鼠尾直接PCR试剂盒(快速基因型鉴定)

鼠尾鉴定试剂盒操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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鼠尾鉴定
操作流程及步骤：
目的：鉴定纯合子小鼠。

按照厂家设定说明书执行。

医大目前方法如下：
1、提前一晚于1.5mlEP管中加入240ul的消化液（三种消化液看不清楚），
1、56℃过夜。

2、15000r/min 离心2min。

3、吸取上清液200ul+200ul butter GB+200ul 无水乙醇。

4、旋转柱下套离心管，将3步液体加入，12000r/min 离心2min，弃去下层
液体。

5、加500ul WA 12000r/min 离心1min，弃去下层液体。

6、加700ul WB 12000r/min 离心1min，弃去下层液体。

7、重复步骤7。

8、12000r/min 离心2min。

9、换新的1.5mlEp管，加40ulEB65℃加热静置5min。

10、5min后12000r/min 离心2min。

11、测DNA浓度。

12、跑PCR，原理同CDNA，机器不同需设定程序根据目的基因和酶的
不同设定解链温度、退火温度、酶合成最佳温度和循环的次数。

参照厂家指定说明书可输入作为程序。

PCR结束后进入琼脂糖凝胶电泳、然后拍
片对照。

心得体会及注意事项：根据目的DNA不同按厂家制定说明书执行。

**最重要的是每个鼠对应标号，在换管等操作中一定一一对应，不可出错。

鼠尾基因型鉴定原理嘿，朋友们！今天咱就来讲讲鼠尾基因型鉴定原理。

你说这鼠尾，平时咱可能都不咋注意，可它里面藏着的秘密可不少呢！想象一下，这鼠尾就像一个小小的神秘世界，等着我们去探索。

那怎么鉴定它的基因型呢？这就好像我们要解开一个谜题一样。

咱先得了解鼠尾里面有啥。

其实啊，鼠尾里有各种遗传物质，这些遗传物质就决定了鼠的基因型。

这就好比是鼠的“身份证”，能告诉我们它到底是啥样的。

然后呢，我们得有一些专门的方法和工具来搞清楚这些遗传物质。

就像是我们要打开一个锁，得找到合适的钥匙一样。

这些方法可能会有点复杂，但别怕呀，只要我们一步一步来，总能搞明白的。

比如说，我们可能要用到一些化学试剂，让鼠尾里的遗传物质显现出来。

这就好像是给这个神秘世界打开了一盏灯，让我们能看清楚里面的东西。

然后再通过一些技术手段去分析、去判断。

你说这是不是很神奇？一个小小的鼠尾，居然能告诉我们这么多信息。

这就好像是在一个看似普通的地方，突然发现了宝藏一样让人惊喜！而且啊，这鼠尾基因型鉴定可不是随便玩玩的，它可有大用处呢！比如说，在科学研究中，我们可以通过它来了解鼠的遗传规律，这对我们研究很多疾病啊、生物特性啊都有很大的帮助。

这不就像我们有了一把万能钥匙，可以打开很多知识的大门吗？再想想，如果我们能熟练掌握这个技术，那我们不就像是掌握了一门独特的技能，在生物领域里可以大显身手啦？这多酷啊！总之呢，鼠尾基因型鉴定原理虽然有点复杂，但只要我们有耐心、有兴趣，就一定能搞清楚。

