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赤灵芝中水溶性蛋白响应面法优化提取陈建旭1，黄生权1，2，敖宏，高建华1，宁正祥1（1.华南理工大学轻工与食品学院，广东 广州 510640）（2.南方李锦记有限公司，广东 江门 529156） 摘要：以赤灵芝为原料提取水溶性蛋白,比较了浸提时间、温度、pH、液料比及提取次数对水溶性蛋白提取率的影响,并以浸提时间、温度、pH以及液料比为考察因素，采用RSA响应面分析法,确定了水溶性蛋白提取的最佳工艺参数，即液料比34.42 mL/g,浸提温度26.56 ℃，浸提时间8.87 h，pH 8.89。
在此优化工艺下水溶性蛋白提取率预测值为82.59 mg/g，验证实验中实际测得水溶性蛋白提取率为81.35 mg/g，预测值与实际值无显著差异。
关键词：水溶性蛋白；提取工艺；响应面分析中图分类号：TS201.2；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2009)06-0661-05Extraction of Water-soluble Protein from Ganoderma Lucidum UsingResponse Surface MethologyCHEN Jian-xu1, HUANG Sheng-quan1,2, AO Hong, GAO Jian-hua1, NING Zheng-xiang1（1.Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China）（2.Nanfang Lee Kum Kee Co., Ltd., Jiangmen 529156, China）Abstract: Water-soluble protein was extracted form Ganoderma lucidum. The effects of extraction time, extraction temperature, pH, solvent-material ratio and their effects on the yield of water-soluble protein were studied. Based on the results of single factor test, the yield response was analyzed using method of response surface analysis. The optimal condition was as follows: extraction temperature 26.56 ℃, extraction time 8.87h, pH 8.89 and solvent-material ratio 34.42mL/g. Under this condition, the predicted extraction yield of water-soluble protein was 82.59 mg/g, which was close to the experimental value of 81.35 mg/g in the validated test.Key words: water-soluble protein; extracting technology; RSA(response surface analysis)灵芝(Ganoderma lucidum)属于担子菌纲(Basidio- mycetes)多孔菌目(Polyporales)灵芝科(Gano- dermataceat)，是一种珍贵的药用真菌。
赤灵芝多糖分离纯化及体外抗氧化性研究徐雪峰;李桂娟;闫浩;张玉;张敬畅【摘要】对赤灵芝多糖进行分离、纯化和体外抗氧化性研究.从赤灵芝中提取粗多糖,通过离子交换色谱、葡聚糖凝胶色谱对粗多糖进行分离纯化,采用凝胶渗透色谱、气相色谱进行分子量和单糖组成测试,对GLPa-2、GLPb-1、GLPc 3个级分进行了体外抗氧化性研究.结果表明,3个多糖级分主要由葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖组成,但单糖的摩尔比不同;GLPa-2、GLPb-1、GLPc的重均分子量分别为3.65×105,3.87×104,1.38×104 Da;各样品对自由基的清除率随浓度升高而增大,呈量效关系,分子量最大的GLPa-2抗氧化活性最佳,表明赤芝多糖的抗氧化活性与其组成相关.