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食用向日葵SSR-PCR反应体系的优化

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ｔ ｈ ｅ ｓ ｉ ｎ ｇ ｌ ｅ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｔ ｅ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ｏ ｒ ｔ ｈ ｏ ｇ ｏ ｎ ａ ｌ ｄ ｅ ｓ ｉ ｇ ｎ ｏｒ ｆ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍ ｉ ｚ ｉ ｎ ｇ ｓ ｉ ｘ Ｓ Ｓ Ｒ — Ｐ Ｃ Ｒ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｓ（ １ ０×Ｐ Ｃ Ｒ Ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ 。
摘要 ： 为 建 立 食 用 向 日葵 分 子 标 记 反 应 体 系 ， 以食 用 向 日葵 四 叶 期 叶 片 为 Ｄ Ｎ Ａ模板 提取材 料 ， 采 用 单 因 素 试 验
和正交试验设计 ， 对Ｓ Ｓ Ｒ — Ｐ Ｃ Ｒ 反 应 体 系 中 的 ６因 素 （ １ ０×Ｐ Ｃ Ｒ Ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ 、 Ｍｇ “、 ｄ Ｎ Ｔ Ｐ ｓ 、 引物 、 Ｔ ａ ｑ Ｄ Ｎ Ａ聚合酶 和 Ｄ Ｎ Ａ模 板） 在 ５水 平 上 进 行 正 交 优 化 试 验 ， 并 比较 了 不 同 浓 度 Ｍｇ “、 Ｔ ａ ｑ Ｄ Ｎ Ａ 聚合 酶 、 模板 Ｄ Ｎ Ａ对扩增效果 的影响 ， 结 果 表 明， 各 因 素水 平 变 化 对 反 应 体 系 的影 响为 Ｍ ｇ ＞Ｔ ａ ｑ Ｄ Ｎ Ａ聚合酶 （ 引物 ）＞Ｄ Ｎ Ａ 模 板 ＞１ ０ ｘ Ｐ Ｃ Ｒ Ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ＞ｄ Ｎ Ｔ Ｐ ｓ 。最 终 建 立 食 用 向 日葵 Ｓ Ｓ Ｒ — Ｐ Ｃ Ｒ最 佳反应 体系 为 ： 在 总体 系为 ２ ０ Ｌ的 Ｓ Ｓ Ｒ — Ｐ Ｃ Ｒ 反 应 体 系 中包 括 １ ０×Ｐ Ｃ Ｒ Ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ０ ． ２
Ａ ｃ ａ ｄ ｅ ｍ ｙ ｏ ｆ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ ａ ｎ ｄ Ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ Ｈｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｒ ｙ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ， Ｈｕ ｈ ｈ ｏ ｔ ０ １ ０ ０ ３ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
ｍ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ 、 Ｍｇ “２ ． ０ ｍｍ ｏ ｌ ／ Ｌ 、 ｄ Ｎ Ｔ Ｐ ｓ １ ． ８ ｍ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ 、 Ｔ ａ ｑ Ｄ Ｎ Ａ 聚合 酶 ０ ． ２ Ｕ、 Ｄ Ｎ Ａ ５ ０ ｎ ｇ 、 引物 １ ． ５ ｍｍ ｏ ｌ ／ Ｌ 。 关键词 ： 食 用 向 日葵 ； Ｓ Ｓ Ｒ — Ｐ Ｃ Ｒ； 体 系优 化
Ｍｇ ， ｄ ＮＴＰｓ，ｐ ｒ ｉ ｍｅ ｒ ｓ ，Ｔ ａ ｑ ＤＮＡ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ，ＤＮＡ ｔ ｅ ｍｐ ｌ ａ ｔ ｅ ａ ｎ ｄ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｃ ｏ ｎｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ Ｍ ｇ ．
华 北 农 学 报 ・２ ０１ ５， ３ ０（ ２）： １ ６ １ － １ ６ ５
食用 向 日葵 Ｓ Ｓ Ｒ — Ｐ Ｃ Ｒ反应体 系的优化
胡 小 利 ， 马 庆 ， 包 海 柱１ ． 内蒙古农业大学 农学 院， 内 蒙古 呼 和 浩 特 ０ １ ０ ０ １ ９ ； ２ ． 内蒙 古 农 牧 业 科 学 院 ， 内蒙 古 呼 和 浩 特 ０ １ ０ ０ ３ １ ）
ｉ ｎｇ ＤＮＡ ｔ ｅ ｍｐ ｌ ａ ｔ ｅ ｆ ｒ ｏ ｍ ｆ ｏ ｕ ｒ — ｌ ｅ ａ ｆ ｓ ｔ ａ ｇ ｅ ｏ ｆ ｃ ｏ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎａ ｒ ｙ ｓ ｕｎ ｆ ｌ ｏ ｗｅ ｒ ｓ ｌ ｅ ａ ｖ ｅ ｓ ｆ ｏ ｒ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｌ ｍａ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｓ， ｔ ｈｉ ｓ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｕｓ ｅ ｄ
Ａ ｂｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ｃ ｏ ｎ ｆ ｅ ｅ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｒ ｙ ｓ ｕｎ ｆ ｌ ｏ ｗｅ ｒ ｍｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ ｓ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ， ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ａ ｓ ｓ ｕ ｍ．
Ｈ Ｕ Ｘ ｉ ａ ｏ － ｌ － ｉ， － ＭＡ Ｑ ｉ ｎ ｇ ， Ｂ Ａ Ｏ Ｈ ａ ｉ — ｚ ｈ ｕ ， Ｆ Ａ Ｎ Ｒ ｕ ｉ ， Ｓ Ｕ Ｎ Ｘ ｉ ． １ ． ｉ， ． ＭＡ Ｒ ｏ ｎ ｇ
（ １ ． Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｉ ｎ ｎ ｅ ｒ Ｍｏ ｎ ｇ ｏ ｌ ｉ ａ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｈｕ ｈ ｈ ｏ ｔ ０ １ ０ ０ １ ９， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ． Ｉ ｎ ｎ ｅ ｒ Ｍｏ ｎ ｇ ｏ ｌ ｉ ａ
中 图分 类 号 ： ￥ ５ ６ ５ ． ５ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ０— ７ ０ ９ ｌ （ ２ Ｏ ｌ ５ ） ０ ２— ０ １ ６ １ —０ ５
ｄ ｏ ｌ： １ ０ ． ７ ６ ６ ８ ／ ｈ ｂ ｎ ｘ ｂ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ２． ０ ２ ９
Ｏｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｓ ＳＲ－ ＰＣＲ Ｒｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｓｙ ｓ ｔ ｅ ｍ ｉ ｎ Ｃｏ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｒ ｙ Ｓ ｕｎ ｌｏ ｆ ｗｅ ｒ

