凝血酶原时间PT测定-检验科临检室作业书

凝血酶原分析标准操作流程目录1 目的2 测试原理3 产品信息4 试剂保存和稳定性5 预防和警告6 样本收集和准备7 检测需要但试剂盒中未提供的耗材8 定标9 质量控制10 操作流程11 结果12 结果解释13 参考范围14 治疗范围15 性能特征16 参考文献1 目的此程序提供在ACL™ 8000，ACL™ 9000（软件版本2.0 - 2.6）上，执行凝血酶原时间（PT）测试的指导。

该测试用于外源性凝血途径的评估和口服抗凝剂治疗（OAT）的监测。

2 测试原理过量的组织促凝血酶原激酶和钙离子（PT试剂）加入病人血浆中，激活外源凝血途径，导致纤维蛋白原转化为纤维蛋白，形成固体胶状物，仪器检测凝固形成所需要的时间。

3 产品信息下列任何产品均可用于该测试程序：1) HemosIL™ RecombiPlasTin ,，8 mL ，P/N 20002900；和HemosILRecombiPlasTin ，20 mL ，P/N 20003000，包含冻干的试剂和液体的稀释剂。

2) HemosIL PT-Fibrinogen HS ，8 mL ，P/N 8468210，包含冻干的试剂。

请参考试剂包装说明书以获得更多信息。

4 试剂保存和稳定性未开封的试剂和定标血浆可于2-8 o C 稳定至试剂瓶上标注的有效期。

为了最佳试剂保存，建议不使用时，将试剂和定标血浆从仪器系统取出，使用原瓶，保存于2-8 o C 。

复溶后稳定性HemosIL RecombiPlasTin: 2-8°C 稳定10天，15-25°C 原瓶稳定5 天，或 者15°C 环境下，在ACL 8000-10000仪器上，使用含特氟纶包被的搅拌磁珠持 续搅拌下稳定10天。

HemosIL PT-Fibrinogen HS: 2-8˚C 原瓶稳定3天，或者 15˚C 持续搅拌在ACL 8000-10000仪器上稳定8小时。

血浆凝血酶原时间（PT）及活化部分凝血活酶时间（APTT）测定一、血浆凝血酶原时间（PT）测定（一）参考值一步法凝血酶原时间：11～13秒凝血酶原比值：0.82～1.15（二）临床意义1．PT延长：PT超过正常对照3秒以上或凝血酶原比值超过正常范围即为延长，主要见于：①先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ减少及纤维蛋白原的缺乏（低或无纤维蛋白血症）；②获得性凝血因子缺乏，如DIC、原发性纤溶亢进症、肝病的阻塞性黄疸和维生素K缺乏、血循环中抗凝物质增多等。

2．PT缩短：①先天性因子Ⅴ增多；②DIC早期（高凝状态）；③口服避孕药、其它血栓前状态及血栓性疾病（凝血因子和血小板活性增高，血管损伤等均为血栓形成的基础）。

3．口服抗凝药的监护临床上当NIR为2-4时为抗凝治疗的合适范围，当INR>4.5时，如纤维蛋白水平和血小板数仍正常，则提示抗凝过度，应三少或停止用药。

INR>4.5时，同时伴有纤维蛋白原和血小板减低，则可能是DIC或肝病等所致也应减少或停止口服抗凝剂。

二、活化部分凝血活酶时间（APTT）测定（一）参考值：33.68～40.32秒（二）临床意义：基本与凝血时间意义相同，但敏感性高。

目前所用的大多数APTT测定方法，凡当血浆凝血因子低于正常水平的15-30%即可异常。

1．APTT延长：APTT结果超过正常对照10秒以上即为延长。

APTT是内源凝血因子缺乏最可靠的筛选试验，主要用于发现轻型的血友病。

虽可检出因子Ⅷ：C水平低于25%甲型血友病，但对于亚临床型血友病（因子Ⅷ大于25%）和血友病携带者敏感性欠佳。

结果延长也见于因子Ⅺ（血友病乙）、Ⅻ和Ⅶ缺乏症；血中抗凝血物如凝血因子抑制物或肝素水平增高时，当凝血酶原、纤维蛋白原及因子Ⅴ、Ⅹ缺乏时也可延长，但敏感性略差；其它尚有肝病、DIC、大量输入库存血等。