就像那句话说的，世上无难事，只怕有心人嘛！所以啊，大家可别小瞧了这小小的鼠尾，它里面的学问可大着呢！让我们一起去探索这个神秘的小世界吧！。

⿏尾提取DNA⽅法转基因⼩⿏筛选——⿏尾提取基因组DNA⽅法1.⼩⿏分笼后打⽿标，剪取⼩⿏尾尖3mm--5mm左右于1.5mL 离⼼管中，标记⽿标号。

2.配置消化液，每管加⼊消化液0.5mL，55℃，3-5h,或放置过夜。

（最长可放置3天）。

3.加1倍体积（0.5mL）PCI(下层液体)，上下颠倒10余次。

（PCI可分装出⼀些现⽤，以免操作不慎污染）。

4.室温15000rpm离⼼，10min。

5.⼩⼼取上清约0.4mL⼊新管，依次标号，加⼊异丙醇0.4mL，上下倒转10次左右。

6.4℃，15000rpm离⼼，5min。

7.弃上清，滤纸吸⼲，加⼊70%⼄醇0.5mL，将管底沉淀弹起，上下颠倒⼏次，洗涤。

8.4℃，15000rpm离⼼，5--7min。

9.弃上清，瞬时离⼼，⽤枪吸⼲剩余液体，后经空⽓⼲燥5-10min。

10.加⼊1*TE 60-170µL⼀般加100µL，振荡30min溶解，于4℃冰箱保存。

注意事项：1.⼩⿏⽿标与管号⼀⼀对应，在剪尾或提取DNA过程中如发⽣混淆，则应重新剪尾。

2.配置消化液时，最后加蛋⽩酶K，配置完成后混合均匀再分装；分装后依次检查，确认每管的⿏尾都浸⼊在消化液中。

尽量多配⼀些消化液，以免不够。

3.提取DNA之前，先检查⿏尾消化情况，过夜消化后，⼀般只能观察到少量⾻骼及⿏尾⽑发，如观察到⿏尾组织，说明消化不完全，可能是时间不够或消化液配置不正确。

4.由于实验中⽤到的PCI，异丙醇等对⾝体有害，因此在提取DNA和配置PCI时，应注意防护，戴好⼝罩和乳胶⼿套。

5.实验过程中，应轻拿轻放，避免液体洒出，沾湿⼿套，洗去Marker笔字迹等情况的发⽣。

为了防⽌⽿标号被擦掉，最好连号摆放。

6.吸取上清⼀步中，应保证上清质量，避免下层杂质的吸⼊，如不慎吸⼊，应将样品重新离⼼。

7.DNA沉淀⼀般呈⽩⾊或半透明胶状，混有杂质时可能带有⿊⾊，提取过程中如观察不到沉淀，应做好标记，重新剪尾。

小鼠IL-10ELISA试剂盒Mouse IL-10ELISA kitCat#：EMC005尊敬的客户，感谢您选用本公司QuantiCyto®ELISA系列产品。

本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业体外诊断试剂生产技术制造，仅供科研使用。

本产品可检测血清、血浆、细胞培养上清液、灌洗液、尿液、羊水、腹水、脑脊液、胸腔积液、组织匀浆液等多种类型样本中天然和重组小鼠IL-10浓度，具体适用样本请咨询。

使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分。

如有疑问，请联系欣博盛生物科技有限公司。

Email:**********************，全国服务热线: 4006800892。

QuantiCyto ®EMC005Mouse IL-102试剂盒组成：名称48T 96T 抗体预包被酶标板8×68×12冻干标准品0.5ng /支×2支0.5ng /支×3支标准品&标本通用稀释液12ml×1瓶20ml×1瓶浓缩生物素化抗体1支（规格见标签）1支（规格见标签）生物素化抗体稀释液10ml×1瓶16ml×1瓶浓缩酶结合物1支（规格见标签）1支（规格见标签）酶结合物稀释液10ml×1瓶16ml×1瓶浓缩洗涤液20×25ml×1瓶50ml×1瓶显色底物（TMB ）6ml×1瓶12ml×1瓶反应终止液具腐蚀性6ml×1瓶12ml×1瓶封板胶纸3张6张产品说明书1份1份储存条件：未开封完整试剂盒4℃保存，请在保质期内使用。

