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P53和PCNA 蛋白在大肠癌中的表达及意义【关键词】大肠肿瘤；免疫组织化学；P53蛋白；PCNA蛋白大肠癌是我国死亡率较高的恶性肿瘤之一，大肠癌患者主要死亡原因是术后转移。
临床上尚无可靠的方法预测预后，因此探讨大肠癌转移的分子机制，寻找与大肠癌转移相关的生物标记是大肠癌基因研究和临床研究的重要课题之一。
作者应用免疫组化技术对P53、PCNA 蛋白进行检测，探讨它们在大肠癌中的临床病理意义及其对大肠癌的预后判断的临床价值。
1材料与方法1.1标本来源全部病例选自2005—2008年我院大肠癌根治术切除标本共51例，其中男性26例，女性25例，年龄22～80岁，平均年龄（58±17.68）岁。
分化程度和转移情况为：高分化19例，中分化19例，低分化13例；伴淋巴结转移19例，伴肝脏转移2例。
所有材料按照全国大肠癌协作组制定的标准，由两名病理医生复查确定。
1.2试剂免疫组化试剂盒：鼠抗人PCNA蛋白抗体（即用型），鼠抗人P53蛋白抗体（即用型），均购自福州迈新生物技术开发公司。
1.3方法采用免疫组化（SP法）检测P53及PCNA蛋白，阳性对照由试剂盒提供，阴性对照由PBS代替一抗，实验步骤按说明书操作。
按全国大肠癌协作组1986年标准进行组织学分类［1］：高分化(管状腺癌Ⅰ级及乳头状腺癌)，中分化(管状腺癌Ⅱ级及粘液腺癌)，低分化(管状腺癌Ⅲ级及印戒细胞癌及未分化癌)。
以细胞核内出现棕黄色颗粒为P53、PCNA阳性细胞，对染色阳性细胞,高倍镜下选择10个视野计数，每个视野计数100个肿瘤细胞，PCNA阳性细胞数占肿瘤细胞数10%～25%为(+)，26%～50%为(++)，51%～75%为(+++)，>75%为(++++)；P53阳性细胞数占肿瘤细胞数＜10%为(-)，10%～25%为(+)，26%～50%为(++)，51%～75%为(+++)，＞75%为(++++)；间质纤维组织增生(有或无)和淋巴细胞浸润(-、+、++、+++)。
大肠良恶性病变p53基因表达及意义彭敦发;林鸿民【期刊名称】《世界胃肠病学杂志：英文版》【年(卷),期】1996(0)4【摘要】目的研究抗癌基因Ｐ５３蛋白在大肠良、恶性病变组织中的表达情况，探讨Ｐ５３蛋白表达与大肠癌临床病理因素的关系．方法应用免疫组织化学ＳＰ法检测了１４６例良恶性大肠病变组织中Ｐ５３蛋白水平．结果正常大肠粘膜及非肿瘤性息肉Ｐ５３蛋白均阴性，而１１例腺瘤，５３例癌旁粘膜及７６例癌组织中ｐ５３阳性率分别为１８１８％（２／１１），１３２１％（７／５３）及４２１１％（３２／７６）．在腺瘤及癌旁粘膜组织中，仅有散在细胞核里ｐ５３阳性，但在３２例ｐ５３阳性大肠癌中，７５％呈现（＋＋）或（＋＋＋）的阳性表达．在各组织类型癌中，以低分化腺癌与粘液癌ｐ５３阳性率最高，分别为６３６４％（７／１１）及６２５％（１０／１６），显著高于高中分化腺癌的３０１６％（１５／４０）（Ｐ＜００５），并且ｐ５３阳性大肠癌比ｐ５３阳性癌更容易穿透肠壁侵犯浆膜及浆膜外组织，其淋巴结转移率也明显高于ｐ５３阴性者（Ｐ＜００５）．但Ｐ５３蛋白表达与肿瘤大小，肉眼类型，部位，Ｄｕｋｅｓ分期及术后３年生存率无关．结论ｐ５３基因突变或过表达是大肠肿瘤发生过程中的重要因素，并可能与肿瘤进展及转移有关．【总页数】3页(P56+52-53)【关键词】结直肠肿瘤;P53蛋白;p53基因;免疫组织化学【作者】彭敦发;林鸿民【作者单位】皖南医学院病理教研室【正文语种】中文【中图分类】R364【相关文献】1.大肠良恶性病变p53,PCNA的表达与S100＋DC浸润的临床病… [J], 陈启龙;朱功兵2.雌孕激素受体与P53、bcl-2基因蛋白在大肠良恶性病变中表达的相关性研究[J], 戴洁;左东升;祁晓莉;金树梅;李海军;肖秀英;薄爱华;陆晓光3.血小板衍生生长因子受体与p21ras、p53在大肠良恶性肿瘤中的表达及意义[J], 王丹;张正;等4.肿瘤转移抑制基因nm23mRNA在大肠良,恶性病变中的表达及意义 [J], 李功;施秀清5.血小板衍生生长因子受体与p21^ras、p53在大肠良恶性肿瘤中的表达及意义[J], 王丹;张正;等因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
