演示版总黄酮的提取方法.doc

举例说明黄酮的提取分离方法组长：宁组员：翟雪王璐璐子涵子惠罗春雨红成1.提取方法1.1热水提取法热水提取法一般仅限于提取苷类. 在提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间与煎煮次数等因素. 此工艺成本低、安全,适合于工业化大生产。

以水做溶剂,同时提高浸提温度、延长浸提时间和增加液料比(60倍) ,可以明显提高芦丁的产率。

实例桑叶：采用热水提取法测定桑叶中各有效成分含量，发现黄酮类化合物含量为1%以上,其中霜后桑叶黄酮类化合物含量最高为1.54% ,其次是晚秋桑叶,春季桑芽和后期桑叶含量最低。

甘草：过去甘草黄酮的提取主要为水提法,其主要原理通过甘草粉与水按一定配比,加热混合至80～95 ℃浸提甘草粉,利用甘草黄酮的水溶性进而提取甘草黄酮。

此法虽然要求设备简单,但因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点,现已不常使用。

1.2有机溶剂萃取法其原理是利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同的溶剂萃取。

常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,一般采取乙醇为提取溶剂。

高浓度的乙醇(如90 %～95 %) 适于提取苷元,浓度60 %左右的乙醇适于提取苷类。

提取次数一般为2～4 次,提取方法有热回流提取和冷浸提取两种方式。

实例桑叶：使用乙醇提取桑叶中总黄酮的最正确工艺条件为：乙醇的浓度为70%，料液比为1:15，在80℃的条件下浸泡3h。

使用多种有机溶剂提取发现桑叶中黄酮类化合物的最正确提取溶剂是60%丙酮。

西芹：使用无水乙醇为提取剂，按西芹鲜重与提取剂的比例(W/ V) 1∶2 ,在80 ℃下回流提取2～4h ,制备西芹总黄酮。

银杏叶：从银杏叶中提取总黄酮时, 随乙醇浓度的增加总黄酮提取率逐渐上升, 当乙醇浓度增至70% 时提取率最高, 之后反而下降, 应选用70% 的乙醇作浸提剂最正确。

生：生黄酮提取用40倍原料的90%甲醇溶液, 在60 ~ 65℃条件下提取4 h 为其优化组合, 而其试验组合中以用40倍原料的75%甲醇溶液,在60~ 65 ℃条件下提取2 h的提取效果最好。

总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。

这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单3、超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。

原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。

超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。

4、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。

可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。

目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。

但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。

超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。

但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。

5、酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。

总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、2。

1 微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂［1］.这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单3、2。

2 超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质,是目前比较新的方法。

原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。

超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热,同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。

4、2。

3 超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上,兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。

可做超临界流体的物质很多,一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。

目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点.但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15］。

超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16］。

但它所需要的设备规模较大,技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产.5、 2.4 酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性,破坏细胞壁,使其中的黄酮类化合物释放出来。

总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、2、1 微波提取法微波提取就是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异,使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热,从而使被提取物质从基体或体系中分离,进入介电常数较小,微波吸收能力相对差的提取剂[1]。

这种方法的优点就是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单[2]。

2、2 超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质,就是目前比较新的方法。

原理就是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取,另外,还利用其次效应,如机械振动、扩散、击碎等,使其加速被提取成分的扩散、释放。

超声波提取法具有设备简单,操作方便,提取时间短,产率高,无需加热,同时有利于保护热不稳定成分,省时,节能,提取率高的优点。

2、3 超临界流体萃取法超临界流体萃取技术就是利用超临界流体处于临界温度与临界压力以上,兼有气体与液体的双重特点,对物质具有良好的溶解能力,从而作溶剂进行萃取分离。

可做超临界流体的物质很多,一般为低分子量的化合物,如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。

目前多采用CO2 做萃取剂,因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。

但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力,对大多数极性较强的组分则不起作用,因此,在其中加入夹带剂,通过影响溶剂的密度与溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度与选择性[15]。

超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点:过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。

但它所需要的设备规模较大,技术要求高,投资大,安全操作要求高,难以用于较大规模的生产。

黄酮的提取三种方法黄酮的提取三种方法辣木叶中黄酮的提取具体操作流程1.1材料与试剂辣木叶，老师提供；芦丁标准品、分析纯无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝，氢氧化钠等。

1.2仪器与设备kq-300de型数控超声波清洗器；电子分析天平；anketdl-5-a离心机；紫外/可见分光光度计。

1.3辣木叶总黄酮的抽取方法取干燥的辣木叶，粉碎过40目筛。

准确称取辣木叶粉1.0g，置于100ml烧杯中，加入体积分数为80%的乙醇溶液超声提取，提取液离心分离，测定总黄酮的含量。

具体操作流程：辣木叶→潮湿→磨粉→过40目筛→超音波抽取→Vergt→上清液→测量总黄酮含量。

1.4总黄酮的测定方法1.4.1芦丁标准曲线的绘制精确称取潮湿至恒重的芦丁标准品20mg，用体积分数为80%的乙醇溶液熔化，定容至25ml，酿制获得质量浓度为0.80mg/ml的芦丁标准溶液。

