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免疫亲和净化－超高效液相色谱－串联质谱法测定食品中玉米赤霉烯酮类真菌毒素作者：宁阳阳来源：《中国食品》2021年第21期当前在玉米赤霉烯酮类的真菌毒素检测中，使用液相色谱和液相色谱-质谱的方法较多，本文则构建了一种针对食品中6种玉米赤霉烯酮类真菌毒素的免疫亲和净化-超高效液相色谱-串联质谱检测法，包括玉米赤霉酮、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮。
本检测方法的前处理工序非常简便，利用免疫亲和柱进行净化及液标法进行定量，能够同时测定6种玉米赤霉烯酮类真菌毒素。
除了谷物以外，本检测方法还能应用于肉、蛋、乳等食品的检测。
一、材料和仪器1.材料和试剂。
（1）样品：在市场购买大米、麦片、牛肉、猪肉脯、鸡蛋、牛奶等当作样品，大米和麦片研磨成粉，牛肉和猪肉脯捣碎，鸡蛋和牛奶混匀。
（2）试剂：乙腈，色谱纯;乙酸钠，分析纯;玉米赤霉酮标准品、α-玉米赤霉烯醇标准品、β-玉米赤霉醇标准品、α-玉米赤霉醇标准品、β-玉米赤霉烯醇标准品、玉米赤霉烯酮标准品;玉米赤霉烯酮类免疫亲和柱;β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯。
（3）标准储备溶液：称取10mg玉米赤霉烯酮类的各种标准品，置于10mL棕色容量瓶中，利用乙腈进行溶解后定容，制成1mg/mL的标准储备溶液，在-18℃的条件下避光保存。
（4）混合标准溶液：取100μL上述制成的各类标准储备溶液，利用乙腈定容至10mL，制作成10μg/mL的混合标准溶液，在-18℃的条件下避光保存。
2.仪器。
GM200型刀式研磨仪;ACQUITYTM超高效液相色谱-TQS质谱仪;组织捣碎机;T18均质器。
二、实验和方法1.样品处理方法。
（1）谷物。
取粉碎样品25g，添加氯化钠5g，再添加体积分数为80%的乙腈溶液100mL，搅拌提取2min，然后放于离心管（50mL）中，4000r/min离心5min。
取10mL上层提取液，加水40mL并混匀，10000r/min离心5min。
液相色谱质谱联用法测定粮食中6种真菌毒素高敬铭;范自营;张红云;高海军;刘莹;戴冠萍;彭星星;秦祎芳【摘要】为了克服现有粮食中真菌毒素检测方法存在检测时间长、效率低、成本较高的缺点,开发了一种成本相对较低,能够同时检测多种真菌毒素的方法.采用复合免疫亲和柱净化、液相色谱质谱联用同时测定粮食中黄曲霉毒素B1(AFB1)、赭曲霉毒素A(OTA)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、呕吐毒素(DON)、伏马毒素B1(FB1)、伏马毒素B2(FB2)6种真菌毒素的方法.选择V乙腈∶V乙酸∶V水=80∶1∶19和V 甲醇∶V水=80∶20的混合溶液对粮食中的真菌毒素进行两次提取,复合免疫亲和柱对提取液进行净化,去除提取液中的色素、脂类、蛋白等杂质,降低基质对毒素离子化效率的影响,用甲醇作为流动相A,0.1％甲酸和1 mmol/L乙酸铵的混合水溶液为流动相B,梯度洗脱20 min内液相色谱对6种毒素能够实现良好的分离.6种真菌毒素的线性关系良好,相关系数R2 ＞0.995;6种毒素加标回收率为75.6％～102.6％.批内相对标准偏差为3.8％～9.6％,符合《GB/T 27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测》要求.该方法定量准确、快速、灵敏度高,适用于大米、小麦等粮食中真菌毒素的测定.【期刊名称】《河南工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(039)003【总页数】5页(P83-87)【关键词】真菌毒素;液相色谱质谱联用;免疫亲和柱【作者】高敬铭;范自营;张红云;高海军;刘莹;戴冠萍;彭星星;秦祎芳【作者单位】河南省粮油饲料产品质量监督检验中心,河南郑州450000;河南省粮油饲料产品质量监督检验中心,河南郑州450000;河南省粮油饲料产品质量监督检验中心,河南郑州450000;河南省粮油饲料产品质量监督检验中心,河南郑州450000;河南省粮油饲料产品质量监督检验中心,河南郑州450000;河南省粮油饲料产品质量监督检验中心,河南郑州450000;河南省粮油饲料产品质量监督检验中心,河南郑州450000;河南省粮油饲料产品质量监督检验中心,河南郑州450000【正文语种】中文【中图分类】TS2070 引言真菌毒素是某些霉菌在生长繁殖过程中产生的二次代谢有毒产物，目前人们已经确认化学结构的真菌毒素约有400多种，这些毒素被归类为比植物毒素、合成污染物或农药残留等更重要的食源性风险因子，严重威胁人类的健康。
