实验八_凯氏定氮法

凯式定氮法检验食品中蛋白质时，往往测定总氮量，然后乘以蛋白质换算系数，即可得到蛋白质含量，但因样品中常含有核酸、生物碱、含氮类脂、卟啉以及含氮色素等非蛋白质的含氮化合物，故通常将测定结果称为粗蛋白质含量。

一、原理将样品与浓硫酸一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出, 样品中的有机氮转化为氨，并与硫酸结合成硫酸铵，加碱将消化液碱化，通过水蒸气蒸馏，使氨蒸出，使硼酸吸收形成硼酸铵，再以标准盐酸或硫酸溶液滴定，根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。

消化反应为：2NH2(CH2)2COOH+13H2SO4→(NH4)2SO4+6CO2+12SO2+16H2O消化反应中，为了加速蛋白质的分解，缩短消化时间，常加入催化剂，如硫酸钾、硫酸铜。

1、硫酸钾。

加入硫酸钾的目的是为了提高溶液的沸点。

加快有机物的分解。

硫酸钾与硫酸作用生成硫酸氢钾可以提高反应温度，而且随着消化过程中硫酸不断地被分解，水分不断逸出而使硫酸氢钾的浓度不断升高。

但加入的硫酸钾的量不能太大，否则消化体系温度过高，会引起已生成的铵盐发生热分解析出氨而造成损失。

2、硫酸铜。

硫酸铜的作用机理如下：Cu2SO4+2H2SO4→2CuSO4+2H2O+SO2C+2CuSO4→Cu2SO4+SO2+CO2此反应不断进行，待有机物全部被消化完后，不再有硫酸亚铜（Cu2SO4褐色）生成，溶液呈现清澈的Cu2+的蓝绿色。

故硫酸铜除了起催化剂作用外，还可指示消化终点，以及下一步蒸馏时作为碱性反应的指示剂。

蒸馏：在消化完全的样品消化液中加入浓氢氧化钠使其呈碱性，此时氨游离出来，加热蒸馏即可释放出氨气，反应如下：(NH4)2SO4+2NaOH→2NH3+2H2O+Na2SO4吸收与滴定：蒸馏所释放出来的氨，用硼酸溶液进行吸收，硼酸呈微弱酸性，与氨形成强碱弱酸盐，待吸收完全后，再用盐酸标准溶液滴定，吸收及滴定反应为：2NH3+4H3BO3→(NH4)2B4O7+5H2O(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O→2NH4Cl+4H3BO3二、仪器和试剂凯氏烧瓶、定氮蒸馏装置浓硫酸、硫酸铜、硫酸钾、氢氧化钠溶液、盐酸标准溶液、硼酸吸收液、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂。

凯氏定氮法实验总结题目：蛋白质浓度测定（微量凯氏定氮法）姓名：穆拉地力·地力夏提学号：074031141一、【实验目的】1. 掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理和方法2. 学会使用凯氏定氮仪并学会用凯氏定氮仪测出小油馕中的蛋白质含量二、【实验原理】凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热，经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程，最后有机氮转变为无机氮硫酸铵，这一过程称为有机物的消化。

为了加速和完全有机物质的分解，缩短消化时间，在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、过氧化氢等试剂，加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解，硫酸铜起催化剂的作用。

使用时常加入少量过氧化氢作为氧化剂以加速有机物氧化。

消化完成后，将消化液转入凯氏定氮仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内，硼酸接受氨后，形成四硼酸铵，然后用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。

滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。

在滴定过程中，滴定终点采用甲基红-次甲基蓝混合指示剂颜色变化来判定。

测定出的含氮量是样品的总氮量，其中包括有机氮和无机氮。

以甘氨酸为例，其反应式如下：NH2CH2COOH+3H2SO4 =2C02+3SO2+4H2O+NH3（1）2NH3 +H2SO4 = (NH4)2SO4 （2）(NH4)2SO4+2NaOH=2H2O+Na2SO4+2NH3 （3）反应（1），（2）在凯氏烧瓶内完成，反应（3）凯氏蒸馏烧瓶中进行（图1）。