2．APTT缩短：见于DIC，血栓前状态及血栓性疾病。

3．肝素治疗监护：APTT对血浆肝素的浓度很为敏感，故是目前广泛应用的实验室监护指标。

凝血酶原时间（PT）测定（分析仪器法）1实验原理：光电磁珠法测试杯两侧的有一组驱动线圈，它们产生恒定的交替电磁场，使测试杯内特制的去磁小钢珠保持等幅振荡运动。

凝血激活剂加入后，随着纤维蛋白的产生增多，血浆的粘稠度增加，小钢珠的运动振幅逐渐减弱，仪器根据另一组测量线圈感应到小钢珠运动的变化，当运动幅度衰减到50%时确定凝固终点。

2 标本采集2.12.23.831长时间456.6.16.2 ,室温保存7.7.17.27.37.4 仪器技术参数:7.4.1 速度:最快检测速度350测试/小时,组合检测约140测试/小时7.4.2 试剂位:28个,具冷藏功能。

7.4.3 样本位:80个,可自动连续添加。

7.5 仪器校准程序:7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校准。

7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)8. 操作步骤:8.1 检查前准备:8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。

8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线)。

8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。

8.2 开机先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定。

8.31.2.目PT345.8.4按8.38.5 按“8.68.6.1 用蘸有清洗液的纱布或棉签擦拭加样针和试剂的外表面。

8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯，检查清洗液是否充足。

8.6.3 检查预温及测量通道内是否有掉落的钢珠，如果有请清除。

8.6.4 仪器连续工作24小时后需要关机1次。

9．检验结果的判断与分析:9.1 仪器测定PT的线性范围在5-120秒,测定完成后仪器显示PT秒数、PT活动度、INR值等参数。

若不能对参数进行正确计算,将出现下列信息:﹡﹡﹡.﹡出现错误,不能得到分析数据ˉˉˉ.ˉ不能计算参数＋＋＋.＋数值超出线性范围.9.2 仪器设定PT参考范围在9-13秒,如果得不到一个正常数值,在数据的左侧将出现下列标记:﹡出现错误信息< 数据低于可报告的低限> 数据高于可报告的高限10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S为警告限,3S为失控限,1111.111.2 PT11.3 PT、11.41212.112.2成结果变异。

血浆凝血酶原（PT）测定1. 实验原理:确定量的血浆样本经过一定时间的加温后,加入一定浓度的凝血酶试剂,采用波长为660nm的光照射样本,凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定,从散射光光强度的测定,可以作出凝血曲线,。

凝血酶可使血浆标本中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，形成凝块。

形成凝块的时间即检测时间。

2. 标本采集2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血.2.23.8％(w/v)枸椽钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀.3. 标本存放1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试.4. 标本运输：低温条件下运输.5. 标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定.6. 实验材料:6.1 德国Dade Behring Marburg 公司Test Thrombin试剂（干粉）,每瓶加5ml配套缓冲液溶解(50毫升),未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期.复溶试剂2～8℃保存不超过5天.6.2 缓冲液，用于凝血酶试剂的溶解,2～8℃贮存到说明书上有效期.6.3 Dade Citrol质控血浆.用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装.复溶后,室温保存2小时,2～8℃4小时.7. 仪器设备:7.1 仪器名称: Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪7.2 仪器厂家:日本Sysmex公司7.3 仪器型号:Sysmex CA-15007.4 仪器技术参数:7.4.1 速度:最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时7.4.2 试剂位:36个,具冷藏功能.7.4.3 样本位:50个,可自动连续添加.7.5 仪器校准程序:7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校准.7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)8. 操作步骤:8.1 检查前准备:8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽.8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线)8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸镏水等.8.2 开机先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定.8.3 输入工作清单:从主菜单选,选并同时输入此标本的其他测试项目,若选“凝血四项（APTT、APAPTT、Fbg、APTT）”，可按，选完项目后按某项目时只需按该项目（按键如（快速输入可用.8.4 放置样本按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler 进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)8.5 .盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按,进样开始,→测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“◎”，此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架样本工作清单,继续确认测试任务,添加样本架继续测试,→测定完成,测定项目背景变为“●”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态.8.6 每日维护:完成每日的测定后,关机前维护.8.6.1 冲冼针Rinse Probe8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯.8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱.8.7 关机:先关主机,再关打印机.9．检验结果的判断与分析:9.1 仪器测定APTT线性范围在5-200s,测定完成仪器将显示每个参数的结果，若不能对参数进行正确计算,将出现下列信息:﹡﹡﹡,﹡出现错误,不能得到分析数据ˉˉˉ,ˉ不能计算参数＋＋＋，＋数值超出线性范围.9.2 仪器设定APTT参考范围在24-36s,如果得到一个不正常数值,在数据的左侧将出现下列标记:﹡出现错误信息< 数据低于可报告的低限> 数据高于可报告的高限10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S为警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控.质控规则详见室内质控作业指导书.11. 临床意义:APTT是用于判定血栓前状态或血栓性疾病的筛查项目.11.1 参考范围: 24-36s，（患者结果超过正常对照3秒以上有临床意义）11.2纤维蛋白原溶解治疗的监测11.3纤维蛋白形成障碍或怀疑重度纤维蛋白原缺乏的筛查11.4 肝素诱导活化部分凝血活酶延长和纤维蛋白形成障碍的鉴别诊断12．变异的潜在来源12.1抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不能用于APTT测定项目，抗凝比例不当也将影响结果的准确性。