%Isolation, purification and antioxidant activity in vitro of polysaccharide from Ganoderma lucidum were studied.Polysac-charide was extracted from G.lucidum, and three fractions were isolated through ion exchange chromatography and allyl dextran gel chromatography from them, including GLPa-2, GLPb-1, and GLPc.The weight-average molecular weight was detected by gel permeation chromatographic, and then monosaccharide composition was detected by gas chromatography.The results were described as follows.The component parts of polysaccharides were composed of glucose, arabinose, xylose and mannose, with different containing rates, and the average molecular weight of GLPa-2, GLPb-1, GLPc was detected to be 3.65×105 Da, 3.87×104 Da, 1.38×104 Da, respectively.Moreover, a dose-effect relation between the concentration of polysaccharides fraction and the eliminating ratio was also found, and GLPa-2, composed of glucose, arabinose, xylose, and mannose, the largestmolecular among the three ones, showed the highest antioxidant activity.Thus it turned out that the antioxidant activity of polysaccharides from G.lucidum was related to their composition.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2017(033)001【总页数】5页(P143-147)【关键词】赤芝多糖;分离;分子量;单糖组成;抗氧化【作者】徐雪峰;李桂娟;闫浩;张玉;张敬畅【作者单位】海南科技职业学院生物与化学工程学院,海南海口 571126;长春工业大学化学工程学院,吉林长春 130012;海南科技职业学院生物与化学工程学院,海南海口 571126;海南科技职业学院生物与化学工程学院,海南海口 571126;北京化工大学理学院,北京 100029【正文语种】中文赤灵芝(简称赤芝)，广义上称之为灵芝[Ganoderma lucidum(Curtis:Fr.)Karst]，为层菌纲非褶菌目灵芝菌科灵芝属真菌，是一种广泛应用的药食两用真菌，具有促进睡眠、缓解机体疲劳、抗氧化、抗肿瘤、调节免疫、保肝等药理活性[1-3]，赤芝中的多糖是其主要活性成分之一[4-5]。
一、实验目的本研究旨在通过实验方法提取和鉴定灵芝中的多糖成分，探究灵芝多糖的提取工艺，并对提取得到的灵芝多糖进行初步的生物活性分析。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 灵芝子实体（赤芝或紫芝）- 乙醇、水、硫酸、蒽酮等化学试剂- 蒸馏水、无水乙醇、丙酮等溶剂- 蛋白酶、DNase等酶类- 小鼠、细胞等实验动物和细胞系2. 实验仪器：- 电子天平- 超声波清洗器- 烘箱- 离心机- 恒温水浴锅- 分光光度计- 高效液相色谱仪- 荧光显微镜等三、实验方法1. 灵芝多糖的提取：- 将灵芝子实体洗净、晾干，粉碎成粉末。
- 采用乙醇提取法，将灵芝粉末与95%乙醇按一定比例混合，在超声波清洗器中提取2小时。
- 将提取液过滤，滤液在烘箱中浓缩至一定浓度。
- 将浓缩液用无水乙醇沉淀，离心分离，收集沉淀物。
2. 灵芝多糖的鉴定：- 采用硫酸-蒽酮法对提取得到的沉淀物进行含量测定。
- 采用高效液相色谱法对提取得到的灵芝多糖进行结构分析。
3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 采用小鼠腹腔巨细胞吞噬实验，检测灵芝多糖的免疫调节活性。
- 采用细胞实验，检测灵芝多糖对肿瘤细胞的抑制作用。
四、实验结果1. 灵芝多糖的提取：- 采用乙醇提取法，从灵芝子实体中提取得到多糖含量为10%左右。
2. 灵芝多糖的鉴定：- 硫酸-蒽酮法检测结果显示，提取得到的灵芝多糖含量较高。
- 高效液相色谱法分析结果显示，提取得到的灵芝多糖主要由葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖等单糖组成。