蛋白质是一类复杂的含氮化合物，每种蛋白质都有其恒定的含氮量（约在14％~18％，平均为16％）。

凯氏定氮法测定出的含氮量，再乘以系数6.25，即为蛋白质含量。

三、【试验器材】1. 凯氏定氮仪2. 电炉3. 消化架4. 锥形瓶100ml（×5）5. 量筒10ml(×1)6. 滴定管（5ml，可读至0.02ml）7. 凯氏烧瓶（×2）8. 玻璃珠9. 吸耳球10．移液管（2ml，5ml，10ml×1）四、【实验试剂】1. 浓硫酸（A.R.）2. 硫酸钾-硫酸铜混合物：硫酸钾3份与硫酸铜1份混合研磨成粉末。

一、实验目的1. 掌握凯氏定氮法的原理和操作技术；2. 学习使用凯氏定氮仪进行蛋白质含量测定；3. 熟悉标准溶液的配制和滴定操作。

二、实验原理凯氏定氮法是一种测定有机化合物中氮含量的经典方法。

其原理是将有机化合物中的氮转化为无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨气，通过蒸馏将氨气收集到硼酸溶液中，最后用盐酸标准溶液滴定，计算出氮含量。

蛋白质是一种含氮化合物，其氮含量几乎恒定在15%~16%之间。

因此，通过测定样品中的氮含量，可以计算出样品中的蛋白质含量。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：凯氏定氮仪、电炉、锥形瓶、滴定管、移液管、分析天平等；2. 试剂：浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、指示剂、0.1mol/L 盐酸标准溶液、待测样品等。

四、实验步骤1. 样品预处理：准确称取待测样品0.5g左右，置于凯氏烧瓶中；2. 消化：向凯氏烧瓶中加入约10ml浓硫酸，加入少量克氏催化剂，加热至沸腾，保持沸腾状态，直至样品完全消化，溶液呈蓝绿色；3. 蒸馏：将消化后的溶液转移到锥形瓶中，加入约20ml 40%氢氧化钠溶液，连接凯氏定氮仪，加热蒸馏，使氨气进入硼酸溶液中；4. 吸收与滴定：待蒸馏完成后，用移液管将硼酸溶液转移至滴定管中，加入少量指示剂，用0.1mol/L盐酸标准溶液滴定，直至溶液颜色由蓝紫色变为红色；5. 计算结果：根据滴定消耗的盐酸标准溶液体积，计算出样品中的氮含量，进而计算出蛋白质含量。

五、实验数据与结果1. 样品A：蛋白质含量为5.2g/100g；2. 样品B：蛋白质含量为8.3g/100g；3. 样品C：蛋白质含量为4.0g/100g。

六、实验讨论1. 凯氏定氮法是一种准确、可靠、操作简便的蛋白质含量测定方法；2. 实验过程中，消化阶段是关键步骤，需要控制好温度和时间，以确保样品完全消化；3. 蒸馏阶段要保证氨气完全收集，避免影响测定结果；4. 滴定阶段要准确控制滴定终点，避免误差。

凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。

即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准酸滴定，就可计算出样品中的氮量。

由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。

原理蛋白质是含氮的有机化合物。

蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。

然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，蛋白质含量。

含氮量*6.25=蛋白含量.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO4 反应式为：2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4 （其中CuSO4做催化剂）2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中反应式为:(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O3. 用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量反应式为：(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3试剂所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。

2.1 硫酸铜。

2.2 硫酸钾。

2.3 硫酸。

2.4 2%硼酸溶液。

2.5 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。

也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。

2.6 30%氢氧化钠溶液。

2.7 0.025mol/L硫酸标准溶液或0.05mol/L盐酸标准溶液。

仪器安全管导管汽水分离管样品入口塞子冷凝管吸收瓶隔热液套反应管蒸汽发生瓶操作1、样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。

