非蛋白氮的快速测定

饲料中非蛋白氮的测定方法非蛋白氮（NPN）是指饲料中除蛋白质以外的氮物质，包括游离氨、尿素、硝酸盐、亚硝酸盐等。

在动物营养学中，非蛋白氮对动物生长发育具有一定的作用，但过多的非蛋白氮会对动物健康产生负面影响。

因此，准确测定饲料中的非蛋白氮含量是非常重要的。

常用的饲料中非蛋白氮测定方法主要有以下几种：1. 氨基酸分析法氨基酸分析法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。

该方法通过酸水解或酶解饲料中的蛋白质，将其分解成氨基酸，再利用氨基酸分析仪测定样品中氨基酸的含量，从而计算出非蛋白氮的含量。

该方法具有准确性高、精度好、操作简单等优点，但需要使用昂贵的氨基酸分析仪，且需要对样品进行酸水解或酶解处理，操作比较繁琐。

2. 尿素测定法尿素测定法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。

该方法通过将饲料样品与一定量的氢氧化钠和氯仿反应，将样品中的尿素转化为氨。

再通过滴定方法测定样品中的氨的含量，从而计算出样品中尿素的含量。

该方法具有操作简单、费用低廉等优点，但是不适用于含有硝酸盐或亚硝酸盐的样品。

3. 氨测定法氨测定法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。

该方法通过将饲料样品与一定量的氢氧化钠反应，将样品中的非蛋白氮转化为氨。

再通过滴定方法测定样品中的氨的含量，从而计算出非蛋白氮的含量。

该方法具有操作简单、费用低廉等优点，但是不适用于含有亚硝酸盐或硝酸盐的样品。

4. 高温燃烧法高温燃烧法是一种常用的饲料中非蛋白氮测定方法。

该方法通过将饲料样品在高温下燃烧，将样品中的非蛋白氮转化为氮气。

再通过气相色谱法或原子吸收光谱法测定氮气的含量，从而计算出样品中非蛋白氮的含量。

该方法具有准确性高、精度好等优点，但需要使用昂贵的仪器，操作比较繁琐。

不同的饲料中非蛋白氮测定方法各有优缺点，选择合适的测定方法需要根据具体的情况来确定。

在测定过程中，应注意操作规范，避免误差的产生，保证测定结果的准确性。

血液非蛋白氮的测定
制作人：王瑞刚
内蒙古农业大学 生物化学与分子生物学实验教学中心
实验原理 实验试剂 实验步骤
实验原理
血液中除蛋白质外的含氮物质称为非蛋白氮。主要包 括尿素、尿酸、肌酸、肌酐、谷胱甘肽、氨基酸、核苷酸等 蛋白质和核酸的代谢物及代谢产物。 非蛋白氮物质不被蛋白 质沉淀剂所沉淀。因此，以蛋白沉淀剂去除蛋白质，制得的 无蛋白滤液即含有非蛋白氮物质。钨酸是主要的蛋白质沉淀 剂。将无蛋白滤液内的非蛋白氮物质,经强酸消化后转变为硫 酸铵,加入奈氏试剂呈现棕黄色,其含量与经同样加入奈氏试剂 之标准铵盐溶液比色测定之。
实验试剂
1．消化液 2．标准硫酸铵 3．奈氏试剂 4． 30%双氧水
实验步骤
1．以草酸钾抗凝全血，以钨酸法制备1：10无蛋白滤液。 2．取3支硬质大试管按表操作
混匀后，在波长420nm处进行比色，以空白管调零，读 取各管光密度。 3．计算
测定管光密度

100
× 0.015 ×
标准管光密度
0.05
= 血液非蛋白氮mg%
试管 试剂
空白管
标准管
测定管
血滤液（ml）
—
标准应用液（ml）
—
消化液（ml）
0.1
—
0.5
0.5
—
0.1
0.1
将测定管加热消化，待管中充满白烟，官底液体由黑转为透明为止 （可加双氧水1滴以加速消化）
蒸馏水（ml）
3.5
奈氏显色剂（ml）
1.5
3.0
3.0
1.5
1.5