P53、PCNA、ki-67在大肠癌中的表达与临床意义黄志伟;蔡雪彦【摘要】目的检测P53、PCNA、ki-67在大肠癌中的表达及其与大肠癌及临床病理因素的关系,为大肠癌临床的诊疗提供一定的依据.方法应用免疫组化法(SP法)检测53例大肠癌中P53(突变型)、PCNA、ki-67蛋白的表达.结果 P53蛋白、PCNA蛋白、Ki-67蛋白在大肠癌组织中的表达分别为67.92%、100%、86.79%,与在相对应的正常大肠粘膜组织中的表达(分别为0%、7.14%、10.71%)相比,差异有显著统计学意义(P＜0.01).ki-67蛋白的表达和患者性别有相关性.此外,PCNA 蛋白和ki-67蛋白表达呈正相关.在大肠癌中P53蛋白与PCNA蛋白、ki-67蛋白之间表达无相关性.结论 1.P53、PCNA和ki-67蛋白在大肠癌中的过表达可能与大肠癌的发生发展密切相关.2.在大肠癌组织中,PCNA、ki-67和P53之间的表达均无明显相关,提示大肠癌发生过程中肿瘤细胞的增殖与抑癌基因突变是相对独立的致病机制.3.PCNA表达与ki-67表达呈显著正相关,而PCNA表达与大肠癌患者性别无关,ki-67表达则与大肠癌患者性别有关,提示ki-67在大肠癌不同性别患者间表达差异受ki-67不同于PCNA的细胞周期影响.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2013(022)006【总页数】5页(P508-512)【关键词】P53;PCNA;ki-67;免疫组化;大肠癌【作者】黄志伟;蔡雪彦【作者单位】广东省中山市人民医院病理科,528403;广东省中山市人民医院病理科,528403【正文语种】中文【中图分类】R735.3大肠癌是常见的恶性肿瘤之一，是多种致癌因素作用下发生的恶性病变。
我国大肠癌发病率近些年以较快的速度增加，尤以城市为甚，我国年轻人直肠癌发病率有增高趋势，且预后较差。
本研究应用免疫组织化学法检测P53（突变型）、PCNA、ki－67在53例大肠癌中的表达，研究其与大肠癌及临床病理因素的关系，旨在为大肠癌临床的诊疗提供一定的依据。
Journal of Oncology,2009,Vol.15,No.253例食管癌COX-2、p53和PCNA表达及临床意义Expression of COX-2,p53and PCNA in53Cases with Esophageal Carcinoma and ItsClinical Significance∥YANG Han-jin,WANG Jian-fei,ZHENG Wei-zhi,et al.杨含金，王建飞，郑炜智，胡珊，赵剑(仙居县人民医院，浙江仙居317300)摘要：［目的］研究食管癌组织中环氧合酶-2（COX-2）、p53和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达及临床意义。
［方法］应用免疫组化（SP）法检测53例食管鳞状细胞癌、21例癌旁组织中COX-2、p53及PCNA的表达。
［结果］53例食管癌组织中COX-2、p53及PCNA的阳性表达率分别为83.02％（44/53）、64.15％（34/53）和94.34％（50/53），均显著高于癌旁组织(P<0.01)。
COX-2在高、中分化食管癌中的表达率显著高于低分化癌（P<0.01），在临床低分期（0、Ⅰ、Ⅱ期）表达率高于高分期（Ⅲ、Ⅳ期）（P<0.01），COX-2阳性表达者3年生存率高于阴性表达者（P<0.01）。
［结论］COX-2的表达对预测和早期诊断食管癌具有重要意义。
主题词：食管肿瘤；环氧合酶-2；p53蛋白；增殖细胞核抗原；预后中图分类号：R735.1文献标识码：B文章编号：1671-170X（2009）02-0134-02食管癌的发生、发展为多基因异常表达的复杂生物学过程，涉及癌基因的激活和抑癌基因的失活。
本研究检测COX-2、p53和PCNA在食管癌组织中的表达，分析其与食管癌临床病理特征及生存率的关系。