谷物生长过程中极易受到真菌毒素的污染，这不仅会对粮食产量造成极大影响，还可能给农业经济带来巨大损失[1，2]。
呕吐毒素是主要存在于小麦、玉米等粮食及其制品中的真菌毒素，人体食用了被呕吐毒素污染的食物后，会出现恶心、腹泻、呕吐等症状[3]。
因此，检测小麦中的呕吐毒素具有非常重要的意义。
液相色谱-串联质谱仪在食品安全检测中具有准确度较高、受基质干扰影响小等特点，现已成为检测呕吐毒素的主要方法之一[4]。
此外，为了更加准确地表达分析结果，需要引入测量不确定度（以下简称“不确定度”），其是表征合理地赋予被测量值的分散性，与测量结果相联系的参数[5，6]。
当检测结果接近临界值时，不确定度的引入能够更准确地反映真实结果[7，8]。
本实验提取全麦粉中呕吐毒素的过程免去了真菌毒素提取中常用的免疫亲和柱净化处理，提高了提取效率，节省了人工与成本；采用内标法对呕吐毒素进行测定并评定不确定度，建立了液相色谱-串联质谱内标法测定全麦粉中呕吐毒素的不确定度评定方法[9，10]。
1 材料与方法1.1 试验材料呕吐毒素（DON）标准储备液（103±1.2μg/mL），Sigma-alorich；稳定同位素13C 15-DON 标准溶液（2μg/mL），国家粮食和物资储备局科学研究院；乙腈（色谱纯）迪马科技；甲酸（质谱级），Sigma；乙酸（色谱级），Fisher；蒸馏水，屈臣氏。
1.2 仪器和设备QT RA P-5500型液相色谱串联质谱仪（配有电喷雾离子源），美国A B 公司；X 1R 型高速冷冻离心机，美国热电公司；PL 602-L 型分析天平，梅特勒-托利多（上海有限公司）；I K A 涡旋混合器，广州艾卡；Q B -212型摇摆式混匀器，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；JS F M-Ⅱ型粮食水分测试粉碎磨，中储粮成都粮食储藏科学研究所。
1.3 实验方法1.3.1 标准工作曲线的配制液相色谱-串联质谱内标法测定全麦粉中呕吐毒素含量的不确定度评定□ 王静 马晓静 河北省粮油质量检测中心摘 要：采用液相色谱-串联质谱内标法对全麦粉中呕吐毒素含量的不确定度进行评定，并依据测量不确定度评定的指导文件建立数学模型，对测量重复性、标准曲线、样品前处理、仪器设备等不确定度来源进行分析和评定，得出扩展不确定度为0.19mg/kg，（k=2）。
基金项目：浙江省自然科学基金项目（编号：ＬＧＮ１８Ｃ２０００２６）；省属高校基本科研业务费项目（编号：２１ＳＢＹＢ０８）作者简介：牛灿杰，女，浙江经贸职业技术学院工程师，硕士。
通信作者：叶素丹（１９７９—），女，浙江经贸职业技术学院教授，博士。
Ｅ ｍａｉｌ：６４９９９６０６＠ｑｑ．ｃｏｍ收稿日期：２０２２ １１ ２２ 改回日期：２０２３ ０４ １０犇犗犐：１０．１３６５２／犼．狊狆犼狓．１００３．５７８８．２０２２．８１０８７［文章编号］１００３ ５７８８（２０２３）０５ ０２０３ ０８谷物及制品中真菌毒素前处理及检测技术研究进展Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓｏｆｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓｉｎｃｅｒｅａｌｓａｎｄｃｅｒｅａｌ ｂａｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓ牛灿杰犖犐犝犆犪狀 犼犻犲 叶素丹犢犈犛狌 犱犪狀 胡玉霞犎犝犢狌 狓犻犪 周晓红犣犎犗犝犡犻犪狅 犺狅狀犵（浙江经贸职业技术学院，浙江杭州 ３１００１２）（犣犺犲犼犻犪狀犵犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犈犮狅狀狅犿犻犮犪狀犱犜狉犪犱犲，犎犪狀犵狕犺狅狌，犣犺犲犼犻犪狀犵３１００１２，犆犺犻狀犪）摘要：谷物及其制品在生产、贮藏、运输的各个环节均易受到真菌毒素的污染，且真菌毒素种类多、浓度低、毒性强、性质差异大，防治困难。
文章综述了谷物及其制品中真菌毒素的前处理技术（液液萃取技术、固相萃取技术、ＱｕＥＣｈＥＲＳ技术、免疫亲和层析技术）和检测技术（免疫层析技术、光谱技术、液相色谱技术、液质联用技术），并对真菌毒素检测技术的发展趋势进行了展望。