凯氏定氮实验报告凯氏定氮实验报告引言：凯氏定氮实验是一种常用的化学分析方法，用于测定有机物中的氮含量。

通过该实验，可以了解样品中氮元素的含量及其组成，从而为进一步研究有机物的性质和结构提供重要的参考。

本文将详细介绍凯氏定氮实验的原理、实验步骤以及结果分析。

一、凯氏定氮实验的原理凯氏定氮实验是基于凯氏试剂与有机物中的氮元素在高温下发生反应，生成氨气的原理。

凯氏试剂主要由硫酸铜和氢氧化钠组成，其中硫酸铜的作用是催化剂，氢氧化钠的作用是中和试剂。

在实验过程中，有机物样品首先与凯氏试剂混合，然后加热至高温，使有机物中的氮元素与试剂反应生成氨气。

最后，通过收集氨气并用酸溶液中和，利用酸碱中和反应的等量关系，计算出样品中氮元素的含量。

二、凯氏定氮实验的实验步骤1. 准备样品：将待测有机物样品称取适量，注意避免样品受潮和污染。

2. 混合试剂：将凯氏试剂中的硫酸铜和氢氧化钠按照一定的比例混合，制备好凯氏试剂溶液。

3. 加入样品：将样品加入凯氏试剂溶液中，充分混合。

4. 加热反应：将混合溶液置于加热设备中，加热至高温，使有机物中的氮元素与试剂反应生成氨气。

5. 收集氨气：将生成的氨气通过装有酸溶液的试管中，使其与酸发生中和反应。

6. 酸碱滴定：用酸溶液对收集到的氨气进行滴定，记录滴定液消耗量。

7. 计算结果：根据酸碱滴定的等量关系，计算出样品中氮元素的含量。

三、凯氏定氮实验的结果分析通过凯氏定氮实验，可以得到样品中氮元素的含量。

根据实验结果，可以对样品进行进一步的分析和判断。

例如，对于有机肥料的检测，可以根据氮元素含量来评估其肥效；对于食品中的蛋白质含量测定，可以通过凯氏定氮实验来得到蛋白质的含量等。

同时，在进行凯氏定氮实验时，也需要注意一些实验技巧和注意事项。

首先，样品的称取和混合试剂的操作要准确无误，以保证实验结果的准确性。

其次，加热反应时要控制好温度和时间，避免过高的温度或过长的时间对样品产生不必要的影响。

凯氏定氮法实验报告摘要：本实验采用凯氏定氮法对给定样品中的氮进行了定量分析。

首先，将样品溶解，并使用盐酸进行预处理。

然后，将盐酸处理后的溶液与含有铈铵硫酸铵溶液的蒸馏水混合，并进行中和和稀释。

最后，将溶液转移到凯氏氮冷焖管中进行水浴加热，生成氨气。

氨气经过捕集液的吸收后，使用硝酸进行酸化，并使用硝酸铵作为指示剂，分析溶液中的氨氮含量。

关键词：凯氏定氮法，氮含量分析，盐酸预处理，铈铵硫酸铵溶液，氮冷焖管引言：氮是生命的基本组成元素，它存在于大自然中的空气、水体和土壤中。

氮的含量对于环境和农业的研究具有重要意义。

因此，准确测定样品中的氮含量是分析化学中的一项基本任务。

凯氏定氮法是一种常用于测定水、土壤和植物等样品中氮含量的方法。

该方法基于氮和硝酸铵的化学反应，将样品中的有机氮转化为氨氮，在浓硝酸和硝酸铵的作用下形成氨。

所生成的氨气经水浴冷却后被吸收，并使用酸化剂和指示剂进行测量。

实验方法：1. 样品溶解：将给定样品称取2g，加入100ml锥形瓶中。

再向锥形瓶中加入30ml盐酸，并用搅拌棒混合溶解，使样品完全溶解。

2.铈铵硫酸铵溶液的制备：取一定体积的铈铵硫酸铵溶液，加入适量的蒸馏水中，并充分混合。

3.中和和稀释：将铈铵硫酸铵溶液加入溶解的样品中，用蒸馏水稀释至标定线，并进行中和。

4.准备凯氏氮冷焖管：将上述稀释的溶液转移到凯氏氮冷焖管中，并将管子放入水浴中进行水浴加热。

5.氨气捕集：将凯氏氮冷焖管中冒出的氨气通过捕集液中，并使用烧瓶与导管连接进行吸收。

6.酸化：将收集液转移到烧杯中，加入硝酸作为酸化剂，并加热搅拌。

7.指示剂添加：在酸化的溶液中加入硝酸铵作为指示剂，使颜色变红。

8.分析溶液：对酸化的溶液进行定容，并充分混合。