1材料与方法1.1材料53例食管癌组织取自我院2000年～2003年手术切除标本，全部病例术前均未行化疗或放疗，21例癌旁组织为正常食管黏膜或轻度食管炎，所有组织用10％中性福尔马林溶液固定，常规脱水，石蜡包埋，制备4μm连续切片。
1.2方法所有标本均行HE染色重新作病理组织学诊断，53例均为食管鳞状细胞癌，根据WHO诊断标准分为高分化16例，中分化31例，低分化6例；临床分期：0期2例，Ⅰ期10例，Ⅱ期27例，Ⅲ期6例，Ⅳ期8例。
鼠抗人单克隆抗体COX-2、p53及PCNA均为美国Zymed公司产品，北京中杉生物技术有限公司提供。
采用SP二步法，严格按照试剂操作说明进行，以PBS代替一抗作阴性对照，0.01M枸橼酸盐缓冲液高温高压法进行抗原修复，DAB显色。
COX-2阳性染色为细胞浆呈黄至棕黄色，p53及PCNA阳性染色均为细胞核呈黄色至棕黄色。
观察5个以上高倍镜视野，计数不少于1000个细胞中的阳性细胞数，阳性细胞数<10％为阴性，≥10％为阳性。
1.3随访和统计学处理于2006年1月至2007年12月对全部病例通过书信、电话或农村社区卫生服务站进行随访，生存期为从治疗开始至死亡。
采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
2结果2.1COX-2、p53及PCNA表达与食管癌临床病理特征的关系COX-2阳性表达率在癌组织中达83.02％（44/53），癌旁组织中为14.29％（3/21）（χ2＝30.66）；p53阳性表达率在癌组织中达64.15％（34/53），癌旁组织中为4.76％（1/21）（χ2＝21.28）；PCNA阳性表达率在癌组织中为94.34％（50/53），癌旁组织中为19.05％（4/21）（χ2＝43.23）。
COX-2、p53及PCNA在食管癌组织与癌旁组织阳性表达率比较差异均有统计学意义（P<0.01）。
COX-2阳性表达率随着肿瘤分化程度的增高而升高，高、中分化癌表达率89.36%，显著高于低分化癌表达率33.33%，差异有显著性（χ2＝8.21，P<0.01）；p53和PCNA阳性表达率与肿瘤分化程度之间无统计学意义。
COX-2阳性表达率在低分期（0、Ⅰ、Ⅱ期）为92.3％（36/39），在高分期（Ⅲ、Ⅳ期）为57.14％（8/14），随肿瘤分期增高表达下降，差异有显著性（χ2＝6.71，收稿日期：2008-09-04；修回日期：2008-11-22表1COX-2、p53和PCNA表达与食管癌临床病理特征的关系临床特征性别男性女性年龄（岁）≤60＞60肿瘤最大径≤3cm＞3cm分化程度高、中分化低分化表达部位癌组织癌旁组织临床分期0、Ⅰ、Ⅱ期Ⅲ、Ⅳ期例数29242429193447653213914COX-2+-26182123172742△2△44△3△36△8△3636275491836p53+-1915161882630434△1△22121098111181721920172PCNA+-28222129183244650△4△371312312331721注：△P<0.01。
P<0.01）。
p53和PCNA阳性表达率在各期肿瘤无统计学意义。
见表1。
COX-2、p53及PCNA的阳性表达率在不同性别、年龄、肿瘤最大径间均无统计学意义。
2.2COX-2、p53及PCNA不同表达者生存率COX-2阳性表达者3年生存率为77.27％(34/44)，阴性表达者为22.22％(2/9)（χ2＝8.02，P<0.01）；阳性表达者5年生存率34.09％(15/44)，阴性表达者0(0/9)（χ2＝3.75，P>0.05），差异无统计学意义。
p53及PCNA 不同表达者3年及5年生存率均无统计学意义。
3讨论目前研究表明COX-2与肿瘤发生和转移的关系较为密切。
有报道COX-2在食管鳞癌中的阳性表达率为91％［1］，本组研究COX-2阳性表达率为83.02％，与癌旁组织比较差异有显著性，与国内外报道相一致［2］。
本组资料显示高、中分化癌COX-2表达明显高于低分化癌，临床分期低者阳性表达高于分期高者。
这与Ranelletti等［3］认为COX-2的表达与喉鳞状细胞癌的分化程度相关一致。
