本方法检测限：食品中低聚木糖为0.10%。

（一）方法提要试样中的低聚木糖经提取后在氨基色谱柱上分离，根据保留时间定性，用蒸发光散射检测器测定低聚木糖的含量。

（二）仪器1. 高效液相色谱仪带SEDEX 75蒸发光散射检测器。

2. 超声清洗仪。

3. 天平（精确到0.001g和0.0001g）。

4. 微孔滤膜（PVDF 0.45 μm）。

（三）试剂1. 色谱用水（Millipore纯水器制备）。

2. 乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸,加水溶解至100mL。

3. 亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解至100mL。

4.木二糖对照品，Wako公司(纯度≥90%)。

5. 木二糖标准溶液（10.0mg/mL）：精确称取50mg木二糖用蒸馏水定容至5mL 容量瓶中，即得木二糖标准溶液。

（四）测定步骤1. 样品处理：①固体样品：取均匀样品1.0g(精确到0.1mg)于150ml锥形瓶中，加水30ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml 容量瓶中，用水定容到刻度。

取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。

②液体样品：取均匀试样10mL(精确到0.1mL)置于150ml锥形瓶中，加水20ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml容量瓶中，用水定容到刻度。

取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。

2. 标准工作曲线制作。

精密吸取木二糖标准溶液1.0 ml，5.0 ml，10.0ml，分别置于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容到100mL，摇匀。

分别取10μL标准工作系列溶液进样分析，以测得的木二糖的峰面积，分别对木二糖的浓度绘制标准曲线。

3．色谱条件①色谱柱：Cosmosil Sugar D 氨基液相色谱柱250 mmi.d.×4.60mm, 5μm ；②流动相：色谱用水＋乙腈=22+78(V+V)；③流速：1.0mL/min ；④柱温：35℃；⑤蒸发光散射检测器：蒸发温度35℃，压力 3.5Bar ；4. 样品测定。

保益加麦精纤维低聚糖的测定及其对酸奶益生菌的影响

一
Ｈ ｚ ０ 溶 液 ； 柱 温 ：５ Ｓ ；进 样 量 ：２ 流 速 ： ５℃ ０ＬＬ； ｔ
０．ｍ Ｌ／ ｉ ５ ｍ ｎ。
Ｃ Ｅ ｕｑ Ｕ Ｂ ｏｌｎ Ｉ ｈ ｏｗｅ 一，Ｌ ｎｈ ａ，Ｆ Ｉ ｎ Ｈ Ｎ Ｒ —ｉ，Ｌ ａ — ｇ ，Ｌ Ｕ Ｓ ａ ． ｉ ｏ Ｕ Ｙａ—ｕ Ｅ Ｎａ
（ ． ｃ ｏ ｌ ｆ ｉｔｃ ｎ ｌｇ ， ａｔ ｈｎ Ｕｎｖ ｒ ｔ ｆ ｃ ｎ ｅａ ｄＴ ｃ ｎ ｌ ｇ ， ｈ ｎ ｈ ｉ ２ ０ ３ ， ｈｎ １ Ｓ ｈ ｏｅｏ Ｂ ｏｅ ｈ ｏｏ ｙ Ｅ ｓ Ｃ ｉａ ｉｅｓ ｙｏ Ｓ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｅ ｈ ｏｏ ｙ Ｓ ａ ｇ ａ ０ ２ ７ Ｃ ｉａ； ２ Ｓ ａ ｇ ａ Ａ ｏ ｄ＆ Ｂ ｖ ｒｇ ｓ ｔ． ｈ ｇ ａ ２ Ｏ ４ ， ｈｎ ） ．ｈ ｈ ＢＦ ｏ ｎ ｉ ｅ ｅａ ｅ ｄ， ａ ｈ ｉ ０ ２ ５ Ｃ ｉａ Ｌ Ｓｎ
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低聚木糖的测定(高效液相色谱测定方法)

五．低聚木糖的测定(高效液相色谱测定方法)本方法适合食品中低聚木糖的含量的测定本方法检测限：食品中低聚木糖为0.10%。

（一）方法提要试样中的低聚木糖经提取后在氨基色谱柱上分离，根据保留时间定性，用蒸发光散射检测器测定低聚木糖的含量。

（二）仪器1. 高效液相色谱仪带SEDEX 75蒸发光散射检测器。

2. 超声清洗仪。

3. 天平（精确到0.001g和0.0001g）。

4. 微孔滤膜（PVDF 0.45 μm）。

（三）试剂1. 色谱用水（Millipore纯水器制备）。

2. 乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸,加水溶解至100mL。

3. 亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解至100mL。

4.木二糖对照品，Wako公司(纯度≥90%)。

5. 木二糖标准溶液（10.0mg/mL）：精确称取50mg木二糖用蒸馏水定容至5mL 容量瓶中，即得木二糖标准溶液。

（四）测定步骤1. 样品处理：①固体样品：取均匀样品1.0g(精确到0.1mg)于150ml锥形瓶中，加水30ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml 容量瓶中，用水定容到刻度。

