11-乳粉中维生素C的高效液相色谱法测定

维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较目前研究维生素C测定方法的有很多，如荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等,各种方法对实际样品的测定均有满意的效果。

目前国内维生素C含量测定仍以光度法为主流，但近年来色谱法，特别是HPLC 法上升趋势尤为明显。

一、荧光法1．原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。

脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。

本方法的最小检出限为0.022 g/ml。

2．适用范围本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定二、2，6-二氯靛酚滴定法（还原型VC，GB／T6195—1986）1、原理：还原型抗坏血酸还原染料2，6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失。

还原型抗坏血酸还原2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。

在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2，6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。

本法用于测定还原型抗坏血酸，总抗坏血酸的量常用2，4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定。

2、优点简便、快速、比较准确等，适用于许多不同类型样品的分析。

3、缺点2，6一二氯靛酚法虽然简便，但是药品价格昂贵。

而且不能直接测定样品中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量，易受其他还原物质的干扰。

如果样品中含有色素类物质，将给滴定终点的观察造成困难。

三、分光光度法1、原理：维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸，pH>5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸。

脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎，脎在500nm波长有最大吸收。

食品中维生素C的高效液相色谱检测作者：暂无来源：《中国食品》 2019年第1期文李美慧辽宁惠康检测评价技术有限公司摘要：高效液相色谱检测方法具有很强的分辨率、灵敏度，且能够同时测定几种性质类似的食品成分。

本文在阐述高效液相色谱法的基础上，具体分析高效液相色谱检测法在食品维生素C成分检测中的应用。

关键词：高效液相色谱；维生素C；检测应用高效液相色谱检测法是在上世纪六十年代发展起来的一种新型分析、分离技术，是在以往液相色谱法基础上引入的气相色谱法理论，之后在高效、高灵敏度检测器的基础上发展而成。

在使用的过程中，高效液相色谱法具有很强的灵敏度、分辨率，且色谱柱在使用的过程中能够被反复利用，因为被人们广泛应用在生物化学、食品分析、医药研究、无机分析等领域。

一、材料和方法仪器和试剂的选择。

实验检测仪器选择Agilent1100高效液相色谱仪，辅助配合应用二极管阵列检测仪器。

实验试剂包含甲醇、辛烷磺酸钠和应用甲醇辛烷磺酸钠配置成0.1%水溶液；三氟乙酸；67抗环血酸。

利用仪器设备准确称量10mg的抗坏血酸标准品，并按照每升0.1mol 的比例溶解盐酸，之后用高纯度水将纯水定容在100毫升左右[1]。

色谱条件的确定。

实验操作色谱柱型号为250mmx4.6mmx5μm；流动相是甲醇和0.1%比例的辛烷磺酸钠溶液；检测波长为230mm；样本的流动速度是每分钟1ml；样品的进样量是10μL。

在确定好色谱条件之后以浓度为基本横坐标、峰面积数值为纵坐标绘制工作曲线，之后通过回归计算得到回归方程Y=496.5XC－149.1，回归系数是0.9996。

样品检测和结果计算。

在实验中，对于液体样品不需要进行额外的处理，在应用滤膜过滤之后按照相应的色谱条件进行直接进样处理。

固体样品则需要按照相关规定称取一定数量的样品，在样品容器中加入蒸馏水，一直到样品达到25mL，超声波提取5分钟。

根据样品的峰面积计算出样品中维生素C的含量。

二、结果和讨论第一，色谱条件的选择。

药物分析设计性实验设计方案维生素C及其制剂的含量测定药学2011级（2）班李智（1103501275）李集毅（1103501276）指导教师：***2014 年 4 月高效液相色谱测定维生素C片剂含量一、实验目的1. 掌握一般药物含量测定实验的设计方法2. 掌握维生素C高效液相色谱法含量测定的原理和方法3. 掌握标准曲线法在药品含量测定检验中的运用二、实验器材仪器：岛津高效液相色谱仪,色谱柱C18;电子天平;烧杯,棕色容量瓶（50ml*7）0.145μm滤膜，棕色容量瓶（20ml*2）试剂：维生素C片（0.1g/片）（市售），维生素C标准对照品（0.1mg/ml）;二次蒸馏水，甲醇（0.1mg/ml色谱纯），草酸（分析纯），磷酸二氢钾（分析纯），磷酸氢二钾（分析纯）三、实验原理1. 标准曲线法：采用梯度浓度稀释法，将对照品溶液稀释至不同浓度的待测溶液，制备成标准溶液，用高效液相色谱法按标准进样得样品吸收峰（峰面积），绘制成标准曲线。

