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·论著·Cbl-b基因沉默对小鼠原代淋巴细胞免疫活性影响的研究胡彬倪娜娜吕雅琳陈浩刘毅孙建方210042南京，中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所病理科（第一作者现在武汉市第一医院皮肤科，430022）通信作者：孙建方，Email：Sunjf57@；刘毅，Email：dr.liuyi@DOI：10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2016.03.004【摘要】目的体外初步研究Cbl-b基因经特异性siRNA沉默后对小鼠淋巴细胞免疫活性的影响。
方法摘取C57BL/6小鼠的脾脏，体外无菌分离小鼠脾脏淋巴细胞后进行培养。
通过Entranster TM-R4000试剂将Cbl-bsiRNA转染入小鼠原代淋巴细胞以沉默细胞内Cbl-b的表达。
转染72h后通过酶联免疫吸附实验（ELISA）检测淋巴细胞培养上清中干扰素γ（INF-γ）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达量。
通过与B16F10黑素瘤细胞共培养，研究Cbl-b基因沉默后的淋巴细胞对B16F10黑素瘤细胞免疫杀伤活性的影响。
结果Cbl-b siRNA成功转染进小鼠原代淋巴细胞并能有效沉默细胞内Cbl-b的表达。
与阴性对照转染组及空白组相比，转染Cbl-bsiRNA的淋巴细胞IFN-γ、TNF-α分泌量增加（P<0.05）。
共培养检测结果显示，Cbl-b siRNA转染组比转染阴性对照组能更高效地杀伤小鼠B16F10细胞。
结论Cbl-b基因沉默能够促进小鼠淋巴细胞INF-γ、TNF-α分泌能力，并能增强淋巴细胞对B16F10黑素瘤细胞的体外免疫杀伤作用。
【关键词】黑色素瘤；基因沉默；小鼠；淋巴细胞；RNA，小分子干扰；免疫活性；Cbl-b基金项目：国家自然科学基金（81171513）；江苏省自然科学基金（BK2012506）In vitro effects of Cbl-b gene silencing on immunocompetence of primary murine lymphocytes Hu Bin,Ni Nana,Lyu Yalin,Chen Hao,Liu Yi,Sun JianfangDepartment of Pathology,Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union MedicalCollege,Nanjing210042,China（the current affiliation of the first author was Department of Dermatology,Wuhan No.1Hospital,Wuhan430222,China）Corresponding authors:Sun Jianfang,Email:Sunjf57@;Liu Yi,Email:dr.liuyi@【Abstract】Objective To evaluate in vitro effects of specific small interfering RNA（siRNA）-silencing of thecasitas B-lineage lymphoma b（Cbl-b）gene on immunocompetence of primary murine lymphocytes.Methods Spleenswere resected from C57BL/6mice,and splenic lymphocytes were sterily isolated and cultured in vitro.These lymphocyteswere divided into3groups:silence group transfected with a Cbl-b-specific siRNA using the Entranster TM-R4000reagent,negative control group transfected with a negative control siRNA using the Entranster TM-R4000reagent,blank controlgroup receiving no treatment.After additional culture for72hours,ELISA was performed to measure