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利用向日葵重组自交系构建遗传图谱

利用向日葵重组自交系构建遗传图谱

利用向日葵重组自交系构建遗传图谱张永虎;于海峰;侯建华;李素萍;吕品;于志贤【摘要】A genetic linkage map of sunflower was constructed by combined applying the SSR and AFLP markers using 187 F5:6 individuals of recombinant inbred lines (RILs) which derived from the cross between Helianthus an-nuus K55 andHelianthus annuus K58 through single-seed descent (SSD). Using 78 pairs of SSR primers and 48 pairs of AFLP primer, 341 and 1119 bands were amplified, respectively. Among these 1460 bands, 557 bands (39.52%) were polymorphic, including 184 bands by SSR markers and 393 bands by AFLP markers. In the group of these po-lymorphic bands, 84 bands from SSR markers and 108 bands from AFLP markers showed the genetic distortion (P = 0.05). A total of 192 segregation distortion markers were obtained in this study. By using the JoinMap 4.0 software to do the linkage analysis, a genetic linkage map was established with length of 2759.4 cM, consisted of 17 linkage groups, and comprised of 495 polymorphic molecular markers including 170 segregation distortion markers. The mean mark- er interval distance is 5.57 cM between markers. In addition, the number of markers in the linkage groups varied from 5 to 72, and the length of linkage groups were from 68.88 cM to 250.17 cM. The genetic map developed in the present study could be used for QTL mapping and gene cloning of sunflower important genes.%以向日葵自选系K55为母本、K58为父本杂交组合，通过单粒传得到的187个F5：6代重组自交系群体为作图材料，联合应用SSR和AFLP标记构建遗传连锁图谱。

利用正交设计优化向日葵ISSR-PCR反应体系

利用正交设计优化向日葵ISSR-PCR反应体系


日葵 种 质 资 源 的 分 析 和 品 种 纯 度 鉴 定 方 面 的
研究 ］ 。
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ４ — ０ ５ — ２ ２
Ｉ Ｓ Ｓ Ｒ是 Ｚ ｉ ｅ ｔ ｋ ｉ ｅ ｗｉ ｅ ｚ等 于 １ ９ ９ ４年 创 建 的 以Ｐ Ｃ Ｒ 技术 为 基础 的分 子 标 记 ， 具 有 ＤＮＡ 用 量 少、 多 态性水 平高 、 重 复性好 和操 作性 强等 主要 特 点 。而 且利用 Ｉ Ｓ Ｓ Ｒ标 记 建立 的作 物 品种 指 纹 图
葵 Ｉ Ｓ Ｓ Ｒ— ＰＣＲ反 应 的 ２ Ｏ Ｌ体 系 ： ５ Ｏ ｎ ｇ模 板 ＤＮＡ、 ２ ． ０ ｔ Ｌ ｍｏ ｌ ・ Ｌ － ｄ ＮＴＰ、 ３ ７ ． ５ ｇ ｍｏ ｌ ・ Ｌ － Ｍｇ 、 ８ ｔ ￣ ｍｏ ｌ ・ Ｉ 引物 、
８ Ｕ ＤＮＡ ｑ酶 。
黑龙江农业科学 ２ ０ １ ４ （ １ ０ ） ： １ ６ ～１ ９
Ｈｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ
利 用 正交 设 计 优 化 向 日葵 Ｉ Ｓ Ｓ Ｒ － Ｐ Ｃ Ｒ反 应 体 系
梁 春 波
Ｈｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ａｃ ａ ｄ ｅ ｍｙ ｏ ｆ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ， Ｊ ｉ ａ ｍｕ ｓ ｉ ， Ｈｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ １ ５ ４ ０ ０ ７ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｂ ｒ ｅ ｅ ｄ ｎ ｅ ｗ ｐ ｏ ｔ ａ ｔ ｏ ｖ ａ ｒ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｈ ｉ ｇ ｈ ｑ ｕ ｌ ｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ ｈ ｉ ｇ ｈ ｙ ｉ ｅ ｌ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒ Ｈｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ
阔叶十大功劳ISSR—PCR反应体系的建立与优化