3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 小鼠腹腔巨细胞吞噬实验结果显示，灵芝多糖能够显著提高小鼠腹腔巨细胞的吞噬功能。
- 细胞实验结果显示，灵芝多糖对肿瘤细胞具有抑制作用。
五、实验讨论1. 灵芝多糖的提取工艺：- 本实验采用乙醇提取法，结果表明该方法能够有效地提取灵芝中的多糖成分。
- 在实验过程中，提取溶剂的浓度、提取时间、料液比等因素对提取率有显著影响，需要进一步优化。
灵芝中有效成分提取方法灵芝是一种传统中草药，被广泛应用于中医药领域。
其含有多种有效成分，包括多糖、三萜、酚类物质、氨基酸和微量元素等。
这些有效成分对人体具有多种益处，包括增强免疫力、抗炎、抗肿瘤和抗氧化等作用。
有效成分的提取以及其生物活性研究成为当前研究的热点之一。
提取灵芝有效成分的方法有很多种，主要包括传统的水提取法、乙醇提取法以及超临界流体提取法等。
这些方法各有特点，并在提取效率和提取成分的纯度等方面存在差异。
下面将对这几种方法进行详细介绍。
1. 水提取法水提取法是最常见的一种提取方法，也是传统的提取方法之一。
其原理是利用水的极性溶解灵芝中的有效成分，然后通过加热或搅拌等方式进行提取。
这种方法简单易行，并且对环境友好，但提取效率较低，且提取得到的成分纯度较低。
2. 乙醇提取法乙醇提取法是利用乙醇的溶解性能来提取灵芝中的有效成分。
其原理是将灵芝粉末与乙醇混合并加热搅拌，使得有效成分溶解于乙醇中，然后通过离心或过滤等方式将溶液中的有效成分分离出来。
这种方法提取效率较高，但乙醇提取得到的成分有时会受到乙醇残留的影响，而且生产过程中对乙醇的回收比较困难，影响了环境的可持续性。
3. 超临界流体提取法超临界流体提取法是利用超临界流体的高渗透性和高扩散性来提取有效成分。
其原理是利用具有较高压力和温度的超临界流体来溶解灵芝中的有效成分，然后通过减压或降温等方式将溶液中的有效成分分离出来。
这种方法提取效率很高，且可以避免有机溶剂残留的问题，但设备成本较高，且操作技术要求也较高。
4. 超声波提取法超声波提取法是利用超声波在液体中产生的微压差和微温差，从而导致液体内部的微观振动和微动，使得灵芝中的有效成分从细胞结构中溶解出来。
这种方法提取速度快，效率高，且操作简单，但需要较高的能量消耗。
以上几种提取方法各有优劣，选择合适的提取方法应根据具体情况而定，综合考虑提取效率、提取成分的纯度、设备成本、操作技术要求以及对环境的影响等因素。
赤灵芝提取物多糖的含量测定
魏英勤;房海燕;王玉华;袁久荣
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2003(012)003
【摘要】目的:测定赤灵芝提取物中多糖的含量.方法:采用蒽酮-硫酸比色法,以葡萄糖作为对照品,分别测定可溶性多糖和不溶性多糖的含量.结果:赤灵芝提取物可溶性多糖和不溶性多糖的含量为63.85%.结论:用蒽酮-硫酸比色法测定灵芝多糖简便易行.
【总页数】2页(P46-47)
【作者】魏英勤;房海燕;王玉华;袁久荣
【作者单位】山东中医药大学中药学院,山东,济南,250014;山东中医药大学中药学院,山东,济南,250014;山东中医药大学中药学院,山东,济南,250014;山东中医药大学中药学院,山东,济南,250014
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.泰山赤灵芝液体培养条件优化及多糖含量测定 [J], 姚良同;林榕姗;李娟;刘敏;赵倩;贾乐
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3.泰山赤灵芝多糖提取物对骨质疏松大鼠骨量的影响 [J], 葛凡;葛孚章
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菌草灵芝醇提物的体外抗氧化和免疫活性
张凤丽;彭培植;李静茹;黄文琪;赵立娜
【期刊名称】《福建农林大学学报:自然科学版》
【年(卷),期】2023(52)1
【摘要】采用乙醇提取菌草灵芝,对菌草灵芝醇提物(JGEH)的体外抗氧化和免疫活性进行了研究.结果表明:JGEH含量为2 mg·mL^(-1)时对DPPH、ABTS和羟基自由基的清除率分别达到85.61%、80.25%、100.00%;JGEH含量为
25~200μg·mL^(-1)时对巨噬细胞RAW264.7无毒副作用,可促进细胞增殖,且细胞增殖率高达121.71%;JGEH可显著增强巨噬细胞的吞噬能力,JGEH含量为
25μg·mL^(-1)时的细胞吞噬指数高达345.21%;在脂多糖(LPS)诱导的细胞炎症模型中,JGEH表现出较强的抗炎活性,JGEH含量为25~200μg·mL^(-1)时可降低细胞中NO的释放量;JGEH可降低巨噬细胞中炎症相关因子基因的表达,降低细胞炎症反应.综上可知,JGEH有较强的体外抗氧化和免疫活性.