levels of interferonγ（IFN-γ）and tumor necrosis factorα（TNF-α）in culture supernatants of lymphocytes.In addition,the Cbl-b gene-silenced lymphocytes were co-cultured with B16F10melanoma cells to evaluate their immunocytotoxic effects onmelanoma cells.Results Splenic lymphocytes were successfully isolated from C57BL/6mice and cultured in vitro,andthe Cbl-b-specific siRNA was also successfully transfected into the primary murine lymphocytes and effectively down-regulated the expression of Cbl-b gene in pared with the negative control group and blank control group,thesilence group showed significantly increased supernatant levels of IFN-γand TNF-α（all P<0.05）.The immunocytotoxiceffect of lymphocytes on melanoma cells was significantly stronger in the silence group than in the negative control group.Conclusion Cbl-b gene silencing can promote secretion of IFN-γand TNF-αby murine lymphocytes,and enhance their immunocytotoxic effects on B16F10melanoma cells in vitro.【Key words】Melanoma;Gene silencing;Mice;Lymphocytes;RNA,small interfering;Immunocompetence;Cbl-bFund programs:National Natural Science Foundation of China（81171513）;Natural Science Foundation of JiangsuProvince of China（BK2012506）恶性黑素瘤肿瘤微环境中存在较多导致肿瘤免疫逃逸的负性调控因素，导致免疫治疗的临床有效率仍较低。
胸腺五肽对重症肌无力的药效分析作者：陈阳来源：《中国医学创新》2015年第29期【摘要】目的：探讨分析胸腺五肽对重症肌无力的药效。
方法：选取30只雌性小鼠（C57BIJ6），随机将其分为治疗组（2 d给1次药）、模型对照组、正常对照组，每组各10只。
以荧光显微镜技术检测CD4+、CD8+的结果，分析胸腺五肽对重症肌无力小鼠T淋巴细胞亚群产生的影响，并与其他组别对照。
结果：三组免疫后用药治疗前体重如下：治疗组为（21.42±1.53）g，模型对照组为（21.38±1.46）g，正常对照组为（19.91±1.30）g。
与正常对照组比较，治疗组和模型对照组的体重均明显增加，差异均有统计学意义（P0.05）；CD4+/CD8+比值结果：正常对照组【关键词】胸腺五肽；重症肌无力；药效doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.29.006重症肌无力属于一种因传递功能障碍（神经-肌肉接头处）所致的自身免疫性疾病，临床表现为骨骼肌无力（部分或全身）、易疲劳，症状在活动后加重，经过休息后症状减轻。
该病患病率在77/100万～150/100万，年发病率在4/100万～11/100万，可发生在任何年龄段，以1～5岁儿童多见。
临床治疗该病方法较多，但疗效不够理想，尚无公认标准治疗方案[1]。
从发病机制方面研究，重症肌无力发生、进展中T细胞、胸腺起到重要作用，出现自身免疫性疾病和抑制性的T细胞活性下降，导致免疫调节性的T细胞亚群失衡，致使B细胞过多产生自身抗体相关[2]。
所以，治疗重症肌无力应考虑对T细胞亚群进行调节，使之平衡。
胸腺五肽是由五种氨基酸（酪氨酸、缬氨酸、天门冬氨酸、赖氨酸、精氨酸）组成。
诱导T细胞分化是其作用之一，具有免疫调节功能。