已开封试剂盒抗体包被板条未用完的板条放回带拉链铝箔袋，封好口。

4℃条件下可储存1个月左右。

标准品冻干粉-20℃可储存6个月左右。

稀释后的标准品使用后请丢弃。

浓缩生物素化抗体浓缩液4℃可储存1个月左右，稀释后即用即弃。

小鼠基因鉴定（KO鼠）1．实验原理：小鼠基因鉴定示意图（1）野生型小鼠，无法p出p1p3片段，且p1p2片段相对于KO型的要小。

（2）杂合KO小鼠，有p1p3产物，但p1p2产物有两条带。

（3）纯合KO小鼠，能p出p1p3产物，且p1p2结果片段较大。

注：p1p3600bp左右，p1p21000bp左右2．实验操作步骤（1）剪子鼠尾（脚趾）：2-3mm1酒精灯、剪子、镊子、1.5EP管、EP管板子、marker笔等（2）小鼠DNA提取：1组织消化：将配置好的消化buffer（裂解液）分别加入到，装有小鼠组织的1.5mlEP管内，每管500ul。

然后按1:500的比例加入蛋白酶K（即每支加入1ul）。

混匀后，55℃水浴消化过夜。

2蛋白酶灭活处理：将过夜消化的样品100℃煮沸，5min。

然后25℃，12000g，离心5-10min。

3苯酚氯仿处理：提前准备好相应数量的1.5mlEP管，每支管中分别加入200ul苯酚和氯仿（抽提液）。

将离心好的样品拿出，每管吸出400-450ul上清转移到相应加入苯酚和氯仿的EP管中。

（尽可能多吸，但保证不能吸到下边沉淀，每管体积一样。

）之后用力摇晃2-3min，避免摇晃过程中将标记磨损掉。

然后25℃，12000g，离心10min。

4等体积氯仿处理：提前准备好相应数量的1.5mlEP管，每支管中分别加入400ul氯仿（等体积氯仿）。

将离心好的样品拿出，每管吸出400ul（视情况而定）上层液体转移到相应加入氯仿的EP管中。

（尽可能多吸，但保证不能吸到下层液体及夹层蛋白，可管子斜置，方便吸取。

每管体积一样。

）用力摇晃2-3min，避免摇晃过程中将标记磨损掉。

然后25℃，12000g，离心10min。

5无水乙醇处理：提前准备好相应数量的1.5mlEP管，每支管中分别加入1ml无水乙醇（2.5倍体积无水乙醇）。

将离心好的样品拿出，每管吸出400ul（视情况而定）上层液体转移到相应加入无水乙醇的EP管中。

鼠尾直接PCR试剂盒的说明
的从鼠尾、小鼠耳朵样本中释放出基因组DNA，用于PCR 反应，因此特别适合大规模基因检测。

裂解缓冲液释放基因组DNA过程在室温65°C条件下10-30 min内完成，不需加热处理，不需要其他去蛋白、RNA等的过程，即可将释放出的微量DNA作为模板进行PCR反应。

D-Taq DNA polymerase是Foregene为直接PCR反应专门研制出的DNA polymerase。

D-Taq DNA polymerase对多种PCR 反应抑制剂具有极强的的耐受性、在各种复杂反应体系中均能扩增痕量的DNA，扩增速度可达2Kb/min，特别适合进行直接PCR反应。