精确汲取崭新酿制的芦丁标准溶液0、125、250、500、625、750、1500μl于10ml的比色管中，重新加入体积分数80%的乙醇溶液至9ml，重新加入5%的na-no2溶液300μl，容器，置放6min。

重新加入10%的al（no3）3溶液300μl，容器，置放6min，再重新加入1mol/l的naoh溶液500μl，容器，静置10～15min。

以80%的乙醇溶液为试剂空白作参比液，于510nm波长处测量吸光值。

以芦丁浓度（mg/ml）为横坐标，喷光度值a为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程y=ax-b，r2=x，得线性关系。

1.4.2辣木叶总黄酮含量的测定精确汲取适度辣木叶黄酮提取液，按照芦丁标准曲线制作方法测量喷光度。

由喷光度根据回归方程排序出来原提取液中总黄酮的质量浓度（c），测量获得辣木提取液体积（v），然后排序出来辣木叶中总黄酮的抽取率为。

辣木叶中总黄酮抽取率为（以芦丁计）%=c×vm×100其中：c为样液经喷光度求出的原提取液中总黄酮的质量浓度（g/ml）；v为提取液的总体积（ml）；m为称取的辣木叶粉质量（mg）。

预览：总黄的酮取提法方1、熔剂法热水取提、碱性水或碱法稀性醇提法取有、机溶提取法剂2、2. 1波提取法微微波提是取用利不同结的构物质在微波场中吸收微能波的力差，使基异体质中物某的区些或提域取系体中的某组分被选择些性热，加而从被提取物质从基使或体系体分中离进入，介常电较数小，波吸收能力微对差的相提剂[取]。

1种这法方的优是对点取物提有较具高选择的性、取提高、率取提度速快溶剂、量用少、全安节、、能设简单[2备]。

2. 2声波提取法超用超波声取提提取黄法类物酮，是目前质比较新方法的。

原是利用理超声波液在体的中空化作用加植物有速效分成浸的出提取另外，，还用其利次效，应如械机动振扩散、、击等碎，使加其被速取成分的提扩散释放。

超、波声提取具法设备有单简操，作方便提，取时短间，率产，高需无加热，时有同于保护利不稳热成定，省分，节能时提，取率的高点。

优2. 3临界流体萃取超法超临流界体萃取技术是利超临界流体处于临界用温和临度界力压以，上兼有气和体体的双重液特点对，物具质有良的好溶解力能从而，溶作进剂萃取行离分可做。

临界超体流物的质多，一般为很分低量子化合物的，如OC2、CH26NH3、、N2 O等目前。

多用采O2C做萃剂，因取为具它有度大密溶解、能力强、临压界力适中临界温度、近接常温不、响萃影物的取生理活性无毒无、、化味学质性定、稳产过程中生容回收、易无环污染境、格便价宜一等系列点优但单一。

的CO作2取剂只萃对低极、性脂亲化合物有性较强的解能溶力对，多数大极性强的较分组则起不用作，此，在其中因加夹入剂，通过带响溶影剂密度和溶质的夹带与剂子间分的用作来力影溶响质在二化氧流体碳的溶中度和解选择[性5]。

1超界临流萃体取术有技许多传分离统术不技可比的拟点优过程容易：控、制达到平衡的间时、短取萃效高率、无有机剂溶残留、对热性敏物不质破坏易[等1]。

6但它所需的设要备规模大较技，术要高求，资大投安全操作，要高，求以难于用较大规模生的。

PART B 生物分离工程实验实验十四植物材料中总黄酮分离提取及鉴定--超声波提取植物总黄酮及其鉴别一、实验目的为充分利用天然植物资源，避免资源的浪费，探讨植物总黄酮的提取及鉴别方法。

二、实验原理采用超声波乙醇浸提法从植物材料（银杏叶或菊花）中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。

利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响。

三、实验材料原料：银杏叶、菊花或其它含黄酮化合物的植物材料，如新鲜芹菜买自市农贸市场。

试剂：95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）四、实验仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40kHz、宁波新芝超声仪器有限公司）；UV 755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHB III循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。

五、实验步骤（一）总黄酮成分提取取新鲜芹菜叶或干燥植物材料，烘干后粉碎。

称取粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取0.5 h或不同时间，抽滤。

滤渣再加80 ml 95 %乙醇，再次超声波提取0.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5～7 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。

（二）定量实验-总黄酮的含量测定以芦丁为对照品测定植物材料中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

1. 波长的选择取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。

总黄酮的提取方法总黄酮是一类在植物中广泛存在的生物活性物质，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌等多种生物活性。

