高效液相色谱法测定鸡肉中磺胺类药物研究

２００８年（第２９卷）第１期　综合版河南畜牧兽医　然可以测定，但耗时长且灵敏度不高，实验重复性较差，因　此应用得并不多。　曾桂雄等用金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２６００３作检定菌，　在牛心液配方培养基（ｐｒｉ值为５．０）中检测血浆中多西环素　浓度，结果在０．１６～１０．００ｍｇ／Ｌ的范围内的对数剂量与抑　菌圈的直径呈现良好线性关系，ｒ＝０．９９８５，最低检测限为　０．１６　ｍｇ／Ｌ，可用于多西环素药代动力学和生物利用度的研　究。Ａ．Ｍｏｎｔｅｒｏ等报道用微生物法进行羊奶中的抗生素残　留检测，测得多西环素的检测限为２６０　ｋｇ。　４酶联免疫法　酶联免疫法具有灵敏度较高、特异性强、操作简便省　时等优势，适用于大量样品的筛选分析。叶妮等建立了猪、　牛、鱼组织中四环素、土霉素、金霉素和多西环素４种药物　残留的酶联免疫检测方法，该方法在猪、牛、鱼组织中的检　测限均低于１３￣ｇ／ｋｇ，４种四环素类药物最高残留限量浓　度添加回收率范围为４７．５％－１１９－４％，批内、批间变异系在　２５％以内，检测各种组织中四环素类药物的临界值分别　为：猪肉４９．２　ｇ／／ｋｇ、猪肝１３８．７　ｇ／／ｋｇ、牛肉５２．１　ｐ￣ｇ／ｋｇ、　牛肝１２４．４　ｐ￣ｇ／ｋｇ、鱼肉４４．１　ｇ／／ｋｇ。张子群等应用酶联免　疫技术检测动物源性食品中四环素类抗生素残留情况，以　◆　ＴＭＢ—Ｈ２０２为底物，测量在４５０　ｎｍ波长的吸光值，多西环　素在牛奶、肉类、内脏、蜂类产品的检测限分别为３０　ｇ／　ｋｇ、６０　ｇ／ｋｇ、１２０　ｐ￣ｇ／ｋｇ、３００　ｇ，该方法达到目前国际　上四环素类抗生素残留量检测的要求。　５其他方法　目前Ｆｕｎｉａｎ　Ｚｈａｏ等用液相色谱电泳联用法来检测羊　奶中四环素类药物的含量，测得土霉素、四环素、氯四环　素、美他环素、多西环素的检测限分别为ｌ２．５　ｎｓ／ｍｌ、２０　ｎｇ／ｍｌ、２５　ｎｇ／ｍｌ、１０　ｎｇ／ｍｌ、２５　ｎｇ／ｍｌ。该方法可靠、灵敏、经　济，可用于羊奶中四环素类药物的残留检测。除此之外还　有气相色谱法、毛细管电泳法、荧光法、分光光度法等。　６结语　上述方法对检测多西环素均显示较好的效果。薄层色　谱法适用于基层检测机构；高效液相色谱法以其操作简　便、快速、准确等特点广泛应用于药物的残留检测，是目前　普遍使用的方法之一。相信随着人们对多西环素研究的不　断深入和分析仪器及检测技术的不断发展，多西环素的残　留检测会有更多更新的手段，达到更好的检测效果。　参考文献：（略）　（收稿日期：２００７—１２—０１）　应用高效液相色谱法　同时测定禽肉中的三种磺胺类药物　宋鹏　（南阳市卧龙区疾病预防控制中心，河南南阳４７３０００）　中图分类号：￥８５１．３４＋＇７　文献标识码：Ｂ　磺胺类药物作为广谱抗菌药物在动物疾病的预防与　治疗、饲料添加剂以及食品保鲜中广泛使用。而磺胺类药　物的残留不仅能破坏人类的造血系统，引起溶血性贫血　症、粒细胞缺乏症、血小板减少症等疾病。而且可引起过敏　反应，轻者可引起皮肤瘙痒和荨麻疹，重者引起血管水肿，　甚至导致死亡。为了摸索此类药物的测定，笔者用高效液　相色谱法同时测定禽肉中的磺胺一６一甲氧嘧啶、磺胺甲基　嘧啶、磺胺二甲基嘧啶。样品经二氯甲烷提取、浓缩、溶解，　用高效液相色谱法、紫外检测法测定。　ｌ材料与方法　１．１　仪器　Ａｇｉｌｅｎｔ　１　１００高效液相色谱仪（美国安捷伦公　司生产）、７５２型紫外光栅分光光度计、旋涡混合器、恒温　水浴锅、匀质器。　１．２试剂　乙腈（色谱纯）、优级纯二氯甲烷、氯仿、正己　烷、无水硫酸钠、乙酸。所用水均为超纯水。　１－３药物标准溶液分别准确称取０．１０００　ｇ磺胺一６一甲　氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶，用乙腈定容至　１００ｍｌ，三种磺胺的浓度均为ｌ　ｍｇ／ｍｌ，临用时用乙腈稀释　到１０　Ｃｇ／ｍｌ，用滤膜（０．４５　ｔｘｍ）过滤后备用。　１．４色谱条件检测器：紫外检测器；监测波长：２８５　ｎｍ；　色谱柱：ＳＢ—Ｃ１８（１５０ｍｉｎｘ４．６ｍｍ，粒度５　ｔｘｍ）；流动相：乙　・３２・　文章编号：１００４—５０９０（２００８）０１—００３２—０２　腈和１％乙酸水溶液（２０：８０）；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；柱温：４０￣２；　进样量：１０　ｌ。　１．５样品处理取禽肉的可食部分，用匀浆机匀浆。准确　称取１０．０００　ｇ样品于５０　ｍｌ具塞比色管中，加入２０　ＩＩｌｌ二　氯甲烷，在旋涡混合器上混合２　ｒａｉｎ。用无水硫酸钠层析柱　过滤于蒸发皿内，置于水浴锅上４０℃蒸发至干，加入２　ｍｌ１．０％乙酸溶液溶解残渣，倒于５　ＩＩｌｌ比色管中，蒸发皿用　正己烷２　ｍｌ将残渣洗入比色管中，在旋涡混合器上混匀１　ｒａｉｎ，静置分层后，用吸管吸弃上层正己烷层。重复三次处　理，处理液用０．４５　ｍ滤膜过滤后备用。　１．６测定准确移取混合标准使用液（１０　ｔ￣ｇ／ｍ１）０．００ｍｌ，　０．２５ｍｌ，０．５０ｍｌ，１．００ｍｌ，１．５０ｍｌ，２．５０ｍｌ，５．Ｏ０ｍｌ，用乙腈　定容至１０　ｍｌ，此标准系列含三种磺胺分别为０．００　ｔ￣ｓ／ｍｌ，　０．２５　ｇ／ｍ１，０．５０　ｇ／ｍ１，１．００　ｔｗ，／ｍｌ，１．５０￣ｓ／ｍｌ，２．５０．１曷／　ｍｌ，５．００　ｔ￣ｇ／ｍｌ。进样量ｌ０　ｌ。以药物浓度为横坐标，峰面　积为纵坐标制标准曲线。　２结果　２．１　试验条件的选择本方法选用乙腈和１％乙酸溶液　为流动相结果良好；用７５２型紫外光栅分光光度计对混合　标准溶液扫描。在２８５　ｔｉｍ处有最大吸收。故选择２８５　ｎｒｎ　

