1.1 微生物的分离和培养 学案(含答案)

第 1 页 共 9 页 1.1 微生物的分离和培养 学案（含答案）

碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机碳源CO2.NaHCO3等；有机碳源糖类.脂肪酸.花生饼粉.石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质.核酸以及含氮的代谢产物无机氮源NH

3.铵盐.硝酸盐等；有机氮源尿素.牛肉膏.蛋白胨等生长因子特殊营养物质生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素.氨基酸.碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定培养基.大气.代谢产物等无机盐为微生物提供除碳.氮元素以外的各种重要元素，包括某些大量元素细胞内的组成成分；生理调节物质；某些化能自养菌的能源；酶的激活剂培养基.大气等环境1下列常用的无菌操作中，错误的是A无菌操作不要求杀死培养基中的一切细菌B用酒精擦拭双手的方法是对操作者进行消毒C实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行D玻璃器皿吸管.培养皿可用酒精擦拭答案D解析无菌技术是用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染，而不是杀死培养基中的一切细菌；对操作者应用较温和的方法进行消毒，如酒精擦拭；实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行，防止杂菌污染；对无菌操作用到的玻璃器皿要用干热灭菌的方法彻底消灭其中的微生物，用酒精擦拭不能达到目的。 第 2 页 共 9 页 2下列关于培养基的说法正确的是A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B培养基只有两类液体培养基和固体培养基C除水以外的无机物只能提供无机盐D无机氮源不可能提供能量答案A解析根据培养基的物理性质，可分为液体培养基.半固体培养基和固体培养基，在液体培养基中加入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固体培养基；除水以外的无机物如NH4HCO3，既可以是碳源，也可以是氮源，不仅仅提供无机盐；无机氮源有时也能提供能量，如NH3可以为硝化细菌提供能量。

方法链接培养基的种类分类标准培养基种类培养基特点作用物理性质固体培养基外观呈固态微生物的分离.计数等半固体培养基容器放倒不致流出，剧烈振动则破散观察微生物的运动.鉴定菌种等液体培养基呈液态常用于工业生产功能选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长选择.分离鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴定成分来源天然培养基化学成分还不清楚工业上大规模的微生物发酵生产合成培养基化学成分完全了解在实验室用来对微生物分析

二.大肠杆菌的接种与分离培养

二.大肠杆菌的接种与分离培养1配制牛肉膏蛋白胨培养基配制培养基调节pH分装包扎灭菌搁置斜面2斜面接种和培养大肠杆菌斜面接种大肠杆菌的主要目的有菌种转移.扩大培养和保存纯净菌种等。具体操作步骤准备接种接种环灭菌试管口灭菌挑取少许第 3 页 共 9 页 菌种划线接种培养大肠杆菌保存菌种3平板划线分离和培养大肠杆菌在实验室中，平板常常被用来培养.分离细菌等微生物。

1牛肉膏蛋白胨固体培养基的平板制作配制好的培养基装瓶加棉塞灭菌倒平板

A.打开瓶塞

B.灼烧瓶口灭菌

C.倒培养基

D.倒置平板。

2平板划线分离与培养大肠杆菌平板划线法的含义用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。

注意事项接种和划线操作时需要在酒精灯火焰附近进行。

1利用培养基培养微生物时，首先要把微生物接种到培养基上。以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例，完成下列有关问题1以下为细菌培养基的配制的流程，若将分装步骤与调节pH步骤颠倒过来是否可行配制培养基调节pH，数值为

7.2分装包扎灭菌，常用方法为高压蒸汽灭菌搁置斜面，需冷却至50左右答案不行。若分装后再调节pH，会使培养基的pH调节不均匀；还可能将培养基弄到试管口，易被污染。

2从防止杂菌污染的角度思考，平板冷凝后将平板倒置的原因是什么答案平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表第 4 页 共 9 页 面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。

2斜面接种和培养大肠杆菌1下图接种方法分别是什么答案图1是穿刺接种.图2是斜面接种.图3是平板划线接种。

2下表是关于接种操作步骤及其目的或分析说明，请完善下表。

顺序接种操作步骤分析说明或目的将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红将接种环灭菌，避免污染菌种在火焰旁冷却接种环，拔去试管棉塞避免杂菌污染菌种将试管口通过火焰灼烧灭菌，防止试管口菌体污染培养基将灭过菌的接种环伸入菌种管，先将环部接触斜面顶端使接种环冷却，避免杀死菌种抽出接种环时，带菌部分不要触及管壁或通过火焰防止菌种沾于管壁，防止菌种被杀死在培养基斜面上由底部向上轻轻划“S”型曲线，但不要将培养基表面划破初步接种。