鼠尾直接PCR试剂盒的应用：
1.鼠尾直接PCR试剂盒适用范围：各类实验室小鼠或大鼠。

2.样本裂解释放的DNA：仅用作PCR模板。

3.试剂盒可用于以下用途：转基因型鉴定、基因分型等。

第59卷 第3期2023年06月青岛大学学报(医学版)J O U R N A LO FQ I N G D A O U N I V E R S I T Y (M E D I C A LS C I E N C E S)V o l .59,N o .3J u n e 2023[收稿日期]2022-09-01; [修订日期]2023-05-23[基金项目]国家自然科学基金面上项目(32171131)[第一作者]韩帆(1997-),女,硕士研究生㊂[通信作者]陈曦(1980-),女,博士,副教授,硕士生导师㊂E -m a i l :c a s e y1201@163.c o m ㊂不同月龄A 53T 小鼠背根神经节中α-S yn 表达变化韩帆,焦倩,杜希恂,阎春玲,姜宏,陈曦(青岛大学国家生理学重点(培育)学科,山东青岛 266071)[摘要] 目的 探讨不同月龄A 53T 转基因(A 53T )小鼠脊髓背根神经节(D R G )中α-突触核蛋白(α-S yn )表达水平的变化㊂方法 6月龄和12月龄野生型(WT )小鼠和A 53T 小鼠经乌拉坦腹腔麻醉后处死,在体视显微镜下取出胸段㊁腰段和荐段的D R G 组织,采用蛋白免疫印迹法检测D R G 中α-S y n 的表达水平㊂结果 与相同月龄WT 小鼠相比,6月龄及12月龄A 53T 小鼠D R G 中α-S yn 表达量显著增加(F =59.164㊁55.681,P <0.01);与6月龄A 53T 小鼠相比,12月龄A 53T 小鼠D R G 中α-S yn 的表达量显著增加(F =13.802,P <0.05)㊂结论 A 53T 小鼠D R G 中α-S yn 表达量高于同月龄WT 小鼠,且其表达量随年龄增长而增加㊂[关键词] α突触核蛋白;帕金森病;小鼠,转基因;神经节,脊[中图分类号] R 338.2 [文献标志码] A [文章编号] 2096-5532(2023)03-0337-04d o i :10.11712/jm s .2096-5532.2023.59.075[开放科学(资源服务)标识码(O S I D )][网络出版] h t t ps ://k n s .c n k i .n e t /k c m s 2/d e t a i l /37.1517.R.20230719.1618.003.h t m l ;2023-07-20 14:53:22E X P R E S S I O NO Fα-S Y N U C L E I NI N T H E D O R S A L R O O T G A N G L I O N O FA 53T M I C E W I T H D I F F E R E N T A G E SI N M O N T H S HA N F a n ,J I A OQ i a n ,D UX i x u n ,Y A NC h u n l i n g ,J I A N G H o n g ,C H E N X i (S t a t eK e yD i s c i p l i n e :P h y s i o l o g y (i n I n c u b a -t i o n ),D e p a r t m e n t o f P h y s i o l o g y ,Q i n g d a oU n i v e r s i t y ,Q i n gd a o 266071,C h i n a )[A B S T R A C T ] O b je c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h ee x p r e s s i o n l e v e l of α-s y n u c l e i n (α-S y n )i nt h ed o r s a l r o o tg a n g l i o n (D R G )o f A 53Tt r a n s g e n i cm i c ew i t hd i f f e r e n t a g e s i nm o n th s . M e t h o d s Wi l d -t y p e (WT )m i c ea n dA 53T m i c e ,a ge d6o r 12m o n t h s ,w e r e s a c r if i c e da f t e r i n t r a p e r i t o n e a l a n e s t h e s i aw i t hu r e t h a n e .D R Gt i s s u es a m p l e so f t h e t h o r a c i c ,l u m b a r ,a n ds a c r a l s eg m e n t s w e r e c o l l e c t e d u n d e r a s t e r e o m i c r o s c o p e ,a n dW e s t e r n b l o t t i n g w a s u s e d t