9.比色计测量：使用比色计测量样品的吸光度，并根据标准曲线计算溶液中氨氮含量。

结果与讨论：本实验测得样品中的氨氮含量为X mg/L。

通过标准曲线计算，样品中的氮含量为Y mg/L。

凯氏定氮法是一种测定食物、饮料或饲料中蛋白质含量的经典方法。

这个实验方法需要使用浓硫酸和催化剂，将样品中的有机氮转化为氨，然后通过蒸馏将氨分离出来，最后用酸滴定液滴定，计算出氮的含量。

凯氏定氮法的步骤如下：
1. 样品处理：将样品研磨并干燥，然后加入硫酸和催化剂，进行消化反应。

这个过程需要控制温度和时间，以免样品烧焦或硫酸过度氧化。

2. 蒸馏：将消化液进行蒸馏，使氨气从溶液中分离出来。

蒸馏过程中需要控制温度和压力，以确保氨气能够完全分离。

3. 滴定：将蒸馏后的溶液用酸滴定液进行滴定，根据颜色变化判断滴定终点。

终点判断需要准确控制，否则会影响测定结果。

4. 计算：根据滴定的酸滴定液的体积和浓度，计算出氮的含量。

凯氏定氮法的优点是准确性高、可重复性好，可以用于测定各种食物、饮料和饲料中的蛋白质含量。

但是，该方法也存在一些缺点，例如需要使用浓硫酸和催化剂，操作比较危险，而且实验过程中会产生有害气体。

此外，凯氏定氮法测定的是样品中的总氮含量，而并非所有的氮都以蛋白质的形式存在。

因此，在某些情况下，可能需要采用其他方法来测定样品中的蛋白质含量。

总之，凯氏定氮法是一种经典的蛋白质测定方法，具有较高的准确性和可重复性。

但是，在操作过程中需要注意安全问题，并且需要控制好各个实验条件，以保证测定结果的准确性。

实验八植物样品蛋白质含量测定（微量凯氏定氮法）一、目的：学习凯氏定氮法的原理和操作技术。

二、原理：常用凯氏定氮法测定天然有机物(如蛋白质，核酸及氨基酸等)的含氮量。

含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。

此过程通常称之为“消化”。

但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。

甘氨酸的消化过程可表示如下：浓碱可使消化液中的硫酸按分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到—定量，一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)计算出待测物中的总氮量。

三、器材：1. 100毫升凯氏烧瓶2. 凯氏定氮蒸馏装置。

3. 50毫升容量瓶。

4. 3毫升微量滴定管。

5. 分析天平。

6. 烘箱。

·7. 电炉。

8. 1000毫升蒸馏烷瓶。

9. 小玻璃珠。

四、试剂：1．化学纯浓硫酸200毫升2．粉末硫酸钾—硫酸铜混合物16克K2S04与CuS04·5H20以3：1配比研磨混合。

3．30％氢氧化钠溶液1000毫升4．2％硼酸溶液500毫升5．标准盐酸溶液(约0．01当量／升) 600毫升6．混合指示剂(田氏指示剂) 50毫升由50毫升0．1％甲烯蓝乙醇溶液与200毫升0．1％甲基红乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。

这种指示剂酸性时为紫红色，碱性时为绿色。

变色范围很窄且灵敏。

7．植物组织干粉2克五、操作方法：1．凯氏定氮仪的构造和安装凯氏定氦仪由蒸汽发生器，反应管及冷凝器三部分组成。

见图。

蒸气发生器包括电炉及一个1～2升容积的烧瓶(图中1，2)。

蒸气发生器借橡皮管(图中3)与反应管相连。

反应管上端有一个玻璃杯(图中4)，样品和碱液可由此加入到反应室(图中5)中，反应室中心有一长玻璃管，其上端通过反应室外层(图中6)与蒸汽发生器相连，下端靠近反应室的底部。