关键词：谷物；谷物制品；真菌毒素；前处理技术；检测技术犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｃｅｒｅａｌｓａｎｄｃｅｒｅａｌ ｂａｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓａｒｅｅａｓｉｌｙｐｏｌｌｕｔｅｄｂｙｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓｉｎａｌｌａｓｐｅｃｔｓｏｆｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｓｔｏｒａｇｅａｎｄｔｒａｎｓｐｏｒｔａｔｉｏｎ，ａｎｄｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓａｒｅｄｉｆｆｉｃｕｌｔｔｏｐｒｅｖｅｎｔｄｕｅｔｏｔｈｅｉｒｖａｒｉｅｔｙ，ｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｓｔｒｏｎｇｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｌａｒｇｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｎａｔｕｒｅ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｓｕｍｍａｒｉｚｅｓｔｈｅｎｅｗｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ｌｉｑｕｉｄ ｌｉｑｕｉｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＱｕＥＣｈＥＲＳ，ｉｍｍｕｎｏａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）ａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｏｐｔｉｃａｌｓｐｅｃｔｒｕｍｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）ｏｆｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓｉｎｃｅｒｅａｌｓａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｔｒｅｎｄｏｆｍｙｃｏｔｏｘｉｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓｗａｓａｌｓｏｐｒｏｓｐｅｃｔｅｄ．犓犲狔狑狅狉犱狊：ｃｅｒｅａｌｓ；ｃｅｒｅａｌ ｂａｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓ；ｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓ；ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ真菌毒素为曲霉菌、镰刀霉菌、青霉菌、麦角菌、链格孢霉菌等真菌产生的有毒次级代谢产物，有３００多种［１］，且大部分具有较强的生物毒性，可致癌、致畸、致突变［２］。
食品安全国家标准食品中真菌毒素限量
一、引言
食品安全是人们日常生活中最为关注的话题之一，而真菌毒素作为食品安全的重要指标之一，对人体健康具有潜在的威胁。
本文将重点探讨食品中真菌毒素的限量标准，以保障公众的饮食安全。
二、真菌毒素简介
真菌毒素是由某些霉菌产生的有毒化合物，主要存在于谷物、坚果、干果等食品中。
常见的真菌毒素包括黄曲霉毒素、赤霉酮、玉米赤霉烯醇等，它们对人体肝脏、免疫系统等器官具有潜在的危害。
三、食品中真菌毒素的限量标准
为了保障公众健康，国家制定了一系列食品安全标准，包括了食品中真菌毒素的限量标准。
根据《食品安全国家标准》，不同食品中真菌毒素的限量标准有所不同，主要包括以下几类：
1.谷物及其制品
–黄曲霉毒素B1的限量标准为：XXXμg/kg
–赤霉酮的限量标准为：XXXμg/kg
2.坚果及其制品
–赤霉酮的限量标准为：XXXμg/kg
–玉米赤霉烯醇的限量标准为：XXXμg/kg
3.干果
–黄曲霉毒素B1的限量标准为：XXXμg/kg
–玉米赤霉烯醇的限量标准为：XXXμg/kg
四、真菌毒素检测方法
为了有效监控食品中真菌毒素的含量，科学家们发展了各种检测方法，其中包括高效液相色谱法、气相色谱法、免疫吸附分析法等。
这些方法能够快速准确地检测食品中真菌毒素的含量，并保障公众的饮食安全。
五、结语
食品安全是人们健康生活的重要保障，食品中真菌毒素的限量标准是保障食品安全的关键之一。