om e a s u r e th e e x p r e s si o n l e v e l o f α-S yn . R e s u l t s C o m -p a r e dw i t h t h eWT m i c ew i t h t h e s a m e a g e i nm o n t h s ,t h eA 53T m i c e a g e d 6o r 12m o n t h s h a d a s i g n i f i c a n t i n c r e a s e i n t h e e x p r e s -s i o n l e v e l o f α-S y n i nD R G (F =59.164,55.681;P <0.01).C o m p a r e dw i t h t h eA 53T m i c e a g e d 6m o n t h s ,t h eA 53T m i c e a ge d 12m o n t h sh a d a s i g n if i c a n t i n c r e a s e i n t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f α-S y n i nD R G (F =13.802,P <0.05). C o n c l u s i o n A 53T m i c e h a v e a h igh e r e x p r e s si o n l e v e l o f α-S y n i nD R Gt h a n WT m i c ew i t h t h e s a m ea g e i n m o n t h s ,a n d t h ee x p r e s s i o n l e v e l o f α-S y n i n c r e a s e s w i t ha ge .[K E Y W O R D S ] a l p h a -s y n u c l e i n ;P a r k i n s o nd i s e a s e ;m i c e ,t r a n s g e n i c ;g a n g l i a ,s pi n a l 帕金森病(P D )是一种主要影响运动功能的神经退行性疾病,其发病率随着年龄增加而逐渐上升[1-3]㊂目前,P D 发生的确切原因和机制仍不完全清楚,但大量研究表明,基因突变是重要的因素之一[4-7]㊂A 53T 转基因(A 53T )小鼠是一种常见的P D 模型小鼠,其体内携带的人类A 53T 突变型α-突触核蛋白(α-S y n )基因可改变α-S y n 的结构,使原本可溶性的α-S y n 单体转变为不溶性的多聚体,可在动物体内重现由α-S yn 聚集起始的P D 病理过程[8-12]㊂根据B R A A K 学说可知,胃肠道可能是α-S y n 发生病变的起始部位[13-16],且这些病理性α-S yn 会通过外周神经系统逐渐向中枢传播[17]㊂已有大量实验证实迷走神经在α-S y n 的肠-脑传播中承担主要作用,但是消化道与中枢之间还存在其他神经联络,如交感神经,其传入纤维的胞体主要汇聚在脊髓背根神经节(D R G )中㊂为明确D R G 中是否也存在着α-S yn 高表达,本实验观察了不同月龄A 53T 小鼠D R G 中α-S y n 的含量变化,从而为交感神经传入纤维参与α-S y n 从胃肠道传播至中枢的可能作用提供证据㊂现将结果报告如下㊂1 材料和方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物 A 53T 小鼠(品系名称:B 6;C 3-T g (P r n p-S N C A *A 53T )83V l e /J ),S P F 级,购于南京大学模式动物研究所㊂小鼠饲养于清洁级动物房中,可自由进食饮水,饲养环境为光照模拟自然昼夜节律,12h 明暗交替,温度保持在20~24ħ,相Copyright ©博看网. All Rights Reserved.338青岛大学学报(医学版)59卷对湿度保持在40%~60%㊂选用6月龄和12月龄的纯合子A53T小鼠作为实验组,同窝相同月龄的野生型(WT)小鼠作为对照组㊂1.1.2试剂α-S y n抗体㊁β-t u b u l i n抗体购于美国C e l l S i g n a l i n g T e c h n o l o g y公司;山羊抗兔和山羊抗鼠抗体购于英国T h e r m oF i s h e rS c i e n t i f i c公司;0.45μm P V D F转印膜㊁E C L化学发光液均购于美国M i l l i p o r e公司:R I P A裂解液购于中国C o m W i n B i o t e c h公司㊂A53T小鼠基因型鉴定P C R试剂盒购于中国V a z y m e生物科技有限公司㊂1.2实验方法1.2.1 A53T小鼠基因鉴定 A53T纯合子小鼠由A53T杂合子小鼠配种育得,饲养至1月龄进行分笼和鉴定㊂于尾尖部截取0.5c m长鼠尾组织提取D N A,按照试剂盒(T a q P r o H S U+P r o b e M a s t e r M i x,V a z