凝血酶原时间临床试验设计
凝血酶原时间(PT)是一个重要的实验室指标,可以反映人体免疫系统对某种凝血因子缺乏的代偿能力。

因此,许多临床试验都旨在研究PT延长药物的临床效果和安全性。

以下是一些可能用于凝血酶原时间临床试验设计的方案:
1. 独立分组试验(Open-label Study):在这种设计中,患者随机分配进入不同的试验组,其中某些患者接受PT延长药物,而其他人则接受安慰剂或其他药物治疗。

研究的目的是比较PT延长药物和安慰剂之间的临床效果和安全性。

2. 多臂试验(Double-Masked Study):在这种设计中,患者随机分配到两个试验组,其中某些患者接受PT延长药物,而其他人则接受安慰剂或其他药物治疗。

在试验期间,患者和研究人员都不知道患者是否接受了PT延长药物。

研究的目的是比较PT延长药物和安慰剂之间的临床效果和安全性。

3. 平行组试验(平行板 Study):在这种设计中,患者随机分配进入不同的试验组,患者和研究人员都不知道患者是否接受了PT延长药物。

研究的目的是比较PT延长药物和安慰剂之间的临床效果和安全性。

无论采用哪种试验设计,都需要确定受试者招募的范围和频率,以及确定干预措施的剂量和频率。

此外,还需要考虑试验期间可能出现的任何不良反应和并发症,并确保数据的准确性和可靠性。

凝血酶原时间PT测定作业指导书
1. 实验原理：
在待检血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca离子，与FⅦa形成复合物，触发外源性凝血系统，使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原变为纤维蛋白。

所测血浆凝固时间，即凝血酶原时间。

凝块形成的时间与血浆中的外源性凝血因子含量呈负相关。

2. 标本采集：
2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右)，静脉采血。

2.2
3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。

3. 标本存放：将混合了抗凝剂的全血以3000r/min×10min离心，室温放置不超过2小时，2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月），只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。

4. 标本运输：低温条件下运输。

5. 标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作测定。

6. 实验材料：
北京世帝科学仪器公司凝血酶原时间测定试剂盒，主要成分为兔脑粉、氯化钙和少量稳定剂。

7. 仪器设备：
7.1 仪器名称：M200全自动凝血因子分析仪。

PT & APTT & Fg 测定【实验目的】1、掌握凝血酶原时间测定的方法。

2、掌握活化部分凝血酶时间测定的方法。

3、掌握纤维蛋白原含量测定的凝血酶法【实验原理】1、PT是在体外满足外源性凝血全部条件后的血浆凝固所需的时间。

在抗凝血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca2+，使凝血酶原转化为凝血酶，后者使纤维蛋白原转化为纤维蛋白。

测定从加入Ca2+到血浆开始凝固所需时间，即为ＰＴ。

２、ＡＰＴＴ是在体外满足内源性凝血全部条件后的血浆凝固所需的时间。

在３７℃条件下，以白陶土（激活剂）激活因子Ⅻ，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板提供凝血的催化表面，再加入适量的Ｃａ２＋即可满足内源性凝血的全部条件。