随着科学技术的不断发展，我们相信在不久的将来，将能够更好地监控和管理食品中真菌毒素的含量，为公众提供更加安全的食品。
食品中真菌毒素的检测方法研究随着食品安全问题越来越引起人们的关注，各国的标准也越来越严格。
其中，真菌毒素是一种常见的食品危害物质。
因此，对于食品中真菌毒素的检测方法的研究也就显得十分重要。
本文就对真菌毒素的检测方法进行讨论。
一、真菌毒素简介真菌毒素是由真菌合成的，具有一定毒性的天然化合物。
在我国，农作物中最常见的真菌毒素主要有黄曲霉毒素、赤霉烯酮、玉米赤霉烯酮和致癌物质黄麴酸等。
它们都能对人体健康造成危害，如引起肝癌、胃肠道疾病等。
二、真菌毒素的检测方法1、高效液相色谱法高效液相色谱法可以对多种真菌毒素同时进行检测。
但是，液相色谱法也存在一些局限性，如可能存在共淋巴机能和缺乏标准物质等。
2、毒素联合酶法毒素联合酶法是一种比较新颖的检测方法，具有快速准确、敏感度高等特点。
同时它也能对多种真菌毒素进行检测和鉴定。
3、气相色谱法气相色谱法是化学分离与检测真菌毒素的通用方法，主要用于含量较低的环境或食品污染样品中真菌毒素分析。
然而，气相色谱法存在检测范围和方法的升级需要等问题。
4、质谱法质谱法是一种高灵敏度、高分辨率的检测方法。
它广泛应用于多种真菌毒素检测，具有特异性、灵敏度高等特点。
但是，质谱法也存在样品制备诱因较高和高成本等问题。
三、真菌毒素的检测建议1、在生产环节注重卫生和检测最好的方法是在食品生产过程中加强卫生管理，防止食品被真菌感染。
同时，也应建立完善的食品检测体系。
2、了解真菌毒素的来源和成因了解真菌毒素的来源和成因有助于在食品生产的全部过程中防止真菌污染。
3、选用适当的检测方法由于不同的真菌毒素在不同的检测方法中有不同的处理方式，因此在进行检测和分析时，需要选择适当的方法，从而获得更准确的结果。
四、结论随着人们对食品安全问题的关注不断增强，检测真菌毒素的重要性也越来越受到重视。
因此，在实际应用中，应该综合考虑不同的检测方法，以获得更准确、可靠和有效的检测结果。
超高效液相色谱-串联质谱法测定水果及谷物中多抗霉素B 残留量张红梅（通标标准技术服务（上海）有限公司，上海 200233）摘 要：建立了一种快速有效的超高效液相色谱串联质谱法检测分析水果及谷物中多抗霉素B 残留量的方法。
色谱柱为Waters CORTECS® HILIC （150 mm ×2.1 mm ，2.7 µm ），流动相为0.1%甲酸（含5 mmol·L -1甲酸铵）水溶液和乙腈，梯度洗脱，流速为0.40 mL·min -1。
采用多反应监测模式（Multiple Reaction Monitoring ，MRM ），采用ESI 正电离源，定量离子对508.1/305。
样品经0.2%甲酸水溶液超声提取，离心取上清液，经由PLS 柱（亲水亲脂平衡固相萃取柱）净化，过膜后直接测定，外标法定量。
结果表明，多抗霉素B 在2～50 µg·L -1线性关系良好，相关系数r 2＞0.999 。
在3个浓度加标水平条件下，即多抗霉素B 浓度为0.10 mg·kg -1、0.20 mg·kg -1和1.00 mg·kg -1时，回收率为91.1%～112.3%，相对标准偏差为6.7%～10.1%。
该方法操作简便、回收率高，可用于批量水果及谷物中多抗霉素B 残留的 检测。
关键词：水果；谷物；多抗霉素B ；超高效液相色谱串联质谱法Determination of Polyoxin B Residues in Fruit and Grains by Ultra High Performance Liquid Chromatography TandemMass SpectrometryZHANG Hongmei(SGS-CSTC Standards Technical Services (Shanghai) Co., Ltd., Shanghai 200233, China)Abstract: A new method was developed for the determination of polyoxin B in fruit and grain by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. The chromatography column was Waters CORTECS® HILIC (150 mm ×2.1 mm, 2.7 µm), the mobile phase is 0.1% formic acid (containing 5 mmol·L -1 ammonium formate) aqueous solution and acetonitrile, with