人外周血淋巴细胞微核测定

外周血淋巴细胞亚群检测方法引言淋巴细胞是免疫系统中的关键组成部分，负责抵御病原体入侵以及产生免疫应答。

人体外周血中的淋巴细胞亚群分布情况直接影响着人体免疫功能的正常运行。

深入了解外周血淋巴细胞亚群的检测方法对于疾病诊断、治疗以及免疫功能评估具有重要意义。

一、外周血淋巴细胞亚群的概念和功能淋巴细胞是一类在外周血液和淋巴组织中广泛存在的白细胞。

根据其表面标记分子的不同表达，可以将淋巴细胞分为T细胞、B细胞和自然杀伤细胞等亚群。

这些不同的亚群在免疫应答中具有不同的功能。

T细胞是最为重要的淋巴细胞亚群之一，主要分为CD4+T细胞和CD8+T细胞。

CD4+T细胞是调节免疫应答的关键细胞，其主要功能是识别并与抗原结合，然后释放细胞因子调节其他免疫细胞的活性。

CD8+T细胞则主要负责通过释放细胞毒素来杀伤被感染的细胞。

B细胞是淋巴细胞中的主要亚群之一，其主要功能是产生与抗原特异性结合的抗体，以此来中和病原体或形成免疫复合物。

自然杀伤细胞是一类专门对抗病毒感染和肿瘤细胞的细胞。

它能够直接杀伤感染或突变的细胞，并释放细胞毒素来诱导细胞凋亡。

二、1. 流式细胞术流式细胞术是目前应用最为广泛的淋巴细胞亚群检测方法之一。

该方法通过不同的抗体标记，能够区分不同的淋巴细胞亚群，并通过流式细胞仪进行检测和分析。

流式细胞术可以同时检测多种亚群的分布情况，并且能够进一步进行表型分析。

2. 免疫荧光染色免疫荧光染色是一种通过将荧光标记的抗体与细胞表面分子进行特异性结合的方法。

通过对不同亚群的细胞进行特异性的染色，可以通过显微镜观察到不同亚群的分布情况。

这种方法适用于对淋巴细胞亚群的定性分析。

3. 免疫酶标测定法免疫酶标测定法是一种通过将荧光或酶标记的抗体与细胞表面分子进行结合，并进行酶标反应来检测细胞表面分子的方法。

该方法适用于大规模的样本检测，并且可以通过测定酶标反应的强度来定量分析不同淋巴细胞亚群的含量。

三、外周血淋巴细胞亚群检测在疾病诊断和免疫功能评估中的应用1. 疾病诊断外周血淋巴细胞亚群的异常分布在许多疾病的诊断中具有重要作用。

人外周血淋巴细胞微核测定一、实验原理:人外周血淋巴细胞大都处于细胞周期的G 0期，在含有PHA 的培养基中进行体外培养后，原来处于G 0期的淋巴细胞可转化为淋巴母细胞，恢复分裂能力。

在细胞分裂过程中，由于化学物质或辐射作用影响，可以引起淋巴母细胞染色体损伤，致使染色体断裂，无着丝粒的染色体断片不能随染色体移动进入子细胞核，结果在细胞质中形成微核。

本试验是一种体外测试有害因子遗传毒性的方法，通过在人类外周血淋巴细胞体外培养过程中加入受试物，检测细胞微核情况来评价受试物的遗传毒性。

同时也成为检测致突变、致癌、致畸物质对机体遗传效应的一种重要手段。

二、验用品（1）器材：离心管、注射器、培养瓶（10ml ）、吸管、离心机、载玻片、冰箱、培养箱、恒温水浴箱。

（2）试剂：Giemsa 染液、pH6.8磷酸缓冲液、RPMI1640培养液、PHA 溶液、0.075mol ／L KCl溶液、甲醇:冰醋酸固定液（3）材料：人外周血、环磷酰胺溶液。

三、实验步骤1、按人类外周血染色体培养常规方法采血、接种，按组分别加入受试物（CP 终浓度100ug/ml）培养72小时，收获前不用加秋水仙素，收获标本，离心，去上清液。

2、低渗：加入0.075mol ／L KCl溶液4m1。

混匀后放入37℃恒温水浴箱中低渗处理10分钟。

低渗时间可根据预实验中细胞完整程度进行调整。

3、预固定：低渗结束后加入甲醇·冰乙酸（3:1）固定液lml ，混匀后离心（1000rpm ）5分钟。

4、固定：弃上清液，加入5ml 固定液，混匀后离心（1000rpm ）5分钟。

弃上清液，留沉淀物。

可按本方法再固定一次。

5、滴片：加入少量固定液混匀成细胞悬液，滴片。

6、染色：用Giemsa 染液染色10分钟。

自来水细水冲洗后，晾干。

7、观察与计数：先以低倍镜、高倍镜粗检，选择细胞分散均匀，染色良好的区域，转到油镜下观察转化的淋巴细胞，进行微核的观察和计数。

中国肿瘤生物治疗杂志 h ttp ://www.b i o t her .o rg Ch i n J Cancer B i other ,O ct .2010,V o.l 17,N o .5DO I :10.3872/j .iss n.1007-385X .2010.05.011#临床研究#白血病患者外周血淋巴细胞微核分析鱼丽莉1,王子妍1,李 娟1,宋玮玮2,赵 丽1(1.兰州大学第一医院中心实验室,甘肃兰州730000;2.兰州军区总医院血液科,甘肃兰州730050)[摘 要]目的:应用微核分析技术检测初诊白血病患者的遗传损伤。

方法:应用细胞周期阻断法检测54例初诊白血病患者(C M L 11例,AM L -M 17例,AM L -M 26例,AM L -M 34例,AM L -M 42例,AM L -M 54例,AM L -M 62例,ALL 18例)和30例健康人外周血,以微核率(m i cronucleus rate ,M NR )、微核细胞率(m i cronucleus cell rate ,M CR )、核芽(nuclear bud ,Bud)率、核质桥(nucleop l as m i c br i dge ,NPB)率、核分裂指数(nuc l eus di v ision i ndex,ND I)、凋亡细胞(apopto ti c cell s ,A C)率结合染色体中期分析、融合基因和基因重排检测作为染色体损伤指标分析初诊白血病患者的遗传损伤。

结果:54例初诊白血病患者外周血的M NR [(17.368?1.305)jvs (7.368?0.844)j ]、M CR [(15.418?1.212)jvs (5.887?1.101)j ]、Bud 率[(8.142?01132)%vs (0.404?0.404)%]、NPB 率[(5.724?0.874)%vs (0.034?0.034)%]、N D I[(1.722?0.062)%vs (2.282?01324)%]、AC 率[(2.167?0.333)%vs (0.167?0.667)%]、异常染色体检出率(24.00%)、融合基因或基因重排阳性率(18.00%)均明显异于健康人(P <0.05或P <0.01)。