基金项 目： “ 十一五”科技支撑计划 （ ０ ６ Ａ ２ ０ ２ ０ Ｂ Ｄ１ Ｂ ８）；现代农业 产业 技术体 系建设 专项 资金 资 助 。 作 者简 介 ：周 荣 （ ９ ６ １ ８ 一），女 ，江苏 人 ，硕 士研 究生 ，主 要从 事 反刍 动物 营养 研 究。 通 讯作 者 ：王 加启 （ ９ ７ １６ 一），安 徽人 ，研 究 员 ，博 士 生导 师 ，从事 反 刍动 物营 养和 牛奶 质量 改 良研 究。
ｒ ｎ ｍｏ ｈ 等 ５ ｓ ｒ 使 点是 ，把饲 料 的化 学分析 与植 物的细胞 成分 及反 刍动物 的 Ｋ ｉｈ ａ ｏ ｔｙ ［ 用三氯 乙酸 沉淀 的方法测定 非蛋 白 消化利 用结 合起来 ，使分 析结果 更有参 考价值 ，与其他体 氮 ，但是 这种 方法测定 的结 果是非 蛋 白氮 和可溶 性蛋 白含 系相 比 ，它首次打破 了瘤胃 “ 黑箱 ” ，在研 究思路 上有 明 量 相 近 。 瘤 胃细 菌 ，尤其 是纤 维 分 解菌 不 吸 收游 离氨 基
ＤＦ ＤＦ 抗 微生 物和 哺乳类酶 类 的成 分 ，在酸性 洗涤剂 中不能 被溶 荐 的Ｎ 和Ａ 测定方法上 ，将抽 滤后的滤纸消煮定氮 。 解 （ Ｉ） ＡＤＦＰ ，在瘤 胃中不能被瘤 胃细菌降解 ，在瘤胃后消化
［－ ３ ７ １］
随着ＣＮ Ｐ 体 系在 国内的推广 ，大量的试验数据丰 富 Ｃ Ｓ
收稿 日期 ：２ ｌ — ３ ２ Ｏ １ ０— １
。
但是 其 中非 蛋 白氮和 可溶性 蛋 白的测定 方法较 多且
不 同方法 的测定 结果 差异较大 ，所 以有必要 统一相 关指标 的测定 方法。
１ 非 蛋 白氮测 定
非蛋 白氮 的值 依照总粗 蛋 白含 量与沉 淀的真蛋 白含 量 的差值 计算 ，Ｈａ ｗｋ等 ¨提 出大量的蛋 白沉淀 方法 ，包括 钨 酸 、三 氯乙酸 、氢氧 化铜和 硫酸钡 等。选 用哪种沉 淀剂 取 决于试验 操作 的实际 情况和试 验 目的的需 要。钨酸 法和

• 2.杂菲铁法：
尿酸以三氯化铁（FeCl3）为氧化剂。 在尿酸被氧化时高价铁（Fe3+）还原成低 价（Fe2+）， Fe2+与1，10-二氮杂菲形成 复合物在505nm有最大吸收峰，颜色强度 与尿酸含量成比例，可定量测定。
• 氧化还原法的共同点是在尿酸被氧化的 同时使金属化合物中的金属离子还原为 低价。
[原理] 脲酶水解尿素生成氨，氨在碱性介质
中与苯酚及次氯酸钠反应，生成兰色的 吲哚酚阴离子，其生成量与尿素含量成 正比。此反应需亚硝基铁氰化钠催化， 生成物在630nm处有吸收峰。
• [试剂]
• 1.脲酶：
•
水解尿素生成氨。
• 2.碱性次氯酸钠：
•
提供碱性环境，并可与酚显色剂
作用生成吲哚酚。
• 3.酚显色剂：
• 该法操作简单，节省时间、试剂，干扰 少，但应避免标本溶血。
• 酶法优点：反应专一、特异性强、不受 尿素类似物的影响。
•
缺点：操作费时且受体液中氨的影
响，因 此在含铵盐较多的尿
液中测定尿素时必须先除去
多余的尿氨。
尿酸的测定
• NPN成份之一，核酸中嘌呤分解代谢的 最终产物。
• 以酮式和烯醇式二种互变平衡的形式存 在。烯醇式有酸性，具还原作用。
• 尿素的测定 二大类： 1.直接法：尿素直接与试剂作用，测定 其产物. 最常用的是二乙酰一 肟法。 2.酶法（间接法）： a.全酶法：酶偶联法 b.半酶法：纳氏法、波氏法、干片法、 离子选择性电：
H+
二乙酰一肟 + H2O
二乙酰 + 羟胺
二乙酰 + 尿素 咪唑
非蛋白含氮化合物的测定
• 血清非蛋白含氮化合物是指除蛋白质以 外的一切含氮化合物的总称。