对于免疫力低下者，动物整体实验或离体实验证实，胸腺五肽可诱导T细胞分化，使外周T淋巴细胞活化，具有免疫调节活性[3]。
本研究以免疫荧光技术检测胸腺五肽对重症肌无力小鼠T淋巴细胞亚群产生的影响，并与其他组别对照，以分析胸腺五肽对重症肌无力的药效，现具体报告如下。
C 57BL /6J 小鼠主要器官的组织学数据库的建立邓玉江1,陈俊颖2,邱全光3a,王 勇3b,魏 泓3b(1.西南大学生命科学院,重庆400715;2.解放军第324医院病理科,重庆400020;3.第三军医大学:a .信息网络管理中心;b .基础医学部实验动物学教研室,重庆400038)[摘 要] 目的 建立C 57BL /6J 小鼠主要器官的组织学数据库。
方法 选取C 57BL /6J 小鼠雌性10只,雄性10只,将其麻醉致死,解剖切取心、肝、脾、肺、肾、胃等45个器官和组织,用10%的中性缓冲福尔马林固定,石蜡切片,常规HE 染色,用显微镜观察,图像采集,用计算机对图像进行标注。
采用SQL S EV ER2000数据库管理系统,C#编程语言,B /S(浏览器/服务器)为系统构架。
结果 解剖20只C 57BL /6J 小鼠主要器官和组织,制做了1589张切片,观察采集了13578张图片,对1563张图片进行了标注,建立了容量达7.85G B 的C 57BL /6J 小鼠主要器官的组织学数据库。
结论 构建可查询的C 57BL /6J 小鼠主要器官的形态学数据库,是研究疾病模型小鼠方便快捷的对照图库。
[关键词]C 57BL /6J 小鼠;组织学;切片;数据库[中图分类号]Q 954.6;C37 [文献标识码]A [文章编号]1672-5042(2010)03-0166-02[基金项目]国家科技部/十一五0科技支撑计划课题(2006BAI23B04);国家/9730课题(2007CB513007)[作者简介]邓玉江(1968-),男,重庆市万州区人,西南大学生命科学院2007级硕士研究生,主要从事动物分子遗传方面的研究。
E-m ai:l 120748169@qq .com [通迅作者]魏 泓,第三军医大学实验动物学教研室[收稿日期]2010-01-20 [修回日期]2010-02-25Establishi n g a digital hist o l o gy library of t he m ain organ of the C 57BL /6J m iceDE NG Yu -jiang ,C H EN Jun -y ing ,Q I U Quan -guang ,WANG Yong ,WE IH ong (L ife Sc i ence Institute ,Sou t hwest Un i v ers-i ty ,Chongqing 400715,Ch i na)Abstrac t :Ob jec tive T o estab lish a d i g ita l hist o logy library o f t he m a i n organ of the C 57BL /6J m ice .M e thods Twenty C 57BL /6J m i ce (m a l e 10,fe m a l e 10)w ere anest hetized deep l y ,tota lly 45organs and tissues w ere taken and fi xed by 10%f o r m ali n ,i nclud i ng heart ,li ver ,spleen ,k i dney ,stom ach ,e tc .embedded by paraffi n and sec ti oned ,sta i ned w ith haema toxy li n and eos i n ,and observa ti on under m -i croscope .T hen the i m ages w ere m arked i n co m puter .T he h isto logy li brary w as establis hed by S Q L W EV ER2000database m anagement sys -te m,C #progra mm i ng l anguage and Bro w se r/Server .R esu lts T he m ain org ans and tissues w ere d i ssected ,1589pieces o f sec ti ons w ere go t ,13578i m ages w ere observed ,and 1563p ict ures w ere ma rked .A l a rge histo logy li brary (7.85G )of C 57BL /6J m ice w as estab lished .Conc l u sion T he h isto logy li brary o f C 57BL /6J m i ce is benefit f o r research i ng d isease model m ice . K eyword s :C 57BL /6J m i ce ;h isto logy ;sec ti on ;di g i ta l li b rary小鼠是解析人类基因组功能、研究人类疾病发病机制、进行新药研究、探索新型治疗方法、开展药物安全性评价的最重要的模式生物[1]。
第１０卷 第５期２０１９年９月Ｖｏｌ． １０ Ｎｏ． ５Ｓｅｐ． ２０１９器官移植Ｏｒｇａｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ【摘要】 器官移植是终末期器官衰竭患者最有效的治疗手段。
将间充质干细胞（MSC ）用于器官移植已成为细胞疗法的重要组成部分。
然而，MSC 发挥免疫抑制作用的机制还有待进一步地挖掘，且影响MSC 发挥免疫抑制作用的因素很多，这些原因导致MSC 难以达到预期疗效。
在本综述中将通过介绍MSC 的免疫抑制作用及机制、影响MSC 发挥免疫抑制作用的因素以及MSC 的临床应用等方面来阐述MSC 在器官移植领域的研究进展。
【关键词】 间充质干细胞；器官移植；免疫抑制作用；凋亡；调节性T 细胞；移植物抗宿主病【中图分类号】R617，R392.4 【文献标志码】A 【文章编号】1674-7445（2019）05-0025-05·综述·尽管当前同种异体移植物短期存活率已极大提高，但如何使移植物长期存活仍是移植医师面临的一大挑战。
器官移植术后抗排斥反应仍然以联合应用钙神经蛋白抑制剂（calcineurin inhibitor ，CNI ）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin ，mTOR ）抑制剂、抗增殖剂等免疫抑制剂为主，不可避免地也抑制了受者的免疫系统，导致不同程度的免疫缺陷，进而引发感染、恶性肿瘤等并发症。
此外，免疫抑制剂对慢性排斥反应不敏感，移植物往往难以长期存活。
因此，我们亟需一种新的抑制免疫排斥反应的方法。
间充质干细胞（mesenchymal stem cell ，MSC ）来源于发育早期的中胚层和外胚层，表达主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex ，MHC ）Ⅰ、CD90、CD105和CD73，不表达CD45、CD34、CD14、CD11b ，具有自我更新、多向分化和归巢的能力，在特定的环境下，能够被诱导分化为神经、心脏、肝脏、骨、软骨、肌腱、脂肪、上皮等多种组织细胞。
特应性皮炎小鼠模型研究新进展郭亚南;文海泉【摘要】特应性皮炎是一种变应性炎症性皮肤病,病因尚未明确,开发和确立动物模型对研究发病机制和开发药物有着重大意义.近来主要建立了抗原诱发、转基因和自发性皮炎等小鼠模型.【期刊名称】《皮肤性病诊疗学杂志》【年(卷),期】2010(017)003【总页数】3页(P247-249)【关键词】特应性皮炎;模型;小鼠【作者】郭亚南;文海泉【作者单位】中南大学湘雅二医院皮肤科,湖南,长沙,410011;中南大学湘雅二医院皮肤科,湖南,长沙,410011【正文语种】中文【中图分类】R758.23特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)是一种慢性复发性、瘙痒性、炎症性皮肤病,易反复发作,伴剧烈瘙痒,且发病率呈逐年升高的趋势,严重影响了患者的生活质量。
该病发病机制不清,涉及遗传、免疫、感染等众多因素。
本文对近年来特应性皮炎小鼠模型的研究做一综述,以促进对特应性皮炎的发病机理的研究及新药研发。
1 外用抗原诱发 AD模型1.1 卵清蛋白(OVA)Spergel等重复外用卵清蛋白致敏建立小鼠 AD模型[1]。
致敏后小鼠的搔抓行为明显增加,小鼠真皮和表皮增厚;CD4+T淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润;Th2细胞因子 IL-4、IL-5、IL-13表达上调,IFN-γ仅有少许变化;嗜酸细胞活化趋化因子、胸腺活化调节趋化因子表达增强,这些细胞因子分别吸引 CCR3+嗜酸性粒细胞和CCR4+CD4+T细胞。
血清 OVA特异性 IgG1、IgE和 IgG2a增高,脾细胞中 Th2细胞因子 IL-4、IL-5、IL-13和 IFN-γ表达上调。