【总页数】7页(P76-82)
【作者】张凤丽;彭培植;李静茹;黄文琪;赵立娜
【作者单位】福建农林大学国家菌草工程技术研究中心;福建农林大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.菌草灵芝菌糟提取物对免疫力低下小鼠抗氧化能力的影响
2.菌草灵芝菌糟水提物对奶牛生产性能和血液生化指标的影响
3.灵芝孢子粉醇提物在体内和体外的抑瘤作用
4.粉碎细度对灵芝子实体水提物中多糖组成和体外免疫活性的影响
5.响应面优化菌草灵芝水提物提取工艺及其纳米乳制备技术
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响应面法优化灵芝子实体三萜提取工艺的研究
洪文龙;童斌;赵格
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2014(000)011
【摘要】选用赤灵芝子实体超细粉为样品，通过单因素试验和响应面法结合对灵
芝三萜的提取的工艺条件进行优化，获得最佳提取工艺条件：提取温度为50℃，
提取时间50 min，料液比为1∶20，测得灵芝三萜提取率为1.27%。
【总页数】5页(P42-45,46)
【作者】洪文龙;童斌;赵格
【作者单位】江苏农林职业技术学院，江苏镇江212400;江苏农林职业技术学院，江苏镇江212400;江苏农林职业技术学院，江苏镇江212400
【正文语种】中文
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1.树舌灵芝总三萜提取工艺优化及其抗氧化作用研究 [J], 贾瑞博;赵慧;刘凯丽;李燕;周文斌;吕旭聪;刘斌
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劲松;贾薇;冯娜;唐传红;杨焱;唐庆九;刘艳芳;潘迎捷
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灵芝及灵芝提取物红外光谱规律的研究陈灶鑫;徐永群;陈小康;黄冬兰;卢文贯【期刊名称】《光谱学与光谱分析》【年(卷),期】2013(032)005【摘要】测定了原始灵芝及其水提物、95％乙醇提取物和石油醚提取物的红外光谱,发现红外光谱能承载系统的化学信息和反映被测物中各组分分布情况.依3 416～3 279,1 541和723 cm-1各吸收峰面积与2 935～2 852 cm-1吸收峰面积之比可将四者区分开来.提出了用欧氏距离计算样本集信息熵的方法,并探讨了信息熵与样本集所承载的化学信息量之间的关系,得出原始灵芝样本集承载化学信息量最丰富的结论.对4个样本集分别做谱系聚类分析,发现只有原始灵芝红外光谱集对黑芝、青芝、黄芝和赤芝有较好的聚类作用.研究结果表明:红外光谱承载着物质结构的化学信息,与系统的化学成分密切相关；红外光谱样本集的信息熵越大,化学信息量越丰富,越有利于模式识别.本研究对模式识别样本集的构建具有指导作用.【总页数】5页(P1206-1210)【作者】陈灶鑫;徐永群;陈小康;黄冬兰;卢文贯【作者单位】广东工业大学轻工化工学院,广东广州 510006;韶关学院化学与环境工程学院,广东韶关512005;韶关学院化学与环境工程学院,广东韶关512005;韶关学院化学与环境工程学院,广东韶关512005;韶关学院化学与环境工程学院,广东韶关512005【正文语种】中文【中图分类】O657.33;R284.1【相关文献】1.灵芝及灵芝孢子提取物的抗肿瘤及对DNA拓扑异构酶作用的研究 [J], 陈纯;王恒邦;吴盈莹;许建华;李晔;肖志勇2.近红外光谱技术在灵芝提取物品控中的应用研究 [J], 王钧;邵平;王星丽;瞿亮;孙培龙;3.灵芝菌丝体发酵及灵芝三萜积累规律研究 [J], 刘太锋4.均值离差平方和在近红外光谱识别灵芝和云芝提取物的应用 [J], 卢艳;王钧;戴阳军5.基于近红外光谱技术的灵芝提取物掺假定量快速无损检测研究 [J], 邵平;王钧;王星丽;瞿亮;孙培龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
灵芝醇水提取工艺研究
灵芝（Ganoderma lucidum）作为一种珍贵的药用真菌，其提取工艺研究一直备受关注。
以下是灵芝醇水提取工艺常见的研究内容和方法：