2. 将供试品制剂制成规定含量的待测品，进行高效液相色谱测定，对比对照品溶液标准曲线，查看供试品是否符合含量测定要求四、实验内容1色谱条件色谱柱C18，流动相:磷酸盐缓冲溶液(pH=5.18):甲醇=95：5,流速0.18ml/min,紫外检测器,检测波长254 nm,进样10ul。

2供试品溶液与对照品溶液的制备（1）取本品20片(规格0.1g),精密称定,研细,取本品1片(约相当于维生素C100mg)，将待测样品用0.1%的草酸溶解至20ml容量瓶，定容；取上述样品1ml 于50ml的容量瓶中，用0.1%的草酸精确定容，制成每1ml含0.1mg的溶液，分析前用0.145μm滤膜过滤。

（2）维生素C对照品溶液的制备:精密称取维生素C对照品适量,加0.1%的草酸使溶解制成0.1mg/ml的标准溶液。

3 标准工作曲线的绘制精密称取对照品50.80mg置50ml量瓶中,用0.1%草酸溶液稀释至刻度,精密量取0.5ml,2.5ml,5ml,12.5ml,25ml 分别置50ml量瓶中,用0.1%草酸溶液稀释至刻度,制成维生素C标准溶液,用0.45um滤膜过滤,用微量进样器进样10ul,依次测出峰面积,然后以维生素C标准溶液质量浓度(mg/ml)作自变量,相对应的峰面积作因变量,绘制标准工作曲线,标准曲线的相关系数R=0.9999,说明曲线的线性关系良好。

·药品鉴定·2011年9月第8卷第27期高效液相色谱法测定维生素C注射液含量刘国如，刘永锁，陈振玲，王伟，丰廷宗，周毓瑾中国民用航空局民用航空医学中心（民航总医院），北京100023[摘要]目的：建立高效液相色谱法测定维生素C注射液中维生素C含量的方法。

方法：采用Phenomenexluna-NH2分析色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为磷酸二氢钾缓冲液-乙腈（1∶1，磷酸调至pH3.0）；流速：1.0ml/min；检测波长：245nm。

结果：维生素C的线性回归方程为Y=29560X-21310（r=0.9995），线性范围为5～30μg/ml，平均回收率为98.30%（n=9，RSD为2.1%）。

结论：该方法操作简便，结果准确，可用于测定维生素C注射液中维生素C的含量。

[关键词]高效液相色谱法；维生素C注射液；维生素C；含量测定[中图分类号]R917[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2011）09（c）-050-02 DeterminationofVitaminCInjectionbyHPLCLIUGuoru,LIUYongsuo,CHENZhenling,WANGWei,FENGTingzong,ZHOUYujin CivilAviationMedicineCentre(CivilAviationGeneralHospital),CAAC,Beijing100023,Ch ina[Abstract]Objective:TodevelopaquantitativemethodforthedeterminationofVitaminCinVi taminCInjection.Methods:Phenomenexluna-NH2column(4.6mm×250mm,5μm)wasusedaschromatographiccolumn,amixtureofaceton itrileanddibasicpotassiumphosphatebuffersolution(1∶1,v/v)wasusedasmobilephase,whi chwasadjustedtopH3.0byphosphoricacid,andthedetectionwavelengthwasat245nmwithafl owrateof1.0ml/min.Results:TheregressionequationwasY=29560X-21310(r=0.9995),whichwaslinearoverarangefrom5μg/mlto30μg/ml.Theaveragerecovery was98.30%(n=9,RSD=2.1%).Conclusion:Thismethodissensitive,rapidandaccurate,whic hiscanbeusedfordeterminationofVitaminCinVitaminCInjection.[Keywords]HPLC;Vita minCInjection;VitaminC;Determination维生素C在临床上不仅用于心血管系统、消化系统疾病的辅助治疗，而且在眼科、口腔科和外科系统疾病的药物治疗中也十分常用[1]。