划破培养基不利于后续的继续划线，长出的菌落不标准将试管口与试管塞通过火焰23次，迅速塞紧试管防止杂菌污染将接过种的试管，放在恒温箱37中培养24h培养细菌，观察接种和培养的结果

3.平板划线分离和培养大肠杆菌在实验室中，平板常常被用来培养.分离细菌等微生物。思考回答下列相关问题1平板划线法接种菌种时，哪些操作可防止杂菌污染答案接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧。划完一个区域后，将接种环灼烧，冷却后再第 5 页 共 9 页 划下一区域。接种环沾取菌液时，要将试管口.棉塞等通过火焰。划线时将培养皿打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内。

2在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线答案避免接种环温度太高，杀死菌种。

3为什么在操作的

第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环答案操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，是为了保证菌落是由单一的细菌繁殖而成。

4在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗为什么答案需要。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

5在做第二次划线以及其后的操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线答案划线后末端含有的细菌数目较少，每次从上一次的末端开始划线能够使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分散成单个的细菌。

6为何最后一次划线不能与第一次划线相连答案最后一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次划线相连则增加了细菌的数目，达不到纯化的效果。 第 6 页 共 9 页 3关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，不正确的是A配制固体培养基时一般要加适量的琼脂B分装到试管中的液体培养基的高度约为试管高度的2C待培养基冷却至50左右时进行搁置斜面D搁置斜面时，斜面长度不超过试管总长的2答案B解析在配制固体培养基时，琼脂是最常用的凝固剂，A项正确；分装到试管中的液体培养基的高度约为试管长度的5，B项错误；待培养基冷却至50左右时进行搁置斜面，以防培养基因温度过高而烫手，也要防止培养基因温度过低而凝固不能形成平板，C项正确；搁置斜面时，将试管口部枕在高约1cm的木条或其他合适高度的物体上，使其自然倾斜，斜面长度不超过试管总长的2，D项正确。

4在接种操作的过程中，不正确的是A要将接种环灼烧灭菌B取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌C将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位D接种后还要将管口灭菌加塞答案C解析接种环伸入试管内，先接触培养基斜面顶端或其他无菌体的培养基部位，待接种环冷却后再接触长菌部位。

5下图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为

1.

2.

3.

4.5。 第 7 页 共 9 页 下列操作方法正确的是A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B划线操作须在火焰上进行C在5区域中才可以得到所需菌落D在

1.2.3.4.5区域中划线前后都要对接种环灭菌答案D解析在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作在火焰边进行；在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。

一题多变1平板划线法所用培养基属于什么培养基答案琼脂固体培养基。

2如何确认制备的培养基是否合格答案将一个未接种的培养基同接种培养基一起培养，若未接种的培养基无菌落生长，说明制备的培养基合格，否则需要重新制备。

3如果培养基上长出的菌落相互重叠，则说明存在什么问题答案说明划线不充分，应该重新操作。

4在

第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于哪里答案接种环上的菌种直接来源于上次第一区中划线的末端。

1下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，其中甲.乙.丙依次指A安全阀.排气阀.压力表B排气阀.安全阀.压力表C安全阀.排气阀.温度表D排气阀.安全阀.温度表答案A解析根据教材P8图高压蒸汽灭菌锅结构示意图，可判断甲.乙.丙分别为安全阀.排气阀.压力表。 第 8 页 共 9 页 2在培养基的配制过程中，具有如下步骤，其正确的顺序为溶化调pH加棉塞包扎分装称量ABCD答案B解析培养基的配制顺序为称量溶化调pH分装加棉塞包扎。

3下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种C在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者答案C解析平板划线操作中，接种环挑取菌种前灼烧的目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种；划线结束仍需灼烧接种环，是为了能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者；从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。

4下列依次表示倒平板.接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，其中错误的是答案D解析倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止空气中的杂菌污染，故A项正确；接种时，左手将培养皿打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，故B项正确；划线时要从上一次划线的末端开始进行，让菌种来源于上一次划线末端，故C项正确，D项错误。 第 9 页 共 9 页 5下表所示为某微生物培养基的配方，请回答下列问题成分含量NaNO33gK2HPO41gKCl0.5gMgSO47H2O0.5gFeSO40.01gC6H12O630gH2O1000mL青霉素0.1万单位1按照物理性质，该培养基属于培养基。

2该培养基中的碳源是。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是调整pH和，倒平板时，一般需冷却至左右，在附近操作。

答案1液体2C6H12O6灭菌50酒精灯火焰解析1该培养基中没有加入琼脂，属于液体培养基。

2C6H12O6为微生物提供碳源，培养基在分装前要调整pH和灭菌，倒平板时，一般需冷却至50左右，在酒精灯火焰附近操作。