1. 提取剂的选择：常用的提取剂包括水、乙醇、甲醇等。
其中，水是最常用的提取剂，因为水提取可以保留灵芝中的活性成分，并且更符合药用食品的要求。
2. 提取温度和时间：提取温度和时间对提取效果有重要影响。
一般而言，提取温度在80-100℃时效果较好，提取时间通常在1-3小时。
3. 提取浓度和比例：提取浓度是指干燥灵芝与提取剂的比重，通常在1:5-1:20之间。
提取剂的比例对提取效果也有影响，一般均匀混合比例为1:10。
4. 超声波辅助提取：超声波可以加速提取过程，增强物质传递，常用频率为20-40kHz，时间在20-40分钟。
5. 后处理步骤：提取液经过澄清、浓缩、干燥等后处理工艺，可以获得精制的灵芝提取物。
需要注意的是，不同的研究目的和条件会导致提取工艺的差异。
因此，在研究和应用灵芝醇水提取工艺时，最好根据具体目的进行优化和调整，同时参考已有的研究和文献，以得到最佳的提取效果和产品质量。
DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2009.05.008 ·论著· 赤灵芝中醇溶性蛋白提取工艺研究敖宏，黄生权，陈建旭，曾庆孝【摘要】目的 研究不同工艺参数对赤灵芝醇溶性蛋白提取率的影响，为探索赤灵芝醇溶性蛋白的工业化生产提供参考。
方法以赤灵芝为原料，采用乙醇提取醇溶性蛋白，并通过单因素实验和正交实验研究浸提时间、温度、pH、液料比及提取次数对醇溶性蛋白提取率的影响，确定赤灵芝醇溶性蛋白提取的最佳工艺。
结果单因素实验结果表明，提取时间 2 h，料液比1:40，醇溶性蛋白含量最高。
正交实验得出各因素对灵芝醇溶性蛋白提取率的影响程度大小依次为：pH 值 > 料液比 > 提取温度 > 乙醇浓度，醇溶性蛋白提取的最佳工艺参数为：乙醇浓度 60%，pH 2.5，料液比1:40，提取温度 60 ℃。
结论通过单因素实验和正交实验确定了赤灵芝醇溶性蛋白的最佳提取工艺参数，为赤灵芝醇溶性蛋白的工业化生产提供了参考依据。
【关键词】灵芝；正交试验 中国医药生物技术, 2009, 4(5):359-363灵芝[Ganoderma Lucidum (Leyss.ex Fr.) Karst.]是担子菌纲、多孔菌科、灵芝属的真菌，在我国有两千多年的药用史。
灵芝的药用成分非常丰富，已分离到的有效成分就有数十种之多，灵芝蛋白质是除了灵芝多糖和三萜外的另一类重要活性物质。
它不仅是灵芝生命活动的重要物质，而且具有独特免疫原性，使其在免疫调节和抗肿瘤病等方面具有显著效果[1]。
因此探讨灵芝蛋白的提取工艺对进一步研究灵芝蛋白的结构特征、功能因子和生物活性有着重要的意义。
常见的蛋白提取方法有水提、盐提、醇提、酸提和碱提[2]。
水提灵芝蛋白条件温和，但是提取率很低[3]。
碱法的蛋白提取率高，但强碱容易引起赖氨酸损失，产生不良副产物，还可能造成蛋白质变性和水解[3]。
因此本文采用乙醇来对赤灵芝进行蛋白质的提取，探讨影响赤灵芝中醇溶性蛋白浸提的因素，利用正交实验法来进行试验优化，得出最佳工艺参数。
1 材料与方法1.1 材料赤灵芝样品由浙江龙泉市科达农副产品有限公司提供，产地为浙江龙泉灵芝栽培基地，经中科院微生物研究所卯晓岚研究员鉴定为人工栽培赤芝（Ganoderma Lucidum）；标准牛血清白蛋白购自上海伯奥生物科技有限公司，批号 070903；考马斯亮蓝 G-250 购自上海伯奥生物科技有限公司，批号080605；其它化学试剂如 NaOH、CuSO4·5H2O、K2SO4、浓H2SO4、无水乙醇、H3PO4 和硼酸等均为分析纯。
pHS-25 型 pH 计为上海精密科学仪器有限公司产品；Spectrumlab22p 分光光度计为上海棱光技术有限公司产品；DHG-9000A 型电热恒温鼓风干燥箱为上海博讯实业有限公司医疗设备厂产品；KDN-04A 定氮仪为上海新嘉电子有限公司产品。
1.2 方法1.2.1测定方法采用凯氏定氮法（GB5511- 1985）和考马斯亮蓝 G-250 法[4]测定样品中蛋白质的含量，采用 105 ℃恒重法（GB5512-1985）测定样品中水分的含量。
1.2.2赤灵芝粉的制备将赤灵芝子实体置于50 ℃烘箱中干燥、粉碎、过 30 目筛，得赤灵芝粉并保存。
经测定此赤灵芝粉水分含量为 13.26%，总蛋白含量（以干物质计）为 10.30%。