维生素C含量的测定(高效液相色谱法)1．原理试样中的抗坏血酸用溶解超声提取后，以离子对试剂为流淌相，经反相色谱柱分别，其中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸挺直用配有紫外检测器的液相色谱仪(波长245nm)测定；试样中的L(+)-脱氢抗坏血酸经L-半胱氨酸溶液举行还原后，用紫外检测器(波长245nm)测定L(+)-抗坏血酸总量，或减去原样品中测得的L(+)-抗坏血酸含量而获得L(+)-脱氢抗坏血酸的含量。

以色谱峰的保留时光定性，外标法定量。

2．试剂与设备 (1)试剂偏磷酸(HPO3)n：含量(以HPO3计)≥38% ,(Na3PO4·12H2O),(KH2PO4) ,(H3PO4) ; 85%, (C3H7NO2S)：优级纯，(C19H42BrN)：色谱纯，(CH3OH)：色谱纯。

(2)试剂配制偏磷酸溶液(200g/L)：称取2008(精确至0.1g)偏磷酸，溶于水并稀释至1L，此溶液于4℃的环境下可保存一个月；偏磷酸溶液(20g/L)：量取50mL 200g/L偏磷酸溶液，用水稀释至500mL; 溶液(100g/L)：称取100g(精确至0.1g)，溶于水并稀释至1L, 溶液(40g/L)：称取4g ，溶于水并稀释至100mL，临用时配制。

(3)标准品L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6)：纯度≥99%, D(+)-抗坏血酸(异抗坏血酸)标准品(C6H8O6)：纯度≥99%。

(4)标准溶液配制L(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL)：精确称取L(+)-抗坏血酸标准品0.0lg(精确至0.01mg)，用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。

该贮备液在2～8℃避光条件下可保存一周。

D(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL )：精确称取D(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至0.01mg)，用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。

该贮备液在2～8℃避光条件下可保存一周。

高效液相色谱法测定维生素C片的含量
王蕊;姜丽;袁航;孙学志;曹阳
【期刊名称】《黑龙江医药》
【年(卷),期】2010(23)6
【摘要】目的:文章建立了高效液相色谱测定维生素C片含量的方法.方法:采用0.1%的草酸作为溶剂,色谱中采用phenomenex-C18色谱柱,流动相:磷酸盐缓冲溶液(pH=5.8):甲醇=95∶5.流速0.8ml/min,紫外检测器,检测波长254 nm.结果:维生
素C在0.01-0.5mg/ml内有良好的线性关系,线性回归方程为y=4E+06x+15508,相关系数为R2＝0.9998,方法平均回收率为99.71%,相对标准偏差小于2%.结论:
本文测定方法简便,快速,能准确测定维生素C片的含量.
【总页数】2页(P876-877)
【作者】王蕊;姜丽;袁航;孙学志;曹阳
【作者单位】黑龙江省大庆市药品检验所;吉林市精神病医院
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定维生素C片中Vc含量 [J], 陈再洁;郑建明;王智
2.HPLC法测定维生素C片含量 [J], 蒋江云
3.紫外分光光度法测定维生素C片中维生素C含量 [J], 王少敏
4.紫外分光光度法测定维生素C片含量结果的不确定度评定 [J], 李婷婷;邓晶晶;尤
思路
5.荧光猝灭法测定维生素C片和果汁饮料中抗坏血酸的含量 [J], 张爱菊;张小林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