取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。

②液体样品：取均匀试样10mL(精确到0.1mL)置于150ml锥形瓶中，加水20ml，超声20min，再加入乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液各2ml，摇匀后，经滤纸过滤到50ml容量瓶中，用水定容到刻度。

取此滤液通过微孔滤膜过滤，滤液待用。

2. 标准工作曲线制作。

精密吸取木二糖标准溶液1.0 ml，5.0 ml，10.0ml，分别置于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容到100mL，摇匀。

分别取10μL标准工作系列溶液进样分析，以测得的木二糖的峰面积，分别对木二糖的浓度绘制标准曲线。

3．色谱条件①色谱柱：Cosmosil Sugar D 氨基液相色谱柱 250 mm i.d.×4.60mm, 5µm ； ②流动相：色谱用水＋乙腈=22+78(V+V)；③流速：1.0mL/min ；④柱温：35℃；⑤蒸发光散射检测器：蒸发温度35℃，压力 3.5Bar ；4. 样品测定。

高效液相色谱_蒸发光散射检测法同时测定单糖_双糖及低聚果糖

1.3.3 样品溶液配制 精确称取 3 份样品，用超纯水定容，超声 2mi n，
0 . 4 5μm 滤膜过滤，备用。
1.4 标准曲线绘制 取配制好的系列标准溶液稀释至不同浓度，按 1.2
节的色谱条件分别进样，以峰面积的自然对数为纵坐标 ( y ) ，以进样量的自然对数为横坐标( x ) ，进行线性回归 计算，得标准曲线回归方程。 1.5 方法学考察
在 1.2 节的色谱条件下，将配制好的系列标准溶液分别 进样并计算，得标准曲线回归方程和最小检出限，见表 1。
表 １ 标准曲线、线性范围及检出限 Table 1 Linear regression equations, linear ranges and detection
limits of glucose, fructose, sucrose, GF2, GF3, and GF4
由于单、双糖、低聚糖类物质没有紫外吸收，对 其含量测定通常采用高效液相色谱 - 示差折光检测器 (HPLC-RID)的方法和纸层析色谱分析法。目前的报道[8-11] 中，多以示差检测器测定，但此方法灵敏度低，系统 平衡时间长，对工作环境要求苛刻，要求恒温、恒流 速、且无法采用梯度洗脱。蒸发光散射检测器( E L S D ) 作为新一代通用型质量检测器，它对有质量的物质都能 进行检测，而不需其分子结构中具有发光基团。这在 一定程度上弥补了其他 HPLC 检测器的不足，特别是检 测无电子和分子吸收光谱信号的化合物时，显示出一定 的优越性。其原理是将样品与流动相的混合物通过喷射
the carrying gas was air. Under the above conditions, all glucose, fructose, sucrose, GF2, GF3 and GF4 could be well separated, and the spiked recoveries were 97.62% – 99.55% with a RSD less than 3% (n = 5). This method is accurate, rapid, simple and
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麦精是从大麦和麦芽中通过酶解提取的 纯 天然营养物质。由于其含有丰富的营养物质及 特殊的风味，已被广泛应用于乳品、饮料及啤 酒酿造中 [1-2] 。但其原料中含有的β-葡聚糖溶 于水后会增加料液的黏度，而不利于料液的过 滤，所以在麦精的生产过程中会对其中的β-葡
聚糖进行降解 [3]。 β-葡聚糖属非淀粉多糖类，是以β-(1-3) 和β-(1-4)混合连接的葡萄糖聚合物[4]。经酶解后 会形成一系列由β-1,4糖苷键连接而形成的低聚 糖 [5]。而且具有重要的生理功能[6-7]。Johansson等 (2006)研究发现β-葡聚糖酶解后其中纤维三糖和
*通讯作者 收稿日期：2012-03-06 基金项目：中央高校基本科研业务费专项资金和上海科委对本研究的资助课题(10dz1200904)。 作者简介：吕宝龙(1987—)，男，陕西宝鸡人，硕士研究生，研究方向为谷物化学。
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食品安全与检测
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2012年 第 37卷 第 10期
食品科技
2012年 第 37卷 第 10期 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食品安全与检测
高效液相色谱法测定麦精中的 低聚糖
吕宝龙，陈如琪，卢艳花，刘少伟* (华东理工大学生物工程学院，上海 200237)