1.2.3醇溶性蛋白的提取称取已制备好的赤灵芝粉 2 g，按一定的液料比加入蒸馏水，在料液比1:20，温度 30 ℃和pH = 7 的条件下提取 8 h 后抽滤，用少量去离子水分 3 次洗涤残渣，抽滤至干，所得滤渣用 20 ml，浓度为 0.5 mol/L 的 NaCl 溶液搅拌提取 8 h，抽滤，用少量去离子水分 3 次洗涤残渣，抽滤至干，所得滤渣在一定的温度、pH、乙醇浓度下提取一定的时间后，抽滤至干，所得滤作者单位：510640 广州，华南理工大学轻工与食品学院（敖宏、黄生权、陈建旭、曾庆孝）；529156 广东江门，无限极（中国）有限公司（敖宏、黄生权）通讯作者：曾庆孝，Email：fezeng@收稿日期：2009-07-09液置于 0 ~ 4 ℃ 冰箱保存备用。
1.2.4 赤灵芝中醇溶性蛋白提取率（%）的计 算 计算公式如下：%100×=灵芝中总蛋白含量样品中醇溶性蛋白含量蛋白提取率2 结果2.1 蛋白质含量的测定用 Bradford 法测定其含量，参见文献[5]。
2.1.1 牛血清白蛋白标准曲线的绘制 按文献[5]的方法，取约 10 mg 牛血清白蛋白，精密称定，溶于蒸馏水并定容至 100 ml ，配制成 100 μg/ml 的牛血清白蛋白标准溶液，分别精取 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml 于 25 ml 具塞试管中，分别加入 5 ml 考马斯亮蓝 G-250 蛋白试剂，并分别加水补足到 6 ml ，盖上塞子，摇匀，室温静置 2 min 后在 595 nm 波长下比色测定。
以牛血清白蛋白含量（μg ）为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘出标准曲线，得回归方程为 Y = 0.0063X + 0.0047（R 2 = 0.9988），线性关系良好。
2.2 单因素实验2.2.1 时间对醇溶性蛋白提取率的影响 时间是影响蛋白提取率的一个因素，分别选择提取时间为 2、4、6、8、10 h 来进行实验，考察提取时间对醇溶性蛋白提取率的影响，实验结果见图 1 所示。
可知，随着提取时间的增加，醇溶性蛋白质的提取率未有显著性变化，为节约能源，选取提取时间为 2 h 。
蛋白提取率（%） Y i e l d o f p r o t e i n (%)2 4 6 8 108.00 7.006.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00提取时间（h ） Extraction time (h)图 1 提取时间对醇溶性蛋白提取率的影响（其它参数分别固定为：提取温度 30 ℃，pH 4.5，料液比 1:20，提取次数 1，乙醇浓度 70%）Figure 1 The effects of time on the extraction rate of ethanol-soluble protein (The extraction temperature was 30 ℃, pH was 4.5, material-liquid ratio was 1:20, extraction frequency was 1, the concentration of ethanol was 70%)2.2.2 不同溶剂浓度对醇溶性蛋白提取率的影 响 分别选取乙醇浓度为 10%、30%、50%、70%、90% 进行醇溶性蛋白的提取，不同乙醇浓度对蛋白提取率的影响如图 2 所示。
可见在较低的乙醇浓度条件下，醇溶性蛋白的提取率随乙醇浓度的增加而增加，70% 乙醇浓度提取的醇溶性蛋白提取率最高，但随着浓度增大，醇溶性蛋白提取率反而下降，故选用 70% 乙醇浓度为正交优化提取方案的基准参数。