gradient elution, the flow rate is 0.40 mL·min -1. Adopting multiple reaction monitoring (MRM) mode, using ESI positive ionization source, and quantifying ion pairs 508.1/305. The sample was extracted by ultrasound with a 0.2% formic acid aqueous solution, the supernatant was centrifuged, purified by PLS column, and directly measured after passing through the membrane. The external standard method was used for quantification. The linear range of the method was 2～50 µg·L -1, with the external standard method and r 2＞0.999. Under the conditions of three concentration spiking levels, namely, when the concentration of polyoxin B is 0.10 mg·kg -1, 0.20 mg·kg -1, and 1.00 mg·kg -1, the recovery rate is 91.1%～112.3%, and the relative standard deviations were in the range of 6.7%～10.1%. This method is easy to operate and has a high recovery rate, and can be used for the residual testing of polyoxin B in bulk fruits and grain.Keywords: fruit; grain; polyoxin B; ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry作者简介：张红梅（1975—），女，湖北潜江人，硕士，工程师。
２０１４年３月Ｍａｒｃｈ２０１４岩 矿 测 试ＲＯＣＫＡＮＤＭＩＮＥＲＡＬＡＮＡＬＹＳＩＳＶｏｌ．３３，Ｎｏ．２２７５～２８１收稿日期：２０１３－０６－２０；接受日期：２０１３－０８－２５基金项目：河北省科技厅平台建设项目（ＪＢ００１１９６６１２３Ｄ）作者简介：杨立新，博士研究生，技师，研究方向为食品及饮用水检测技术。
Ｅ ｍａｉｌ：ｙａｎｇｌｉｘｉｎ２４１＠１６３．ｃｏｍ。
通讯作者：常凤启，主任技师，研究方向为食品安全。
Ｅ ｍａｉｌ：ｈｂｗｅｉｓｈｅｎｇ２＠１６３．ｃｏｍ。
文章编号：０２５４５３５７（２０１４）０２０２７５０７超高效液相色谱－串联质谱法直接进样测定水样中８种有机污染物杨立新１，２，张剑波２，路 阳１，刘印平１，董 斌１，常凤启１（１．河北省疾病预防控制中心，河北石家庄０５００２１； ２．北京大学环境科学与工程学院，北京１００８７１）摘要：２０１１年我国实施了新的生活饮用水卫生标准，卫生指标扩展至１０６项，并配套了相关的检测方法，其中微囊藻毒素、莠去津采用液相色谱紫外检测器的检测方法；丙烯酰胺、灭草松、２，４－Ｄ采用气相色谱－电子捕获检测器的检测方法；呋喃丹、草甘膦采用液相色谱荧光检测器的检测方法。
这些检测方法均有前处理程序繁琐、工作量大、可操作性差的缺点，在实际工作中应用较为困难。
本文采用超高效液相色谱－串联质谱技术（ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ），建立了水样过０．２２μｍ滤膜，直接进样测定自来水、地下水及地表水中８种有机污染物（草甘膦、呋喃丹、灭草松、莠去津、２，４－滴、丙烯酰胺、微囊藻毒素－ＲＲ和微囊藻毒素－ＬＲ）的分析方法。
８种化合物在各自的线性范围内线性关系良好，相关系数均不低于０．９９３，定量下限为０．０７～５μｇ／Ｌ，低、中、高三个加标水平的回收率为９４．２％～１０３．７％，相对标准偏差为１．１％～７．８％。
本文建立的方法操作简便，可以实现在６ｍｉｎ内一次性分析８种目标化合物，与国家标准方法相比，显著提高了分析效率；与文献报道的均是单一类化合物检测方法相比，本检测方法具有相似的灵敏度和检测限，但是目标化合物覆盖更全面，分析时间更短。