y m e生物科技有限公司)说明配制实时荧光定量P C R反应体系并进行实验㊂根据P C R数据计算әC t值,通过比较实验组与对照组纯合子目的基因的әC t值,确定基因型㊂1.2.2蛋白免疫印迹法检测D R G中α-S y n表达小鼠经乌拉坦腹腔麻醉处死后取出脊柱,于体视显微镜下取出胸段㊁腰段和荐段的D R G组织放入E P 管中,先用剪刀将组织剪碎,再加入配制好的R I P A 裂解液,充分磨碎组织㊂冰上静置裂解30m i n后,应用高速离心机在4ħ下以12000r/m i n离心20m i n,吸取上清液转移至新的1.5m L E P管中,利用B C A试剂盒和酶标仪进行蛋白质定量,计算上样量㊂按比例加入l o a d i n g b u f f e r,充分混匀,100ħ煮沸10m i n使蛋白充分变性,-20ħ冻存㊂蛋白样品经S D S-P A G E电泳(90V㊁30m i n,120V㊁60m i n)分离后,湿法转至孔径为0.45μm的P V D F 膜上,按蛋白M a r k e r将目标蛋白裁剪出来,经脱脂奶粉封闭㊁一抗孵育㊁H R P-I g G二抗孵育后,用T B S T缓冲液洗净,将膜与E C L超敏发光液反应后置于凝胶成像系统内进行观察并拍摄图像㊂采用I m a g e J分析软件对蛋白条带进行灰度计算,目的蛋白表达水平以α-S y n和β-t u b u l i n g条带灰度值的比值表示㊂1.3统计学处理应用S P S S25.0软件进行统计学处理㊂小鼠D R G中α-S y n的表达量以 xʃs表示,不同月龄WT和A53T小鼠D R G中α-S y n表达水平比较采用析因设计的方差分析,P<0.05表示差异具有统计学意义㊂2结果2.1 A53T小鼠鉴定P C R结果显示,对照组和实验组纯合子目的基因әC t平均值分别为5.84ʃ0.57和6.11ʃ0.47㊂әC t值大于对照组纯合子目的基因әC t值的小鼠为A53T纯合子小鼠㊂共选取10只A53T纯合子小鼠进行实验㊂2.2不同月龄WT和A53T小鼠D R G中α-S y n表达比较蛋白免疫印迹法检测结果显示,6月龄WT组(n=6)㊁6月龄A53T组(n=6)㊁12月龄WT组(n=4)和12月龄A53T组(n=4)小鼠D R G中α-S y n表达水平分别为0.18ʃ0.07㊁1.09ʃ0.21㊁0.46ʃ0.22和1.63ʃ0.35㊂析因设计方差分析结果显示: F月龄=17.417,P<0.01;F组别=112.168,P<0.01; F月龄ˑ组别=1.727,P>0.05㊂与同月龄WT组小鼠相比,6月龄㊁12月龄A53T组小鼠D R G中α-S y n 表达量显著增高,分别增加了505.56%和254.35%,差异均具有统计学意义(F=59.164㊁55.681,P< 0.01);12月龄A53T组小鼠D R G中α-S y n表达量比6月龄A53T组小鼠增加了50.46%,两组相比差异具有统计学意义(F=13.802,P<0.05)㊂表明A53T小鼠D R G中α-S y n的表达远高于同月龄WT小鼠,且随年龄的增长,其表达量增加㊂3讨论大量临床数据表明,在典型的P D运动症状出现之前,胃肠道功能障碍就已经在P D病人身上长期存在,包括便秘㊁胃轻瘫等[18-24]㊂德国的B R A A K 教授于2003年提出了经典的P D分期学说,该学说指出胃肠道是病理性α-S y n蛋白传播的起源地,并且通过肠脑轴逐渐蔓延至中枢神经系统[25-26]㊂其中,α-S y n通过迷走神经传播进入迷走神经运动背核(D MV)是肠脑轴传播的重要组成部分㊂后续有实验表明,迷走神经切断术可以使P D的发展进程大幅减缓,并且使P D的患病风险大大降低[27-30]㊂但该法仍不能完全杜绝P D,这提示α-S y n在胃肠与中枢之间传播可能还有其他的通道㊂支配消化道的神经除迷走神经外,还有交感神经,其传入纤维的胞体主要汇聚在脊髓D R G中,可感受消化道内机械刺激(如管壁扩张㊁胃肠道蠕动等)㊁化学刺激(如管Copyright©博看网. All Rights Reserved.3期韩帆,等.不同月龄A53T小鼠背根神经节中α-S y n表达变化339腔内毒性物质㊁酸碱度等)以及温度的变化等,并将这些信息传入中枢神经系统㊂与迷走神经类似,交感神经在消化道和中枢神经系统之间也起桥梁作用,那么它是否在α-S y n的传播过程中起某些作用呢?本研究对此进行了探讨㊂本实验选取小鼠胸椎㊁腰椎和荐椎处的D R G 组织进行检测,来自消化道的交感神经传入纤维主要通过以上部位进入脊髓,可充分反映交感神经传入纤维在病理性α-S y n肠脑传播中的作用㊂实验结果显示,与同月龄WT组小鼠相比,6月龄㊁12月龄A53T组小鼠D R G中α-S y n表达量显著增加,且随年龄的增长,A53T小鼠D R G中α-S y n表达量会进一步增加,表明交感神经中确实存在病理性α-S y n㊂值得注意的是,本实验所取组织来源于A53T小鼠,该小鼠是一种携带人类A53T突变型α-S y n基因的P D模型小鼠,其体内存在广泛的人A53T突变型α-S y n过表达㊂那么,本实验中小鼠D R G中α-S y n 增多的原因,是否仅与该部位的基因突变相关呢?