细胞工程知识点总结

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细胞工程:以生物细胞或组织为研究对象,应用生命科学理论,借助工程学原理与技术,有目的的利用或改造生物遗传特性,以获得特定细胞、组织、产品或新型物种的一门综合性学科。

1.微繁殖:是指在离体培养条件下、将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行无菌培养,经过不断地切割和重复培养,使其增殖并再生形成完整植株,在短期内获得大量遗传性均一的个体的方法。

2.繁殖系数:经一次增值培养或在一定时间段内由一个繁殖体所增殖获得的总繁殖体数或苗数。

3.玻璃化:也称超水化作用,是离体培养过程中试管苗发生形态、生理和代谢异常的现象。

4.褐变:是指组织培养中,由于材料被切割而使多酚氧化酶活化将组织中的酚类物质氧化形成棕褐色的醌类物质,并向培养基中扩散,抑制培养物生长甚至导致其死亡的现象。

5.原球茎:兰科植物的种子在萌发初期并不出现胚根,只是胚逐渐膨大,以后种皮的一端破裂,膨大的胚呈小圆锥状,称作原球茎。

6.茎尖分生组织:指茎尖最幼龄叶原基上方的由2或3层分生细胞组成的很小区域、一般最大直径不超过0.1mm,长度0.25mm,最小的茎尖长度仅有几十微米,有时也称顶端分生组织。

7.不定芽:相对于顶芽和腋芽、由植物的其他部位或器官、组织上通过器官发生重新形成的、无固定着生位置的芽统称为不定芽。

细胞细胞工程知识点绪论研究内容(根据操作对象):1)器官组织和细胞培养2)原生质体培养3)植物胚

胎培养4)动物胚胎工程5)转基因动植物6)胚胎干细胞7)染色体工程研究内容(研究水平);个体、器官、组织、细胞、亚细胞、分子等不同研究层次动物细胞发展经历了哪些阶段?答:①细胞培养技术②细胞融合技术③动物胚胎移植技术④体外受精技术⑤动物克隆技术⑥转基因动物技术⑦胚胎干细胞技术生物工程:1)发酵工程2) 基因工程3)酶工程4)细胞工程5)蛋白质工程

(第二章没有放进来!!!!)

第三章培养原理

细胞学说:1838年,主要观点:细胞是生物体的基本结构单位,由它构成整个生物个体。

植物细胞的全能性:每个植物细胞都具有该物种的全部遗传信息,在适宜条件下具有发育成完整植株的能力。

植物细胞全能性含义:(1)每个植物细胞都具有它母性的全部遗传特征。

(2)每一个细胞都可以在特定条件下发育成为与母体一样的植株。

全能性的实现:一个已分化的细胞要实现其全能性两个过程:一是脱分化,使外植体的细胞转变成胚性细胞,从而获得不断分裂的能力;二是再分化,使胚性细胞分化形成器官。

条件:①具有较强全能性的细胞从植物组织抑制性影响下解脱出来,使其处于独立发育的离体条件下;②赋予离体细胞一定刺激,包括营养物质、植物激素、光周期、温度、酸碱度等。途径:1)以植物的体细胞为培养材料,可以诱导形成完整植株。

2)以植物的性细胞为培养材料,可以诱导形成完整植株。

3)用酶解法去除植物细胞的细胞壁,培养裸露的原生质体,原生质体发育成植物体。 4)加入促溶剂,可以诱导两个不同种的原生质体融合,继续培养可发育成杂种植株。5)将外源基因通过不同基因载体引入植物细胞,使植物细胞在分子水平上发生修饰,经离体培养后可再生成具有新性状的植物体。(转基因)

植物细胞的分化:由发育起始状态的合子沿个体发育方向不断分化出形态结构、生理功能不同的细胞、组织、器官而最终形成完整植株的过程。

脱分化:在某些特定条件下,分化细胞的表型也不稳定,其基因活动模式也发生可逆的变化,细胞脱离原状态而回复到分生状态。细胞脱分化的结果产生愈伤组织。成熟细胞分生细胞多细胞团形态建成完整植株

外植体离体培养到再分化形成各器官三个时期:

(1)诱导期(2)分裂期(3)分化期

植物愈伤组织:植物受到机械、动物或微生物等伤害后,创伤部位的细胞脱分化而不断增值形成松散排列、无特定结构和功能的非器官化组织。

愈伤组织的类型:胚型紧密型(胚性质地较坚实、乳白色或黄色、表面有球形颗粒)易碎型非胚性(松散易碎、黄的或褐色、表面粗糙、生长迅速)

Ⅰ型(乳白色或绿色、结构致密、复杂多样、生长缓慢、不宜长时间保持胚性)。Ⅱ型(淡黄色或黄色、结构松散、松软、呈颗粒状生长较快、能长时间保持胚性。)Ⅲ型(白色或灰色透明水渍状,松软无结构,形似或冰针絮状,继代易褐化而死亡。)

愈伤组织的细胞组成(分生细胞、薄壁细胞、厚壁细胞和管状细胞。)

分生细胞存在于分生组织和胚状体内,其细胞小,细胞核占比例大,细胞质着色深,无或少有液泡。

薄壁细胞较大,细胞非圆形,核小,且被中央大液泡挤到边缘,很多薄壁细胞中不见核的存在,部分薄壁细胞已解体,胞质内无或残留少量物质,残留物着色均一。

厚壁细胞存在于愈伤组织表面,其细胞质解体,细胞壁是通过木质化或栓质化加厚而形成的。管状分子是由薄壁细胞经细胞壁木质化次生加厚形成的,有环纹、网纹和孔纹三种类型。

特性:异质性、嵌合性、变异性

继代培养;固体培养简便易行,但有缺点:

①由于被培养愈伤组织仅一部分和培养基接触,在培养过程中,接触部位的营养物质很快被吸收掉,而从培养基其他区域补充较慢,造成愈伤组织生长不平衡。②愈伤组织在培养过程中排出的有害物质在培养物附近积累。

③在静止放置情况下,受重力作用和单向受光等因素影响,愈伤组织极易出现极化和分化,产生微管分子和结节等分化细胞,最终难以获得均一的细胞群体。

液体培养的优点:①在液体培养基中愈伤组织一手营养均衡,易获得均一的细胞群体;②愈伤组织块在液体震荡培养中会分裂成更小的细胞团或单细胞,因而产生更大的吸收表面积。在液体培养基中,体细胞胚胎发生比固体培养基更容易。

被子植物对愈伤组织的诱导较敏感;双子叶植物比单子叶植物容易诱导成功;草本植物比木本植物易产生愈伤组织及进行其后的形态建成。

极性:在器官、组织甚至细胞中,在不同的轴向上存在某种形态结构和生理生化上的梯度差异。造成了细胞内生活物质的定向和定位。

1.生长素:IAA NAA IBA 2-4D

2.细胞分裂素:KP ZP玉米素6-BA 促进细胞分裂

调节作用发生在有丝分裂准备期,即G2期。

3.脱落酸:ABA 低水平的ABA有利于胚性愈伤组织的形成。ABA的效应与外植体的发育时期有关。

4.乙烯:Eth乙烯抑制剂可促进高度胚性愈伤组织的形成。

培养条件的影响 P48

器官发生:植物根、茎、叶、花、果实等器官的分化与形成。生长素和细胞分裂素之间的平衡控制器官发生。

发生方式:直接发生途径:直接产生不定芽。间接发生途径:先产生愈伤组织生长中心形成器官原基及器官形成。