凯氏定氮实验报告
《凯氏定氮实验报告》
实验目的：
本实验旨在通过凯氏定氮法测定样品中的氮含量，以便分析样品的营养成分及质量。

实验原理：
凯氏定氮法是一种常用的测定有机物中氮含量的方法。

该方法利用硫酸将有机物中的氮转化为铵盐，然后用碱液将铵盐转化为氨气，最后用酸溶液将氨气转化为铵盐，通过滴定法测定铵盐的浓度，从而计算出样品中的氮含量。

实验步骤：
1. 取适量样品，将其加入凯氏试剂中。

2. 在加热的条件下，将样品中的有机氮转化为铵盐。

3. 将加热后的样品冷却，并用硫酸将样品中的铵盐转化为氨气。

4. 用氢氧化钠溶液将氨气转化为氢氧化铵，然后用硫酸溶液将氢氧化铵转化为氨气。

5. 最后用硼硼酸溶液滴定氨气，从而计算出样品中的氮含量。

实验结果：
经过凯氏定氮实验测定，得出样品中的氮含量为X%。

实验结论：
通过凯氏定氮实验测定，我们可以准确地得出样品中的氮含量，为进一步分析样品的营养成分和质量提供了重要的数据支持。

总结：
凯氏定氮法是一种简便、准确的测定有机物中氮含量的方法，对于分析样品的营养成分和质量具有重要的意义。

在实际应用中，可以根据实验结果对样品进行进一步的分析和处理，为相关领域的研究和生产提供有力的支持。

凯氏定氮法的仪器设备简单，测定过程也较简便，又能同时测定多种样品，多用于化工生产的常规分析，但此法不能直接用于硝基化合物、亚硝基化合物、偶氮化合物、肼等的测定。

二、【实验原理】凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热，经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程，最后有机氮转变为无机氮硫酸铵，这一过程称为有机物的消化。

为了加速和完全有机物质的分解，缩短消化时间，在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、过氧化氢等试剂，加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解，硫酸铜起催化剂的作用。

使用时常加入少量过氧化氢作为氧化剂以加速有机物氧化。

消化完成后，将消化液转入凯氏定氮仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内，硼酸接受氨后，形成四硼酸铵，然后用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。

滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。

在滴定过程中，滴定终点采用甲基红-次甲基蓝混合指示剂颜色变化来判定。

测定出的含氮量是样品的总氮量，其中包括有机氮和无机氮。

以甘氨酸为例，其反应式如下：NH2CH2COOH+3H2SO4 =2C02+3SO2+4H2O+NH3 （1） 2NH3 + H2SO4 = (NH4)2SO4 （2）(NH4)2SO4+2NaOH=2H2O+Na2SO4+2NH3 （3）反应（1），（2）在凯氏烧瓶内完成，反应（3）凯氏蒸馏烧瓶中进行（图1）。

蛋白质是一类复杂的含氮化合物，每种蛋白质都有其恒定的含氮量（约在14％~18％，平均为16％）。

凯氏定氮法测定出的含氮量，再乘以系数6.25，即为蛋白质含量。

三、【试验器材】 1. 卵清蛋白 2. 凯氏定氮仪 3. 电炉 4. 消化架5. 锥形瓶100ml（×5）6. 量筒10ml(×1)7. 滴定管（5ml，可读至0.02ml） 8. 凯氏烧瓶（×2） 9. 玻璃珠 10. 吸耳球11．移液管（2ml，5ml，10ml×1）四、【实验试剂】1. 卵清蛋白溶液：2g卵清蛋白溶于0.9％NaCl溶液并稀释至100ml。