磺胺类药物抗菌机制

磺胺类药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物，那么磺胺类药物抗菌机制是什么呢?下面是店铺为你整理的磺胺类药物抗菌机制的相关内容，希望对你有用!

磺胺类药物抗菌机制

细菌不能直接利用其生长环境中的叶酸，而是利用环境中的对氨苯甲酸(PABA)和二氢喋啶、谷氨酸在菌体内的二氢叶酸合成酶催化下合成二氢叶酸。二氢叶酸在二氢叶酸还原酶的作用下形成四氢叶酸，四氢叶酸作为一碳单位转移酶的辅酶，参与核酸前体物(嘌呤、嘧啶)的合成(图2)。而核酸是细菌生长繁殖所必须的成分。磺胺药的化学结构与PABA类似，能与PABA竞争二氢叶酸合成酶，影响了二氢叶酸的合成，因而使细菌生长和繁殖受到抑制。由于磺胺药只能抑菌而无杀菌作用，所以消除体内病原菌最终需依靠机体的防御能力。为了保证磺胺药在竞争中占优势，在临床用药时应注意：①用量充足，首次剂量必须加倍，使血中磺胺的浓度大大超过PABA的量。②脓液和坏死组织中含有大量PABA，应洗创后再用药。③应避免与体内能分解出PABA的药合用，如普鲁卡因。

磺胺类药物的检测方法

高效液相色谱

高效液相色谱在动物性食品中磺胺类药物残留的国家标准方法在食品检测和进出口检验检疫中广泛应用。应用高效液相色谱检测磺胺类残留样品前处理多采用液液萃取的方法，操作比较繁琐。张素霞等(1999)以基质固相分散(MSPD)和高效液相色谱为基础，建立了猪肌肉组织中磺胺类药物多残留快速分析法。将肌肉组织与适量填料混合研磨，制成半固态装柱，磺胺类药物经二氯甲烷洗脱后直接用反相高效液相色谱测定，使样品前处理过程简单化。研究者又对固相萃取的方法做了改进,制成固相萃取小柱来替代了上述方法。Naoto(2003)用高效液相色谱法同时检测3种磺胺(SMM、SDM、SQ)在鸡蛋和猪肉中的残留，此方法大大缩短了样品前处理时间。