摘要 ： 采用高效液相色谱法对麦精中的纤维三糖和纤维四糖进行了定量测定研究 ， 最终确定 的最佳分析方法为 Carbomix H-NP10 ： 5% 分析柱 ； 示差折光检测器 55 ℃ 柱温 ； 流动相 ： 2.5 mmol/L H2SO4水溶液；流速：0.5 mL/min；进样量：20 µL。该方法精密度RSD＜2%，回收率＞ 97%。在此色谱条件下15 min内完成了三糖和四糖的分离，结果比较理想。研究表明此新建方 法准确而快速，并能适用于绝大部分食品中低聚糖的测定。 关键词：麦精；高效液相色谱法；纤维三糖；纤维四糖 中图分类号：TS 207.3 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2012)10-0257-03
Abstract: HPLC was established to determine cellotriose and cellotetrose in malt extract. The final chromatographic conditions are as follows: Carbomix H-NP10: 5% chromatographic column with refractive index detector, elution influent is 2.5 mmol/L sulfuric acid solution, flow rate 0.5 mL/min and injection volume 20 µL. The repeatability relative standard deviations of this method is below 2% and the recovery is over 97%. A satisfied result is obtained under this chromatographic conditions, and the whole separation can be finished within 15 min. The results showed that this new HPLC analysis method is not only correct but also fast enough to be used to determine most kinds of foods containing these oligosaccharide. Key words: malt extract; HPLC; cellotriose; cellotetrose
纤维四糖占所有低聚糖的90%以上[8-9]。所以准确 测定其中纤维三糖和纤维四糖含量对研究麦精的 营养品质及应用具有重要意义。 目前，测定碳水化合物的主要方法包括气 相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、配有脉冲电 流检测器的高效阴离子交换色谱(HPAEC-PAD) 等 [8-11] 。气相色谱法虽可测定糖的组成，但必须 对糖进行衍生化才可检测，其检测步骤繁琐。 HPAEC-PAD法虽然准确但对设备要求较高。 HPLC相对于其他2种比较简单、快速、准确。所 以本实验尝试利用葡萄糖淀粉酶和普鲁兰酶专一 性酶解α-1,4糖苷键和α-1,6糖苷键Байду номын сангаас特性除去麦 精中的麦芽低聚糖后[12]，运用HPLC法，以示差检 测器对麦精中的纤维三糖和纤维四糖进行测定。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 保益加麦精：上海英联食品饮料有限公司； 麦芽三糖、麦芽四糖标准品(以此为对照测定麦精 中纤维三糖和纤维四糖的含量) [8-9]：Sigma公司； 葡萄糖淀粉酶、普鲁兰酶：诺维信公司；其他试 剂均为分析纯。 1.2 仪器与设备 Waters600高效液相色谱仪：配有自动进样 器、示差检测器，Waters公司；旋转蒸发仪：上 海亚荣生化仪器厂；离心机：上海安亭科学仪器 厂；0.22 µm微孔滤膜。 1.3 试验条件 1.3.1 色谱条件 色谱柱：Carbomix H-NP10： 5%(10 µm，7.8 mm×300 mm)，检测器：示差检 测器，流动相：2.5 mmol/L H2SO4水溶液，柱温： 55 ℃，进样量：20 µL，流速：0.5 mL/min。 1.3.2 样品制备 精确称取10 g保益加麦精溶于 100 mL去离子水中，调节pH至4.0后，分别加入50 µL的葡萄糖淀粉酶和普鲁兰酶，在60 ℃下糖化 反应10 h，进行彻底糖化。糖化结束后沸水浴5 min灭酶后在糖化液中加入3倍于体积的95%的乙 醇，放入4 ℃的冰箱，静置24 h后取出，在4000 r/min转速下离心30 min，除去蛋白和多糖。反复 2~3次 。收集上清液旋转蒸发定容至100 mL，经 0.22 µm滤膜过滤后精密吸取上述溶液20 µL注入 液相色谱仪，记录峰面积。 1.3.3 标准溶液的配制 精确称取10 mg麦芽三糖 和麦芽四糖2种标准品溶于10 mL去离子水中，配
Determination of oligosaccharide in malt extract by HPLC method
LV Bao-long, CHEN Ru-qi, LU Yan-hua, LIU Shao-wei*
(East China University of Science and Technology, Shanghai 200237)