凯氏定氮实验的原理与操作方法测定原理待测天然含氮有机物与浓硫酸共热时，被氧化成为二氧化碳和水，而氮转变成氨，氨再与硫酸结合生成硫酸铵。

为了加速有机物质的分解反应，在消化时常加入促进剂，硫酸铜可用作催化剂，硫酸钾或硫酸钠可提高消化液的沸点，氧化剂如过氧化氢也能加速反应。

操作方法样品处理测定某一固体样品中蛋白质的含量都是按100克物质的干重中所含蛋白质的克数来表示。

因此在定氮前应先将固体样品中的水分除去。

步骤：先将样品磨细，在已称重的称量瓶中称入一定量样品，然后置105度（100度无法除去非游离水）的烘箱内干燥2小时后称重，以后每1小时再称重，直至2次称重数不变为止。

若样品属于液体物质，可取一定体积经适当稀释后，取一定量进行消化。

消化根据样品量的多少选择适宜的凯氏烧瓶4个（此处以50毫升为例），其中2个为对照。

向烧瓶内加入准确称量的样品，注意要把样品加至烧瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶颈上。

另外2个作空白对照，好对样品进行校正。

在每个烧瓶中加入约300毫克硫酸钾-硫酸铜混合物（硫酸钾：五水硫酸铜=3：1、6：1或10：1均可），再用量筒加入3毫升浓硫酸。

将上述4个凯氏烧瓶放在通风良好处（最好在通风橱中进行）加热消化。

先用小火加热至沸腾。

此时会产生大量泡沫，应特别注意不能让黑色物质上升到烧瓶颈部，否则将严重影响分析结果。

当混合物停止冒泡，蒸汽与二氧化硫也均匀地放出时，将火焰调节到保持瓶内液体微微沸腾。

假若发现瓶颈上有黑色颗粒，应小心地将烧瓶倾斜振摇，用消化液将其洗下。

在消化过程中要时常转动烧瓶，使全部样品都浸在消化液中。

当消化液呈清澈淡蓝色时即告消化结束。

时间一般在5~6小时！若样品中含赖氨酸或组氨酸较多时，消化时间需要延长1~2倍。

因为这两种氨基酸中的氮在短时间内不易消化完全。

蒸馏采用改良式凯氏定氮仪。

1、洗涤蒸馏仪：用硼酸指示剂（取100毫升2%硼酸溶液，滴加混合指示剂约1毫升，摇匀后呈紫红色即可；混合指示剂：50毫升0.1%甲烯蓝乙醇+200毫升0.1%甲基红乙醇，存于棕色瓶中）检测是否清洗干净。

凯氏定氮法
凯氏定氮法
称取大米试样m克(0.65 g左右)（建议称取1.00-1.50g左右的样品），置于干燥的250mL 定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及20mL浓硫酸，由GB/T5009.5-2003第一法，试样消化完全后（消化变绿之后继续消化半小时即可）移入100mL容量瓶中，并用蒸馏水定容，移取50 mL试样处理液加入定氮蒸馏装置中，加入50 mL氢氧化钠溶液(400 g/L)，以硼酸溶液(20 g/L) 50 mL作为吸收液，并加入3滴甲基红-亚甲基蓝指示液，蒸馏，用c (1/2H2SO4) =0.04526 mol/L 硫酸标准滴定溶液滴定，同时进行空白试验，并在结果中加以校正。

计算公式：X=(V1-V2)×c×0.0140m×V50/V100×100(1)
其中：X—样品中蛋白质的含量(以氮计)，单位：g/100g；V1—试样消耗硫酸标准滴定溶液的体积，单位：mL；V2—试剂空白消耗硫酸标准滴定溶液的体积，单位：mL；c—硫酸标准滴定溶液的浓度，单位: mol/LV50—用50 mL移液管移取试样消化液的体积，单位: mL；V100—用100 mL容量瓶定容的试样消化液体积，单位：mL；m—样品的质量，单位：g0.0140~ 1.0 mL硫酸[c (1/2H2SO4) =1.000 mol/L]标准滴定溶液相当的氮的质量，单位：g。

通过以上公式就能够准确的测定出大米中的蛋白质含量。