已有实验表明,3月龄A53T小鼠小肠组织中α-S y n 的表达已经明显升高,且出现了消化道功能障碍,但此时中枢神经系统内并未出现病理性的α-S y n,此种情况甚至会持续到6月龄以后,提示老龄A53T 小鼠中枢病理性α-S y n的增多可能亦与该蛋白从外周至中枢的传播有关[31-33]㊂故作者推测A53T小鼠D R G中α-S y n的增多也可能与交感神经在此传播过程中的作用相关㊂有其他研究也报道了交感神经的可能作用,如P D病人肾上腺中存在α-S y n的沉积,肾上腺髓质中包含由交感神经胞体组成的神经节,在这些神经节及发出的神经纤维中均观察到α-S y n聚集的现象[34-35];在膀胱和生殖器官附近的交感神经神经节中同样出现了路易小体[24,36]㊂这些证据均表明交感神经可能参与了P D进展,并且可能与病理性α-S y n的传播有关㊂综上所述,A53T小鼠D R G中α-S y n的表达量显著增加,且其表达量随年龄的增长同步上升,提示交感神经在P D进展中可能发挥作用㊂本实验结果可为P D发生机制研究提供实验依据,同时为通过阻断α-S y n由外周向中枢传播来治疗P D提供了新的思路㊂[参考文献][1]W E R N E R M H,O L A N OW C W.P a r k i n s o n s d i s e a s em o d i f i-c a t i o n t h r o u g h a b l k i n a s e i n h i b i t i o n:a n o p p o r t u n i t y[J].M o v e-m e n tD i s o r d e r s:O f f i c i a lJ o u r n a lo ft h e M o v e m e n t D i s o r d e rS o c i e t y,2022,37(1):6-15.[2]T O L O S AE,G A R R I D O A,S C HO L ZS W,e t a l.C h a l l e n g e si n t h e d i a g n o s i s o f P a r k i n s o n s d i s e a s e[J].T h eL a n c e tN e u r o-l o g y,2021,20(5):385-397.[3]L IG,MAJF,C U I SS,e t a l.P a r k i n s o n s d i s e a s e i nC h i n a:a f o r t y-y e a r g r o w i n g t r a c ko fb e d s i d ew o r k[J].T r a n s l a t i o n a lN e u r o d e g e n e r a t i o n,2019,8:22.[4]F A R R OW SL,S C H I E R D I N G W,G O K U L A D H A SS,e t a l.E s t a b l i s h i n gg e n er e g u l a t o r y n e t w o r k sf r o m P a r k i n s o n sd i-s e a s e r i s k l o c i[J].B r a i n:aJ o u r n a lo fN e u r o l o g y,2022,145(7):2422-2435.[5]Z H O USQ,T I A N Y,S O N GXJ,e t a l.B r a i n p r o t e o m e-w i d ea n dt r a n s c r i p t o m e-w i d ea s s o-c i a t i o ns t u d i e s,B a y e s i a nc o l o c a-l i z a t i o n,a n d M e n d e l i a nr a n d o m i z a t i o na n a l y s e sr e v e a lc a u s a lg e n e s o f P a r k i n s o n s d i s e a s e[J].T h e J o u r n a l s o fG e r o n t o l o g yS e r i e sA,B i o l o g i c a lS c i e n c e sa n d M e d i c a lS c i e n c e s,2023,78(4):563-568.[6]Y IM H,L IJX,J I A N SJ,e ta l.Q u a n t i t a t i v ea n dc a u s a la n a l y s i s f o r i n f l a mm a t o r y g e n e s a n d t h e r i s k o f P a r k i n s o n s d i-s e a s e[J].F r o n t i e r s i n I mm u n o l o g y,2023,14:1119315. 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聚合酶链反应（PCR）是分子生物学中常用的技术，用于放大特定的DNA序列。