另外,OVA致敏小鼠呼吸道敏感性增加,这与大部分 AD患者患有哮喘相一致,这为研究 AD与哮喘的关系提供了合适模型。
1.2 尘螨BALB/c小鼠经皮外用重组螨抗原(Der p8)建立皮炎模型,有表皮肥厚,棘细胞层水肿,CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞浸润,局部和系统 Th1/Th2细胞失衡,这些发现与外用OVA建立的 AD模型相似[2]。
C57BL/6小鼠相关资料汇总于宇 201613698在哺乳类实验动物中，由于小鼠个体小，饲养管理方便，生产繁殖快，质量控制严格，价廉可以大量供应，又有大量的具有各种不同特点的近交品系，突变品系，封闭群及杂交一代动物，小鼠实验研究资料丰富参考对比性强；更重要一点乃是全世界科研工作者均用国际公认的品系和标准的条件进行试验，其实验结果的科学性、可靠性、重复性高，自然会得到国际认可。
因此，小鼠被广泛应用于种类科研实验中，其用量最大，用途最广，而在近交系中更是以C57BL/6系列小鼠应用最为广泛。
C57BL系列小鼠是1921年C.C.Little用Lathrop小鼠作近亲培育时，用No.57雄鼠和No.52雌鼠交配，培育成C57。
在C57中将毛色呈黑色的进行固定，培育成的产物。
1937年Little将维持的C57BL第六组亚系定名为C57BL/6，将第十组亚系定名为C57BL/10，继而分别维持至今。
1947年从Little引入到美国Jackson Lab.，形成C57BL/6J;1951年从Jackson Lab.引到NIH，形成C57BL/6N亚系。
六十年代到日本实验动物中央研究所，1986年自日本实验动物中央研究所引入到中科院上海实验动物中心。
2001年从美国再次引种。
C57BL/6小鼠是不仅目前应用最广泛的近交系小鼠，同时也是第一个拥有其基因组测序的小鼠，该品系小鼠外部呈黑色，产仔率：89～95％平均窝产仔数：6.98～7.48只胎间隔：28～36天离乳存活率：87～93％,其遗传学组成通常为a/a,C/C:H-2b,Mup-1b,Ig-1b,T1ab (a/B/C/D/H-2b)，临床血液生理生化数据（见下表）主要应用于肿瘤学、生理学、免疫学、遗传学研究中，同时也是临床疾病模型制备的常用材料。
血液生理参数（56日龄，雄性）参数平均数标准差红细胞计数(RBC) 10.21 1E6/μL 0.472 1E6/μL红细胞体积(MCV) 47.2 fL 0.416 fL红细胞分布宽度(RDW) 13.08 %CV 0.282 %CV红细胞压积(HCT) 48.18 % 2.256 %血红蛋白含量(MCH) 14.25 pg 0.331 pg血红蛋白浓度(MCHC) 302.0 g/L 7.542 g/L白细胞计数(WBC) 6.17 1E3/μl 1.649 1E3/μl淋巴细胞(LY)百分比86.25 % 13.507 %血小板计数(PLT) 672.2 1E3/μl 113.722 1E3/μl血小板平均容积(MPV) 1.68 fL 0.22 fL血小板分布宽度16.79 % 0.758 %血液生理参数（56日龄，雌性）参数平均数标准差红细胞计数(RBC) 9.32 1E6/μL 1.331 1E6/μL红细胞体积(MCV) 48.12 fL 2.528 fL红细胞分布宽度(RDW) 13.48 %CV 1.049 %CV红细胞压积(HCT) 44.64 % 5.201 %血红蛋白含量(MCH) 14.92 pg 0.535 pg血红蛋白浓度(MCHC) 310.5 g/L 12.903 g/L白细胞计数(WBC) 5.23 1E3/μl 1.121 1E3/μl淋巴细胞(LY)百分比96.14% 1.79 %血小板计数(PLT) 613.5 1E3/μl 136.479 1E3/μl血小板平均容积(MPV) 2.01 fL 0.409 fL血小板分布宽度17.07 % 0.715 % 血液生化参数（56日龄，雄性）参数平均数标准差Ca 1.17 mmol/L 0.06 mmol/LALT 25.0 U/L 26.87 U/LALP 64.2 U/L 11.98 U/LLDH 510.23 UI 143.31 UICRE 25.53 mmol/L 1.88 mmol/LBUN 4.69 mmol/L 0.77 mmol/LTP 27.93 g/L 2.17 g/LALB 18.6 g/L 1.1 g/LTG 0.99 mmol/L 0.12 mmol/L葡萄糖 1.54 mmol/L 0.37 mmol/L 血液生化参数（56日龄，雌性）参数平均数标准差Ca 1.14 mmol/L 0.05 mmol/LALT 18.6 U/L 8.87 U/LALP 77.6 U/L 32.25 U/LLDH 635.9 UI 424.39 UICRE 36.93 mmol/L 7.86 mmol/LBUN 4.58 mmol/L 0.6 mmol/LTP 27.41 g/L 2.11 g/LALB 19.09 g/L 1.38 g/LTG 0.95 mmol/L 0.49 mmol/L葡萄糖 1.96 mmol/L 0.88 mmol/L C57BL/6小鼠应用广泛的主要原因在于其具备的特殊生物特性①乳腺肿瘤自然发生率低，化学物质难以诱发乳腺和卵巢肿瘤。