COX-2阳性表达者3年生存率明显高于阴性表达者（P<0.01），但5年生存率比较无差异。
另一些研究认为COX-2高表达提示预后不良［4］。
所以，我们认为COX-2表达的调控机制可能因细胞类型的不同而迵异，因此COX-2不能作为独立判断食管癌预后的指标。
据报道约50％的食管癌有p53基因突变［5］。
本组资料显示53例食管癌组织中阳性表达率为64.15％，显著高于癌旁组织，提示p53基因突变与食管癌发生密切相关。
p53阳性表达与性别、年龄、肿瘤大小、分期及分化程度均无明显关系，说明p53基因突变不仅仅出现在食管癌的晚期阶段，而在早期阶段即已经发生，由此认为p53突变是恶性肿瘤的早期事件［6］。
高元兴等［7］随访11例食管癌患者生存结果，p53阳性者预后差。
但本组研究认为p53不能作为判断食管癌预后的指标，与钟少文等［8］研究结果相同。
PCNA是评价细胞增殖情况的客观指标之一。
本组研究结果表明，肿瘤组织中PCNA阳性表达率为94.34％，与癌旁组织比较有显著性差异，提示PCNA参与了食管癌的发生、发展过程。
有许多资料表明PCNA增殖数与食管癌的转移、复发和预后有关，可作为判断食管癌预后的重要指标［8］。
但本组在随访3年及5年生存率比较无统计学意义，提示PCNA表达不能作为食管癌预后的一个独立判断指标。
本组食管癌3年和5年的生存率分别为67.92％及28.30％。
笔者认为食管癌预后是许多因素综合影响的结果，与肿瘤部位、浸润深度、分化程度、临床分期及淋巴结转移等有明显的相关性，而COX-2、p53和PCNA都不能作为食管癌预后的一个独立判断指标。
参考文献：[1]Kuo KT,Chow KC,Wu YC,et al.Clinicopathologic sig-nificance of cyclooxygenase-2overexpression in esophageal squamous cell carcinoma[J].Ann Thorac Surg, 2003,76(3):909-914.[2]Yu HP,Xu SQ,Liu L,et al.Cyclooxygenase-2expressionin squamous dysplasia and squamous cell carcinoma of the esophagus[J].Cancer Lett,2003,198(2):193-201. [3]Ranelletti FO,Almadori G,Rocca B,et al.Prognotic sig-nificance of cyclooxygenase-2in laryngeal squamous cell carcinoma[J].Int J Cancer,2001,95(6):343-349.[4]Khuri FR,Wu H,Lee JJ,et al.Cyclooxygenase-2overex-pression is a marker of poor prognosis in stageⅠnon-small cell lung cancer[J].Clin Cancer Res,2001,7(4): 861-867.[5]Shi ST,Yang GY,Wang LD,et al.Role of p53gene mu-tations in human esophageal carcinogenesis:results from immunohistochemical and mutation analyses of carcinomas and nearby non-cancerous lesions[J].Carcinogenesis,1999,20(4):591-597.[6]陈新,平育敏,白世祥,等.p16和p53在食管鳞状细胞癌中的表达及意义[J].实用肿瘤杂志,2004,19（1）:23－27.[7]高元兴,董帅,董光同,等.食管癌p53蛋白的表达与肿瘤生物学行为及预后的关系[J].浙江临床医学，2005,7（6）:563－564.[8]钟少文,戎铁华,林汉良.肿瘤DNA含量、p53表达和PCNA表达对预测食管癌预后的意义[J].癌症,1999,18（1）:64－66.。