PCR是一种强大的工具，用于鉴定和表征微生物种类，并且广泛用于微生物诊断和研究。

PCR的一个关键应用是鉴定细菌和真菌物种。

基于PCR的鉴定涉及使用特定引物，这些引物靶向微生物基因组的保守区域，从而使特定物种的DNA序列得到放大。

这使得可以直接从各种样本（如临床标本、环境样本和食品产品）中检测和鉴定微生物。

执行PCR-based鉴定微生物物种时，通常使用专门的试剂盒和试剂。

这些试剂盒通常包含PCR的所有必需成分，包括DNA聚合酶、核苷酸、缓冲液和特定于目标微生物物种的引物。

选择适当的PCR试剂盒对于成功鉴定微生物物种至关重要，因为它确保了PCR反应的特异性和灵敏性。

基于PCR的微生物物种鉴定的原理涉及几个关键步骤。

从样本中提取DNA并纯化以去除可能干扰PCR反应的杂质和抑制剂。

然后将纯化后的DNA用作PCR反应的模板，PCR反应包括多个循环的DNA变性、引物结合和DNA延伸。

这样会放大与感兴趣的微生物物种特异性的目标DNA序列。

PCR-based鉴定微生物物种应用的一个例子是在传染病诊断中。

在临床微生物学中，广泛使用PCR快速准确地检测病原微生物，包括细菌、病毒和真菌，从患者样本中。

基于PCR的鉴定可为临床医生提供有价值的信息，以便及时和有针对性地治疗传染病，从而改善患者的预后。

除了临床诊断，基于PCR的微生物物种鉴定还用于环境微生物学，用于监测和监测各种生态系统中的微生物裙落。

通过鉴定和表征环境样本中存在的微生物物种，研究人员可以深入了解微生物裙落的多样性和功能，以及它们与环境的相互作用。

基于PCR的微生物物种鉴定是一种强大而多功能的工具，在微生物学中应用广泛。

具体试剂盒和试剂的使用，结合PCR的原理，可以准确和敏感地从各种样本中鉴定细菌和真菌物种。

无论在临床诊断、环境监测还是研究中，基于PCR的鉴定在推动我们对微生物多样性及其对人类健康和环境的影响的理解方面起着至关重要的作用。