C57BL6小鼠相关概述C57BL/6小鼠相关资料汇总在哺乳类实验动物中，由于小鼠个体小，饲养管理方便，生产繁殖快，质量控制严格，价廉可以大量供应，又有大量的具有各种不同特点的近交品系，突变品系，封闭群及杂交一代动物，小鼠实验研究资料丰富参考对比性强；更重要一点乃是全世界科研工作者均用国际公认的品系和标准的条件进行试验，其实验结果的科学性、可靠性、重复性高，自然会得到国际认可。
因此，小鼠被广泛应用于种类科研实验中，其用量最大，用途最广，而在近交系中更是以C57BL/6系列小鼠应用最为广泛。
不仅目前应用最广泛的近交系小鼠，同时也是第一个拥有其基因组测序的小鼠，该品系小鼠外部呈黑色，产仔率：89～95％平均窝产仔数：～只胎间隔：28～36天离乳存活率：87～93％,其遗传学组成通常为a/a,C/C:H-2b,Mup-1b,Ig-1b,T1ab (a/B/C/D/H-2b)，临床血液生理生化数据（见下表）主要应用于肿瘤学、生理学、免疫学、遗传学研究中，同时也是临床疾病模型制备的常用材料。
血液生理参数（56日龄，雄性）参数平均数标准差红细胞计数(RBC) 1E6/μL 1E6/μL红细胞体积(MCV) fL fL红细胞分布宽度(RDW) %CV %CV红细胞压积(HCT) % %血红蛋白含量(MCH) pg pg血红蛋白浓度(MCHC) g/L g/L白细胞计数(WBC) 1E3/μl 1E3/μl淋巴细胞(LY)百分比 % %血小板计数(PLT) 1E3/μl 1E3/μl 血小板平均容积(MPV) fL fL血小板分布宽度 % % 血液生理参数（56日龄，雌性）参数平均数标准差红细胞计数(RBC) 1E6/μL 1E6/μL 红细胞体积(MCV) fL fL红细胞分布宽度(RDW) %CV %CV红细胞压积(HCT) % %血红蛋白含量(MCH) pg pg血红蛋白浓度(MCHC) g/L g/L白细胞计数(WBC) 1E3/μl 1E3/μl 淋巴细胞(LY)百分比% %血小板计数(PLT) 1E3/μl 1E3/μl 血小板平均容积(MPV) fL fL血小板分布宽度 % % 血液生化参数（56日龄，雄性）参数平均数标准差Ca mmol/L mmol/L ALT U/L U/L ALP U/L U/L LDH UI UI CRE mmol/L mmol/L BUN mmol/L mmol/L TP g/L g/L ALB g/L g/L TG mmol/L mmol/L 葡萄糖 mmol/L mmol/L 血液生化参数（56日龄，雌性）参数平均数标准差Ca mmol/L mmol/L ALT U/L U/L ALP U/L U/LLDH UI UICRE mmol/L mmol/LBUN mmol/L mmol/LTP g/L g/LALB g/L g/LTG mmol/L mmol/L葡萄糖 mmol/L mmol/LC57BL/6小鼠应用广泛的主要原因在于其具备的特殊生物特性①乳腺肿瘤自然发生率低，化学物质难以诱发乳腺和卵巢肿瘤。
摘 要：目的 观察正常小鼠各种器官组织中胸腺间质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin ，TSLP)的表达。
方法 利用Real-time PCR 、免疫荧光法检测正常C57BL/6J 小鼠心、肝、脾、肺、肾、肠、胸腺、阴道中TSLP 的表达。
结果 心、肝、脾、肺、肾、肠、胸腺、阴道中均有TSLP 表达，其中心、肝、肾、阴道表达较高，肠道表达最低(P <0.01)。
结论 TSLP 在正常C57BL/6J 小鼠许多器官组织中均有表达，但以心、肝、肾、阴道黏膜中表达较高。