薄层色谱

薄层色谱(TLC)󰀁薄层色谱最早主要应用于药物制品的检测,自1979年Armstrong等开创胶束薄层色谱以来,由于其特殊的选择性,无毒、价廉等优点而获得较大发展。后来逐渐被应用于动物性食品的药物残留检测。美国农业部食品安全局曾用荧光胺衍生的薄层色谱(TCL)作为磺胺类药物残留的筛选方法。Gerry等(1991)用薄层色谱法检测沙丁鱼中5种磺胺类药物残留,5种磺胺类药物最低检测限量SDZ、SMTZ、SDMX和SP为0.04mg/kg,SMRZ为0.10mg/kg。

随着人们生活水平的日益提高袁人们对动物性食品的卫生质量与安全的要求也越来越高袁不仅对营养与味道要求高袁还要求食品卫生且经济遥一方面袁兽药渊其中包括添加剂冤除保障动物健康生长以外袁还可以降低动物发病率以及死亡率袁同时提高饲料的利用率袁促进动物的生长发育并改善动物产品的品质曰但是另一方面袁兽药的使用又会导致动物性食品中含有兽药残留袁这种残留会给人体的健康带来不可逆转的危害遥因此袁兽药残留问题也日益受到了世界各国的重视遥磺胺类药物渊Sulfonamides袁SAs冤是一种化学合成抗生素袁其基本母核是对氨基苯磺酰胺袁是具有这一类共同母核的药物总称[1]遥随着经济的日益增长袁供过于求的市场现状促进了现代农业的集约化尧规模化以及标准化发展袁这使得兽药特别是磺胺类药物在水产品养殖等行业的使用量大大加大遥而在我国袁限用药物尧非法药物滥用现象屡见不鲜袁这引发了我国食品安全事件频发的严重后果[2]遥因此袁研究动物性兽药残留的检测方法变得尤为重要袁我国也在继续改进相关方面的技术检测袁以防止重大食品安全事故的发生遥因此袁对SAs的化学性质尧作用机理及其残留与检测方法的研究是关系到畜牧业健康发展的重要问题之一[3]遥本文应用高效液相色谱法袁对鸡蛋全蛋中磺胺嘧啶渊SD冤尧磺胺二甲嘧啶渊SM2冤尧磺胺甲氧嗪渊SMP冤尧磺胺间甲氧嘧啶渊SMM冤尧磺胺甲噁唑渊SMZ冤尧磺胺地索辛渊SDM冤和磺胺喹噁啉渊SQ冤7种SAs的前处理及仪器检测条件进行了研究遥1材料与方法1.1仪器与试剂Agilent高效液相色谱仪渊HPLC-DAD冤曰多功能超纯水系统渊S20袁Spring冤曰旋转蒸发仪渊含真空泵袁IKA-RV10袁IKA冤曰台式冷冻高速离心机渊A2316R袁上海安戈仪器有限公司冤曰固相萃取装置渊天津奥特赛思仪器有限公司冤曰多功能超纯水系统渊Spring-S20袁厦门锐思捷科学仪器有限公司冤曰百分之一电子天平渊CP2102袁Ohaus冤遥样品前处理采用的乙酸乙酯尧甲醇尧二氯甲烷尧无水硫酸钠尧盐酸均为分析纯袁广州化学试剂厂生产曰流动相采用的0.1%磷酸水溶液和乙腈混合液均为色谱纯袁德国默克化学试剂有限公司生产曰0.22滋m有机滤膜袁天津津腾实验室设备有限公司生产遥标准品均由农业部环境保护科研监测所生产袁浓度均为100mg/L袁使用前用甲醇将其稀释成所需浓度的混合标准溶液遥1.2试验方法1.2.1样品的提取与净化遥渊1冤取鸡蛋5.00g依0.05g于50mL离心管袁加入20mL乙酸乙酯和8g无水硫酸钠袁涡旋振荡2min渊或摇床振荡15min冤袁5000r/min冷冻离心5min袁用一次性塑料吸管取上层清液移入50mL圆底烧瓶遥鸡蛋残渣中加入20mL乙酸乙酯重复提取袁用玻璃棒搅匀结块残渣袁并用少量乙酸乙酯洗涤玻璃棒袁之后倒入离心管袁涡旋振荡2min渊或摇床振荡15min冤袁5000r/min离心5min袁合并乙酸乙酯层袁35益减压旋蒸至近干[4]遥渊2冤向圆底烧瓶中加入5.00mL流动相[0.1%磷酸水溶液颐乙腈渊V颐V=80颐20冤]袁混匀超声1min袁移入15mL离心摘要本文应用高效液相色谱法检测鸡蛋全蛋中磺胺嘧啶渊SD冤尧磺胺二甲嘧啶渊SM2冤尧磺胺甲氧嗪渊SMP冤尧磺胺间甲氧嘧啶渊SMM冤尧磺胺甲噁唑渊SMZ冤尧磺胺地索辛渊SDM冤和磺胺喹噁啉渊SQ冤7种磺胺类药物渊SAs冤袁并对提取尧净化等前处理条件以及检测条件进行优化遥结果表明袁鸡蛋样品中的磺胺类药物适宜采用乙酸乙酯进行提取袁35益减压旋蒸浓缩至近干袁经水饱和正己烷洗涤净化或碱性氧化铝SPE净化均可以除去大部分鸡蛋中的干扰物袁满足检测要求曰以0.1%磷酸颐乙腈渊V颐V=80颐20冤作为流动相袁20min内7种磺胺类药物均能达到基线分离遥本方法提取效果良好袁结果重复性及回收率满足实际检测需求袁2种净化方法使用灵活袁适合于鸡蛋中7种磺胺类药物残留量的测定遥关键词高效液相色谱法曰鸡蛋曰磺胺类药物曰残留中图分类号O657.7+2文献标识码A文章编号1007-5739渊2018冤11-0235-02DeterminationofSulfonamidesResiduesinEggsbyHPLCMAShi-zhuCHENNanLIXiao-pengZHOUJia-chengLIANGJin-tianGAOWen-binLINJun-jie渊SanxiangTownAgriculturalServiceCenterinZhongshanCityofGuangdongProvince渊InspectionandTestingStationforAgriculturalProducts冤袁ZhongshanGuangdong528463冤AbstractInthispaper袁7kindsofsulfonamides渊SAs冤袁suchaspyrimidine渊SD冤袁sulfamethazine渊SM2冤袁sulfamethoxypyridazine渊SMP冤袁sulfa-monomethoxine渊SMM冤袁sulfamethoxazole渊SMZ冤袁sulfadimethoxine渊SDM冤andsulfaquinoxaline渊SQ冤weredetectedbyHPLCmethod袁andtheextra-ctionandpurificationconditionsandtestingconditionswereoptimized.Theresultsshowedthatthesulfonamidesineggsamplesweresuitabletobeextractedbyethylacetate袁decompressedandevaporatedtodrynessat35益ing0.1%phosphoricacid颐acetonitrile渊V颐V=80颐20冤asthemobilephase袁7kindsofsulfonamideswereabletoachievethebaselineseparationin20min.Theextractioneffectwasgoodbythismethod袁andrepeatabilityandrecoveryrateoftheresultmettheactualdetectionrequirements.The2kindsofpurificationmethodswereflexibleandsuitableforthedeterminationof7kindsofsulfonamidesresiduesineggs.KeywordsHPLC曰egg曰sulfonamides曰residue高效液相色谱法测定鸡蛋中磺胺类药物残留马世柱陈楠黎小鹏周嘉诚梁锦填高文彬林俊杰渊广东省中山市三乡镇农业服务中心渊农产品检验检测站冤袁广东中山528463冤