植物组织中维生素c含量的测定植物组织中维生素C含量的测定一直是营养学和食品科学领域中的一个重要研究方向。

维生素C是一种重要的抗氧化营养物质，具有很强的抗氧化和免疫调节作用。

研究植物组织中维生素C含量不仅可以探索植物饮食对人体健康的影响，还可以为食品加工工业提供有关食品营养价值的参考。

本文将介绍几种常用的测定植物组织中维生素C 含量的方法，希望对相关研究和实践有所指导。

一、二酮基还原法：这是目前最常用的测定植物组织中维生素C含量的方法。

该方法利用维生素C在还原剂作用下能与二酮生成相应的还原产物的特性，通过测定还原产物的吸光度来计算维生素C的含量。

该方法操作简单、准确度高，广泛应用于各种植物材料的维生素C含量测定中。

二、分光光度法：分光光度法是一种常见的测定维生素C含量的方法。

该方法利用维生素C在特定波长下的吸收特性，通过比较样品和标准溶液的吸光度来计算维生素C的含量。

该方法操作简便、灵敏度较高，适用于各种植物材料中维生素C含量的测定。

三、高效液相色谱法：高效液相色谱法是一种精确测定维生素C含量的方法。

该方法利用高效液相色谱仪对样品中维生素C进行分离和定量分析，其分析结果准确度高、灵敏度好。

该方法对于分析含有大量维生素C的植物组织尤为适用，但相对而言操作比较复杂。

四、比色法：比色法是一种常用的测定植物组织中维生素C含量的方法。

该方法利用维生素C与某些化学试剂反应生成有色产物，通过测定产生的有色物质的吸光度来计算维生素C的含量。

该方法操作简单、快捷，并且适用于大规模样品测定。

综上所述，测定植物组织中维生素C含量是一项重要的研究课题。

从本文介绍的几种方法来看，不同的测定方法在操作步骤、准确性和适用范围等方面存在差异。

在实践中，应根据具体需要选择合适的方法进行维生素C含量的测定。

将来的研究中，还可以探索更加先进、高效的测定方法，为植物饮食和食品加工提供更加准确和全面的营养参考。

实训项目十七高效液相色谱法测定食品中的维生素 C一、实验目的（1）掌握高效液相色谱法测定维生素C的方法。

（2）熟悉蔬菜或水果中维生素C的提取方法。

二、实验原理维生素C （分子式：G6H806）,极易溶于水，水溶液显酸性，具有较强的还原性，不稳定。

见光易氧化，氧化产物为脱氢型维生素C,并进一步水解成2, 3-二酮古洛糖酸。

样品经偏磷酸-乙酸提取，经高效液相色谱分离，测定波长266 nm,在相同的实验条件下，将不同浓度的维生素C标准溶液也注入色谱系统，分别测定样品和标准溶液中维生素C色谱峰的保留时间和峰面积，进行定性和定量分析。

三、主要仪器和试剂1•仪器高效液相色谱仪（附紫外检测器）；C i8色谱往（4. 6 mmx250 mm，5叩）；超声波清洗器；25卩m微量进样器；微孔过滤器及0.45卩:微孔滤膜滤膜（水系和有机系）；10~200卩L精密移液器；定量滤纸。

2•试剂偏磷酸一乙酸液；0.15 mol/L硫酸；偏磷酸一乙酸一硫酸液；0.04%百里酚蓝指示剂；0.02 mol/LpH5.6磷酸二氢钾缓冲盐溶液；甲醇（色谱纯）。

四、操作步骤1.色谱条件流动相：甲醇：0.01 mol/L pH5.6磷酸缓冲溶液（40: 60）（此比例可根据所使用的色谱柱性能进行适当调节），使用前过滤和超声波脱器；流速1.0mL/min ；检测波长：266nm。

2.试剂配制①偏磷酸曲酸溶液：称取15g偏磷酸，加入40 mL冰醋酸及250 mL水，加热搅拌，冷却后用水定容至500 mL。

②0. 15 mol/L硫酸：取10 mL硫酸，小心加入水中并不断搅拌，再加水稀释至1200 mL。

③ 偏磷酸 闿酸-硫酸液：以0.15 mol/L 硫酸为溶剂，其余同①配制。

④ 0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取 0.1 g 百里酚蓝，加0.02 mol/L 氢氧化钠溶 液约10 mL ，在研钵中研磨至溶解，用水稀释至 250 mL 。

⑤ 维生素C 标准溶液的配制：准确称取维生素 C10 mg ，加少量偏磷酸一乙酸一 硫酸液溶解，用棕色容量瓶定容至100 mL ，即得0.1 mg/mL 的维生素C 标准储 备液，4 C 贮存。