2.2.3 料液比对醇溶性蛋白提取率的影响 分别选取料液比 1:10、1:20、1:30、1:40、1:50 进行蛋白提取率（%） Y i e l d o f p r o t e i n (%)20 40 60 80 1004.504.003.503.002.502.001.501.000.500乙醇浓度（%） Ethanol concentration (%)图 2 乙醇浓度对醇溶性蛋白提取率的影响（其它参数分别固定为：提取温度 30 ℃，pH 4.5，料液比 1:20，提取次数 1，提取时间 2 h ）Figure 2 The effects of concentration of ethanol on the extraction rate of ethanol-soluble protein (The extraction temperature was 30 ℃, pH was 4.5, material-liquid ratio was 1:20, extraction frequency was 1 , extraction time 2 h)蛋白提取率（%） Y i e l d o f p r o t e i n (%)1:10 1:20 1:30 1:40 1:509.008.007.006.005.004.003.002.001.00料液比Material-liquid ratio图 3 料液比对醇溶性蛋白提取率的影响（其它参数分别固定为：提取温度 30 ℃，pH 4.5，乙醇浓度 70%，提取次数 1，提取时间 2 h ）Figure 3 The effects of material-liquid ratio on the extraction rate of ethanol-soluble protein (The extraction temperature was 30 ℃, pH was 4.5, the concentration of ethanol was 70%, extraction frequency was 1, extraction time 2 h)浸提，考察醇溶性蛋白的提取率，结果如图 3 所示。
可知，随着料液比增大，蛋白提取率随之增大，但在料液比增至 1:40 后，料液比的增加对蛋白提取率的影响不大，但料液比过大会造成溶剂和能源的浪费，且会给浓缩过程带来负担，所以确定料液比为 1:40。
2.2.4 pH 对醇溶性蛋白提取率的影响 利用盐酸调节灵芝提取前样品的 pH [6]，分别选取 pH 为 1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 进行实验，pH 对蛋白提取率的影响如图 4 所示。
可见，随着 pH 值的增大，醇溶性蛋白的提取率不断地增大，但当 pH蛋白提取率（%） Y i e l d o f p r o t e i n (%)1 2 3 4 5 6 76.005.00 4.00 3.00 2.00 1.00pH 值 pH value图 4 pH 值对醇溶性蛋白提取率的影响（其它参数分别固定为：提取温度 30 ℃，料液比 1:20，乙醇浓度 70%，提取次数 1，提取时间 2 h ）Figure 4 The effects of pH on the extraction rate of ethanol-soluble protein (The extraction temperature was 30 ℃, material-liquid ratio was 1:20, the concentration of ethanol was 70%, extraction frequency was 1, extraction time 2 h)蛋白提取率（%）Y i e l d o f p r o t e i n (%)10 20 30 40 50 60 708.00 7.006.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00温度（℃） Temperature (℃)图 5 提取温度对醇溶性蛋白提取率的影响（其它参数分别固定为：pH 3.0，料液比 1:20，乙醇浓度 70%，提取次数 1，提取时间 2 h ）Figure 5 The effects of extraction temperature on the extraction rate of ethanol-soluble protein (pH was 3.0, material-liquid ratio was 1:20, the concentration of ethanol was 70%, extraction frequency was 1, extraction time 2 h)大于 3 时，提取率反而呈现出下降的趋势，这可能是因为 pH 值过高会引起蛋白质发生水解或者变性等不良反应。