阔叶十大功劳ISSR—PCR反应体系的建立与优化

中 Ｔａ ｑ酶 、 ｇ 浓 度 、 物 浓 度 、 ＮＴ ｓ 度 及 Ｍ 抖 引 ｄ Ｐ 浓
扩 增 程 序 中退 火 对 其 实 验 体 系 进 行 优 化 ． 研 究 采 用 正 交 试 本
１ ２ １ 基 因组 Ｄ ．． ＮＡ 的 提 取 采 用 改 良 的 Ｃ ＡＢ Ｔ
２ Ｌ 应 体 系 中 ， ． ｌ ｌＬＪ物 、 ． Ｔａ ０ 反 ０ ５／ ／ ｉ ｍｏ Ｉ ０ ５Ｕ ｑ酶 、 ０￣ ｌＬ ｄ Ｐ 和 ２ ｇ模 板 Ｄ １ ５ ｍｏ／ ＮＴ ｓ ０ｎ ＮＡ．
在最 佳 反应 条件 下 ， ８ 从 Ｏ条 引 物 中 筛 选 出 １ 扩 增 稳 定 、 态 性 丰 富 的 ＩＳ 引 物 ， 经 ５条 多 ＳＲ 并
冰箱 冷冻保 存 ．Ｓ Ｒ引 物根 据 加 拿 大 哥 伦 比亚 大 ＩＳ 学 （ Ｃ） 供 的 序 列 ， 上 海 生 物 工 程 公 司 合 ＵＢ 提 由
成 ， 初 步 筛 选 ， 定 ＵＢ ８ ６（ 物 序 列 ５， 经 确 Ｃ ３ 引 －
ＡＧ ＡＧ ＡＧ Ｇ Ａ Ｇ Ａ ＡＧ ＡＧＡ Ｇ － ’ 为 此 次 实 ＹＡ ３ ）
实验材料 采集 于武 汉植物 园 ， 料 由中南 民族 材 大学万 定荣教 授鉴 定． 摘幼嫩 叶 片后 迅 速置于 盛 采 有硅 胶 的密封塑 封袋 ， 叶片 干燥后 置于 一２ ℃低 温 Ｏ
治疗痢疾 、 炎 、 冒、 嗽 、 肝 感 咳 目赤 肿 痛 和 烧 烫 伤
等 症 状 ［ ．目前 ， 阔 叶 十 大 功 劳 组 织 形 态 ］ ７ ］ 对 、
分析 ．
关 键 词 ： 叶 十 大 功 劳 ； Ｓ Ｒ Ｐ Ｒ；正 交设 计 ；单 因 素 实 验 ； 传 多 样 性 阔 ＩＳ —Ｃ 遗
中 图 分 类 号 ：Ｒ ８ ． ２２７ 文献标识码 ： Ａ
优化pcr体系的方法

优化pcr体系的方法

优化pcr体系的方法
优化PCR体系的方法有：
1. 优化引物设计：选择合适的引物序列，优化引物的浓度和比例，确保引物的特异性和互补性。

2. 优化反应条件：合理调整PCR反应的温度、时间和环节，比如优化退火温度、延长扩增时间等，以提高反应效率和特异性。

3. 优化酶的选择：选择适合的DNA聚合酶和其缓冲液，以提高PCR反应的效率和特异性。

4. 添加辅助物质：如DMSO、BSA等，可以改变反应体系的离子平衡，降低引物间的二级结构，增强PCR效果。

5. 优化反应体系中其他组分的浓度：如优化模板DNA、引物和dNTP等的浓度，以提高PCR反应的效率和特异性。

6. 引入热启动酶或热稳定酶：可以在PCR反应开始前抑制非特异性扩增，提高PCR的特异性。

7. 优化反应体系的pH值：调整PCR反应的pH值，使其适合DNA的变性和扩增过程。

8. 引入分析验证环节：如添加内参物质或设计阳性对照，进行验证实验，检测PCR反应的特异性和准确性。

9. 优化PCR反应后处理：如优化PCR产物的纯化方法、提高PCR产物的检测灵敏度，以提高PCR实验的质量和效果。