关键词：TSLP ；PCR ；免疫荧光中图分类号： R 446.63 文献标识码：A 文章编号：1005-4057(2011)04-0364-03DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2011.04.003Abstract: Objective To study the expression of thymic stromal lymphopoietin (TSLP) in a variety of organs and tissues of normal C57BL/6J mice. Methods TSLP expression in heart, liver, spleen, lung, kidney, intestine, thymus, and vagina of normal C57BL/6J mice was determined by real-time PCR and immunofluorescence. Results TSLP expression occurred in heart, liver, spleen, lung, kidney, intestine, thymus, and vaginal mucosa, with the highest in heart, liver, kidney and vaginal mucosa, and the lowest in intestine (P <0.01). Conclusion TSLP can express in various organs and tissues of normal C57BL/6J mice, especially in heart, liver, kidney and vaginal mucosa.Key words: TSLP; PCR; immunofluorescenceTSLP 是IL-7样细胞因子，TSLP 受体(TSLPR)是常组织器官的表达，为TSLP 在念珠菌性阴道炎及其由IL-7R α 和TSLPR γ 组成的异源二聚体，表达于抗它皮肤病的研究提供参考数据。
原提呈细胞、单核细胞、T 细胞。
近期研究发现，1 材料和方法皮肤、阴道、肠道、肺等上皮细胞均可表达TSLP ，其主要功能是通过TSLPR 抑制促炎因子表达及调控 1.1 材料[1-2][3]Th 细胞亚群的分化。
Rimoldi 等在体外研究中选取15只雌性6周龄C57BL/6J 小鼠(购自华中科发现上皮细胞可通过TSLP 下调树突状细胞(DC)表达技大学同济医院实验动物中心)，将上述小鼠心、IL-12，并抑制Th 细胞向Th1 分化；另外， 上皮细肝、脾、肺、肾、肠、胸腺、阴道正常组织器官分胞还可激活DC 从而增加IL-10 生成，促进Th2 型免为两份，一份提取总RNA 后进行Realtime RT-PCR 检[4]疫应答。
TSLP 充当感染及过敏反应的桥梁，是人测TSLP mRNA 表达，另一份进行中性福尔吗啉固定上皮细胞针对微生物代谢产物、外伤、炎症所释放及石蜡包埋后激光共聚焦免疫荧光检测TSLP 的表的细胞因子，可协同IL-1、TNF 刺激肥大细胞合成达。
Th2 型细胞因子，加重感染及瘙痒与念珠菌性阴道 1.2 实时荧光定量PCR 检测炎、特应性皮炎、银屑病等多种皮肤病的发病密切用Trizol 液(Invitrogen ，U.S.A.)提取小鼠正常组[5-6]相关，然而该细胞因子的致病机制仍未阐明，且织总RNA ，经紫外分光光度计检测符合纯度后逆转相关研究资料较少，本课题组检测了TSLP 在小鼠正录为cDNA ，再进行实时荧光定量PCR 检测。
根据GeneBank 序列设计TSLP 、β-actin 引物，序列见表1。
应用Real-time PCR Detection System(SLAN, HONGSHI) 及SYBR Green realtime PCR master mix 荧光染料(QPK212，TOYOBO)行实时定量PCR 反正常C57BL/6J 小鼠器官组织中胸腺间质淋巴细胞生成素的表达祎陈嵘，刘 珍，张金娥（广东医学院附属医院皮肤科，广东湛江 524001）TSLP expression in various organs and tissues of normal C57BL/6J miceCHEN Rong-yi, LIU Zhen, Zhang Jin-e (Department of Dermatology, Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang 524001, China)基金项目：广东医学院博士启动基金(No.XB1022)收稿日期：2011-02-22；修订日期：2011-06-09作者简介：陈嵘祎 (1977 - )，男，博士，副主任医师。