总黄酮的提取方法主要分为常规提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、超临界流体提取法等。

下面将详细介绍这些方法的原理和操作步骤。

1. 常规提取法：常规提取法是最常用的总黄酮提取方法之一。

该方法的原理是将植物样品与某种适合的溶剂进行浸提，溶剂中的总黄酮溶解出来，然后通过过滤和浓缩得到黄酮提取物。

操作步骤：(1) 将研磨后的植物样品与适量的溶剂加入烧瓶中，一般常用的溶剂有乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。

(2) 将烧瓶放入提取装置中，加热浸提，提取时间一般为1-3小时，提取温度根据溶解度可在25-60之间选择。

(3) 提取结束后，使用滤纸、膜过滤或离心等方式分离固液，将液相收集到锥形瓶中。

(4) 将液相进行浓缩，可采用旋转蒸发、真空浓缩或减压浓缩等方法。

(5) 最后得到的黄酮提取物可在低温下保存或进行进一步的分离和纯化。

2. 超声波辅助提取法：超声波辅助提取法是在常规提取法的基础上结合超声波技术进行提取。

超声波的作用可以通过物理振荡和微压力变化，促使溶剂渗透进入植物细胞中，增加提取效率。

操作步骤：(1) 将样品与适量的溶剂放入超声波提取仪中，超声波输出频率一般在20-100 kHz之间。

(2) 开始超声波处理，提取时间一般较短，通常为10-30分钟。

(3) 提取完成后，进行过滤和浓缩等步骤，得到黄酮提取物。

3. 微波辅助提取法：微波辅助提取法是一种利用微波辐射能量加热样品，从而促进溶质的溶解和渗透的方法。

操作步骤：(1) 将植物样品与适量的溶剂放入微波辅助提取系统中。

(2) 设置合适的微波功率和时间，一般微波功率选取在200-1000 W之间，时间一般为5-20分钟。

(3) 提取完成后，进行过滤和浓缩等步骤，得到黄酮提取物。

4. 超临界流体提取法：超临界流体提取法是在超临界温度和压力条件下利用超临界流体作为溶剂进行提取的方法。

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总黄酮的提取方法
总黄酮是一种天然活性物质，广泛存在于植物中，常用于药物和保健品的制备。

目前常见的总黄酮提取方法包括以下几种：
1. 溶剂提取法：将原料粉碎后，使用有机溶剂（如乙醇、丙酮、乙酸乙酯等）进行浸提，振荡或浸泡一段时间，然后过滤、蒸发溶剂，得到纯化的总黄酮。

2. 超声波提取法：将原料与溶剂混合，通过超声波振荡破碎细胞壁，促进活性成分的释放，并加速提取过程。

该方法具有提取效率高、时间短等优点。

3. 超临界流体提取法：使用超临界流体（如二氧化碳）作为溶剂进行提取，利用其高渗透性和脱溶性能，能够高效提取总黄酮，并且溶剂易回收。

4. 水煎膏提取法：将原料与适量的水一起煎煮一段时间，提取活性物质。

该方法适用于一些水溶性总黄酮的提取。

5. 微波辅助提取法：将原料与溶剂混合，置于微波辐射区域，利用微波加热和共振效应，提高提取速度和效率。

6. 酶法提取：使用适当的酶（如纤维素酶、葡萄糖苷酶等）对原料进行酶解处理，使得总黄酮释放。

该方法能够提高总黄酮的提取率和纯度。

需要根据具体的实际情况选择合适的提取方法，因为不同的原料和需求可能对提取方法有不同的要求。

同时，提取方法的参数（如温度、时间、溶剂比例等）也需要进行优化，以提高提取效果。

银杏叶中总黄酮的提取
1 银杏叶中总黄酮的提取
银杏叶是以银杏树(Ginkgo biloba L.)叶片为原料，是世界上著名的汉药，具有活血、散瘀、抗氧化和神经保护等功效。

其中，总黄酮是其最重要的活性成分之一，具有明显的保护神经及消除氧自由基的功效。

因此，总黄酮的提取技术对于银杏叶药材活性成分的研究具有重要意义。

2 材料与方法
银杏叶样品（湖南洞庭湖产）500克，70%乙醇(200mL)，6次甲醇-水混合溶剂，1次甲醇提取。

多相混合物高效液相色谱法，仪器模式为Agilent1220树脂柱（AgilentC18(250mm×4.6mm，5μm)），流动相为缓冲溶液：锂溶液50mmol/L，流速A=0.2mL/min，B=0.2mL/min;从低比重A=0%，到高比重B=25%，线性升温时间15min。

常规参数为254nm检测器，测定波长320nm处的量值;样品灌注量20μL。

3 结果
提取中，银杏叶中总黄酮的提取量为2.37g，其含量约为0.47%。

除此之外，还检测到银杏叶中其他成分，其中主要成分为黄酮类化合物RG3、G4。

4 结论
通过对银杏叶中总黄酮的提取，证明了多相混合物高效液相色谱法是一个实用的提取技术，能够在银杏叶中有效提取总黄酮。

这种技术无论在提取效率，还是提取纯度方面，都获得较高的效果。