测定从加入Ｃａ２＋到血浆凝固所需的时间即为ＡＰＴＴ。

３、纤维蛋白原与凝血酶作用形成不溶性纤维蛋白，因而血浆在加入凝血酶后逐渐凝固。

凝固时间与血浆中纤维蛋白原的浓度呈负相关。

【实验材料】水浴箱、试管、试管架、吸样抢、吸头、离心机、秒表、109mmol/L的枸橼酸钠、新鲜全血、血凝仪、２５ｍｍｏｌ／Ｌ氯化钙凝血活酶试剂、２５ｍｍｏｌ／Ｌ氯化钙溶液、PT试剂、KPTT试剂、凝血酶、巴比妥血浆稀释液等。

【实验步骤】１、ＰＴ测定：（一）试管法：①分离乏血小板血浆②平衡温度③温浴④测定待测血浆的PT（二）血凝仪法：按“PT”键→在放有磁珠的2号杯里加预温的0.1ml待测血浆→小杯放入右边孔内→按“TEST”键→仪器自动激活30秒钟（倒计时）→仪器鸣叫后加入预热的PT试剂0.2ml →仪器自动检测并显示结果２、ＡＰＴＴ测定：（一）试管法：①分离乏血小板血浆②平衡温度③温浴氯化钙溶液④测定待测血浆的APTT（二）血凝仪法：按“KPTT”键→在放有磁珠的3号杯里加预温的0.1ml待测血浆和0.1ml KPTT试剂→小杯放入中间孔内→按“TEST”键→仪器自动激活3分钟（倒计时）→仪器鸣叫后加入预热的cacl2 0.1ml→仪器自动检测并显示结果３、Ｆｇ测定：血凝仪法：按“Fg”键→在放有磁珠的1号杯里加预温的1:10待测血浆0.2ml→小杯放入左边孔内→按“TEST”键→仪器自动激活2分钟（倒计时）→仪器鸣叫后加入预热的复溶凝血酶0.1ml→仪器自动检测并显示结果【实验结果】××医院报告单姓名：张三性别：男年龄：22 科室：消化内科标本号：12345临床诊断：肝硬化送检标本：静脉血送检目的：ＰＴ、ＡＰＴＴ、Fg送检医生：李四送检时间：2012年10月1７日结果：ＰＴ（试管法）１３s （血凝仪法）１２.８sＡＰＴＴ（试管法）３４s （血凝仪法）３２.８sＦｇ（血凝仪法）３.３５s检验医师：王二检验时间：2012年10月1７日【讨论】１、注意事项：①采血用塑料注射器，贮血用塑料试管或硅化玻璃试管。

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ZYYY/LJxm--b10--20XXsop文件附录bb10：血浆凝血酶原时间（pT）测定第一页页首内容：血浆凝血酶原时间（pT）测定（凝固法)科左中旗中医医院检验科操作规程文件号：ZYYY/LJxm--b10--20XX第4版共6页20XX年9月13日起实施。

〔该sop变动程序〕本操作程序的改变可由使用sop文件工作人员提出，人，科主任批准签字。

本规程每2年复审一次复审日期:年月日复审人：规程编写者：李凤兰审批者：李凤兰批准日期：20XX年9月13日医务科保管者：包金泉检验科保管者：李凤兰临检实验室保管者：于庆芝并报告专业负责ZYYY/LJxm--b10--20XXsop文件b10.1:测定原理:待测血浆加入过量的钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时激活因子x成为xa，后者是凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆凝血酶原时间。

b10.2:标本采集与处理：b10.2.1:受检者准备：空腹静脉取血b10.2.2：受检者体位：坐位、静脉取血、使用止血带时间不超过1分钟。

b10.2.3:标本种类:采用血浆检测，用枸橼酸钠抗凝。

b10.2.4:使用器材：取血器材包括注射器、针头与试管，必须干燥、清洁，要使用一次性塑料注射器与塑料试管，使用真空采血管后应及时去除真空。

b10.2.5:离心条件与测定时间：必须以3000rpm的离心速度离心15分钟，血浆分离后应在2小时内完成测定。

b10.2.6：抗凝剂：必须用109mmol/L(32g/L)枸橼酸钠抗凝，抗凝液应防止霉变。