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抗鸡球虫卵黄抗体制备及初步应用作者：钱玮霖指导老师：徐前明（安徽农业大学植保学院合肥 230061）摘要：本项目旨在研制抗鸡球虫卵黄抗体，为防治鸡球虫病提供一种新的手段。
利用对临床所分离的球虫，经超声波裂解制备粗抗原，然后将所得抗原分别于弗氏完全佐剂和不完全佐剂混合，经肌肉注射方式对鸡蛋进行免疫，收集免疫后的卵黄；采用饱和硫酸铵法分离卵黄中的抗体，并用聚乙二醇浓缩获得较高浓度的抗体；采用凝集试验确定其抗体水平，并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法进行抗体纯度分析；最后将所分离的抗鸡球虫卵黄抗体用于鸡感染球虫保护试验。
结果表明：（1）临床所分离得球虫多为混合感染，达3种以上；（2）蛋鸡经免疫后，经凝集试验可证实其抗体水平可达1:28，SDS-PAGE电泳显示：纯化后抗体大小为67.0kD 和23kD，且纯度较高。
基于上述情况，认为本试验制备出抗鸡球虫卵黄抗体方法并初步阐明了其抗鸡球虫的基本功能。
关键词：鸡球虫病；卵黄抗体；保护试验引言鸡球虫病广泛存在于养鸡业中，常造成大批死亡，其死亡率可最高达80％，且病愈鸡生长严重受阻，抵抗力降低，易继发其他疾病。
每年，全世界因为鸡球虫病造成的损失高达数十亿美元[1]。
因此，鸡球虫病是养鸡业中危害最严重的疾病之一。
在我国，特别是在南方地区，由于气温高、湿度大，这种环境利于球虫卵囊的孢子发育，本病常常呈暴发性流行，危害更加严重。
然而，目前对鸡球虫病的防治措施绝大部分多依赖于药物的预防和治疗上,即化学合成药物和抗生素两大类，自从1936年首次出现专用抗球虫药以来，已报道的抗球虫药达40余种，但是因为球虫对药物极易产生抗药性，大量使用化学药物势必会造成严重的药物残留问题等，这也是当今养禽业所遇到最棘手的问题之一。
上述问题存在，为临床防治鸡球虫病提出紧迫任务。
卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用。
卵黄抗体IgY在猪生产中的应用摘要：卵黄抗体(Yolk Immunoglobulin，IgY)是蛋鸡受特定抗原刺激后体内会产生特异性并被转移和贮存在卵黄中的免疫球蛋白。
用鸡卵黄大量生产和制备多克隆抗体是近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。
IgY可作为替代抗生素的新型绿色饲料添加剂。
本文就免疫鸡卵黄抗体在猪生产中的应用作一综述。
关键词卵黄抗体；猪生产；应用卵黄抗体作为一种新型绿色添加剂有其自身的优势：①卵黄抗体产量高，Anders(1993)推算认为一只蛋鸡每周的抗体产量相当于9～10只小白兔的抗体产量；②鸡蛋的生产成本较低，收集和提纯方便，大规模提取抗体的技术已经成熟；③产生有效免疫反应所需抗原量小；④IgY的化学性质稳定，具有一定的耐热、耐酸、耐碱及耐高渗性能，对胃蛋白酶具有良好的抵抗能力；⑤由于种系发生距离相差很大，禽类IgY与哺乳动物免疫球蛋白之间不会发生交叉血清学反应；⑥不激活哺乳动物的补体系统，不与类风湿因子或Fc受体相结合，避免在免疫检测过程中产生假阴性或假阳性结果；⑦对肠道正常菌群无副作用，也不存在抗药性和药物残留问题。
IgY 本身是一种优质的蛋白源，有促生长作用。
1．卵黄抗体(IgY)1.1 IgY抗体结构IgY大分子的结构与哺乳动物免疫球蛋白类似。
Warr等(1995)[1]通过分子结构分析认为IgY 是哺乳动物体内IgG 和IgM 的进化前体。
IgY 中Cυ3和Cυ4区与哺乳动物IgG 的Cγ2和Cγ3具有同源性；Cυ2是IgY的枢纽区，而它在IgY 中没有得到充分进化。
IgY中这种不发达的枢纽区造成了Fab部分的低活性，而这进而可能是IgG 与IgY某些差异的原因。
与IgG一样，IgY的Fc片断是绝大部分生物受动器功能的作用部位。
IgY-Fc部分包括2条碳氢链，而IgG 只有一条。
IgG在重链上含有3个功能域而IgY的重链含有4个功能域，而且IgY缺少铰链区。
1.2 IgY进入卵黄的机制禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。
卵黄抗体生产工艺流程一、引言卵黄抗体是指通过免疫技术从动物体内提取出来的抗体，具有广泛的应用前景。
卵黄中富含大量的抗体，因此成为抗体生产的理想来源。
本文将介绍一种常用的卵黄抗体生产工艺流程，以供参考。
二、卵黄抗体生产工艺流程1. 动物免疫选择一种合适的动物（如兔子）作为免疫动物。
然后，根据需要的抗体种类和用途，选择相应的抗原进行免疫。
将抗原与适当的佐剂混合后，通过皮下注射或腹腔注射的方式进行免疫。
在免疫过程中，需要控制免疫动物的养护条件，确保动物的健康状况和免疫效果。
2. 卵黄收集免疫后，通过定期采集免疫动物的卵黄来获取抗体。
通常在免疫后的第三周开始收集卵黄，每隔一段时间收集一次。
收集卵黄时，需要注意卫生条件，避免污染和交叉感染。
3. 卵黄抗体提取将收集到的卵黄放入离心管中，离心分离卵黄中的固体成分。
然后，将卵黄液与适当的缓冲液混合，进行固液分离。
固体成分中含有大量的抗体，可以通过洗涤和离心的方式进一步提取纯化。
4. 抗体纯化将提取得到的卵黄抗体溶液进行过滤和洗涤，去除杂质和不需要的物质。
然后，利用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等技术，对抗体进行纯化。
这些技术可以根据抗体的特性和需求进行选择和组合，以达到最佳的纯化效果。
5. 抗体浓缩经过纯化后的抗体溶液通常比较稀释，需要进行浓缩处理。
常用的方法有超滤、溶液浓缩等。
通过这些方法，可以将抗体溶液的浓度提高，从而方便后续的使用和保存。
6. 抗体检测对浓缩后的抗体进行质量检测，确保抗体的纯度和活性。
常用的检测方法包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫印迹（Western blot）等。
这些检测方法可以检测抗体的特异性和结构完整性，保证抗体的质量。
7. 抗体应用经过检测合格的抗体可以用于各种实验和应用中。
例如，可以用于免疫组化、免疫印迹、免疫沉淀等实验技术中。
此外，抗体还可以用于生物药物研发、疾病诊断和治疗等领域。
三、结论卵黄抗体生产工艺流程是一个复杂的过程，需要严格控制各个环节，以确保最终产品的质量和效果。