农质发〔2014〕5号文件附件8

磺胺类药物在动物可食性组织中残留的

高效液相色谱检测方法

1 范围

本标准规定了动物组织中五种磺胺类药物（磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺喹噁啉）残留检测的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于猪肉中五种磺胺类药物残留量的测定。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

３原理

样品经乙腈提取后,在上清液中加入正己烷进行液液分配，取下层溶液浓缩,残留物用95％乙腈溶解，过碱性氧化铝小柱， 以70％乙腈溶液洗脱,加入正丙醇浓缩后，残留物用流动相溶解，高效液相色谱仪进行检测，外标法定量。

４ 试剂和材料

以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的二级水。

4.1 磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺二甲基嘧啶（SM2)、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺喹噁啉（SQ)对照品：含量均不得少于98.0% 4。2 乙腈 色谱纯

4.3 甲醇 色谱纯

4。4 正已烷

4.5 冰乙酸

4。6 正丙醇

4。7 无水硫酸钠

4.8 95 %乙腈溶液 取乙腈95 mL加水至100 mL，混匀。

4。9 70 %乙腈溶液 取乙腈70 mL加水至100 mL，混匀。

4。10 磺胺类药物标准储备液（1mg/mL）：分别准确称取适量上述五种磺胺类药物对照品,置同一棕色容量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀,配制成浓度为1mg/mL的标准储备液。—20℃以下冰箱中保存，有效期6个月。

4.2.10 磺胺类药物标准工作液（10µg/mL)：精密移取磺胺类药物标准储备液1。0 mL，置100 mL棕色容量瓶，用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。—20℃以下冰箱中保存，有效期1个月.