364第 29 卷第 4 期2011 年 8 月广东医学院学报JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE V ol. 29 No. 4Aug. 2011x 表1 引物序列产物大小(bp)255名称β-actin TSLP136引物序列F:5′-CCGTGAAAAGTGACCCAG-3′R:5′-TAGCCACGCTCGGTCAGG-3′F:5′-GTAAGGAGGACGCTGGAGAGT-3′R:5′-CTGGCTGTAATAAAGTGTTAGTGG-3′注：F ，上游；R ，下游。
表2 TSLPmRNA 在小鼠不同正常组织测得的Ct 值 (n =15)组织肠脾阴道胸腺肺肝心脏肾脏TSLP 24.936±0.30524.034±0.45522.855±0.23520.352±0.16719.788±0.36216.385±0.18415.761±0.22615.679±0.167β-actin 15.908±0.18917.613±0.19118.542±0.21412.889±0.10411.396±0.15613.581±0.29816.403±0.20614.413±0.229应，反应条件：95℃ 预变性 2 min ，95℃变性 15 s ，组织测得的Ct 值详见表2，经计算机数据分析，其结60℃退火 15 s ， 72℃ 延伸 45 s ，共40个循环，72℃，果显示：TSLPmRNA 在正常组织中表达由高到低的顺序为心、肾、肝、阴道、脾、胸腺、肺、肠，两10 min 。
获取各组标本的标准曲线，计算机分析荧两比较其差异均有统计学意义，见图1。
光域值循环数(Ct 值，每个反应管内荧光强度达到系统认为有目的DNA 合成时的循环数，以阴性对照作参考)。
计算公式(ΔΔCt ＝(△Ct=Ct -Ct ) 目的基因β-actin －△试验组－(Ct -Ct )对照组，扩增倍数=2目的基因β-actin △CT。
1.3 免疫荧光激光共聚焦显微镜检查石蜡切片常规脱蜡至水，3％H O 灭活内源性过22氧化物酶，微波修复抗原。
3% BSA 室温下封闭1 h ，加入TSLP 一抗(兔抗小鼠IgG sc-33792 santa cruz ，工作浓度为1:100)40μL ，37℃孵育2 h ；滴加四乙基罗丹明标记的荧光二抗40 μL(山羊抗兔IgGsc-2091 santa cruz ，工作浓度为1:200)37℃孵育1 h 后PBS 洗去未结合抗体，缓冲甘油封片，1 h 内标本用激光共聚焦显微镜(Leica Zeiss 510)检测，激发波长为570 mm ，扫描分辨率为 1 024×1 024。
1.4 统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行处理，数据以( ± 2.2 激光共聚焦检测小鼠不同正常组织TSLP荧光表s )表示，采用t 检验，P <0.05为差异有统计学意义。
达的情况TSLP 蛋白的表达情况基本与Realtime-PCR 检测2 结果的结果一致。
TSLP 为红色荧光，主要表达在各组织2.1 TSLPmRNA 在小鼠不同正常组织的表达情况细胞的胞浆，荧光强度由高的低的表达顺序为心、Real-time PCR 结果显示TSLPmRNA 在小鼠不同肾、肝、阴道、脾、胸腺、肺、肠，见图2。
365第 4 期陈嵘祎，等. 正常C57BL/6J小鼠器官组织中胸腺间质淋巴细胞生成素的表达3 讨论发病机制，而且可为TSLP 在其它皮肤病的研究提供重要的理论依据，但TSLP 如何抑制黏膜免疫从而导黏膜免疫已成为近期的研究热点，目前发现肠致念珠菌感染的机制值得进一步探讨。
道共栖菌可通过调节上皮细胞分泌TSLP 、TGF-β、IL-10、PGE 等细胞因子来调节DC 、巨噬细胞功参考文献：2能，并抑制促炎症因子表达，促进免疫应答从Th1型[1] Omori M, Ziegler S. Induction of IL-4 expression in CD4 (+) 过渡到Th2型，从而使机体对细菌、真菌产生免疫耐T cells by thymic stromal lymphopoietin[J]. J Immunol, [7-8]受；而TSLPR 基因敲除小鼠呈现明显的Th1 型免2007, 178(3): 1396-1404.[4]疫应答。
虽然TSLP 可能在念珠菌性阴道炎的发病[2] Reche P A, Soumelis V, Gorman D M, et al. Human thymic 机制中起关键作用，但其在正常组织的表达情况尚stromal lymphopoietin preferentially stimulates myeloid 不清楚。
TSLP 如何通过免疫网络调控黏膜免疫，从cells[J]. J Immunol, 2001, 167(1): 336-343.而导致念珠菌感染的发生有待进一步研究。
