细胞电转仪操作流程

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Gene pulser xcellTM Electroporation system quick guide

产品名称 : Gene Pulser Xcell 电穿孔系统

产品型号 : Gene Pulser Xcell 电穿孔系统

产品展商 : 众磊（北京）生物科技发展有限公司驻沪办

简单介绍

Gene Pulser Xcell 电穿孔系统

Gene Pulser Xcell 电穿孔系统 的详细介绍

【介绍】

电穿孔是功能强大的将核酸、 蛋白及其它分子导入多种细胞的高效技术。 通过高强度的电场作用， 瞬时

提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。这种技术可以将核苷酸、 DNA 与 RNA 、蛋白、 糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。电转化相对其它物理和化学转化方法，是一种有价值和 有效的替代方法。 Gene Pulser Xcell 系统的设计，基于 Bio-Rad 15 年来在电转化技术上经验积累，它提供 指数波和方波波型选择、 系统配置选择及友好的用户界面。

主要特点指数波和方波波型确保所有细胞类型 （原核及真核） 均可获得最佳 的电转化效果 Bio-Rad 专

利的 * PulseTrac 电路和电弧保护设计，确保可重复性 并保护样品模块化设计可根据研究需要选择系统用

户友好的数字化界面，具有直观的编程以控制所有参数， 包括附属模块的参数包括人工操作、预设规程、 用户规程、一个优化规程及其它先进 功能等程序选择

指数波或方波脉冲选择

Gene Pulser Xcell 系统可产生指数波和方波波型，使你选择最适合你细胞的波型与规程。指数波和方波 均能有效地用于电转化及电融合。电穿孔波型对不同类型细胞的转化效率有很重要的影响。

左，指数衰变脉冲。当一个充电至电压为 V 0 的电容器放 电到细胞，加在细胞上的电压随时间以指 数方式下降。从起始电压下降到 V0 / e 所需的时间称为为时间常数τ , 一 种方便的脉冲时间表达方式。

细胞电融合仪

ECM?2001

安装/操作手册

目 录

1． 检查清点货物及安装

2． 技术规格

3． 操作细则

4． 产生杂交瘤的实验方法

5． 服务及保修

6． 附录：电穿孔技术在转基因及动物克隆中的应用 第一节 检查清点货物及安装

1. 拆封包装：

ECM 2001细胞电融合仪采用纸箱包装，收到货物后，请检查包装完好程度，如果有任何损伤请速与我公司联系。

请小心地拆开包装，将仪器及附件取出，并依据合同清点货物内容及数量，如果有任何外观损伤或者货物与合同有差异，请速与我公司联系。

请保留包装箱，以便满足将来一旦要运送该仪器的需求。

2. 电源：

该仪器采用220V电源，请确认您的电源为稳定的220V。如果电源不稳定的话，有可能对仪器造成严重损害！

请确认您的电源严格接地，我们提供给您的电源线为三芯带地线电源。请不要改动该三芯电源线结构，否则有可能对仪器造成严重伤害！

3. 安装：

如果确认仪器包装无问题，且与合同相符，则可以进行安装。

请将仪器安装在一个干燥，水平，常温环境中。尽量避免灰尘和化学药品对仪器的损害。

仪器与其他物品的距离不少于15厘米，以保证仪器冷却的需求。

将电源线等附件拆包装，待用，依据后续章节继续操作。

第二节 技术规格

1. 外观尺寸：

宽：17＂ 高：11＂

长：＂

2. 重量：

47磅

3. 电气规格：

电源：220V，单相，7A耐熔保险

交流：频率固定在1MHZ

电压： 0 – 75 V （从零到峰值）

脉冲时间：0 – 99 秒

直流：高电压模式（HV）

电压： 10 – 3000 V （峰值）

脉冲时间：1 – 99 毫秒

低电压模式（LV）

电压： 10 – 500 V （峰值）

细胞电转基本步骤

细胞电转作为一种重要的实验技术，被广泛应用于基因工程、药物筛选、病毒研究等领域。细胞电转是指利用电场作用将外源DNA导入到细胞中的过程。本文将介绍细胞电转的基本步骤，帮助读者了解该技术的操作过程。

步骤一：制备细胞

需要选择合适的细胞进行电转。常用的细胞包括大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞等。细胞的培养条件和培养基的配方因细胞类型而异，需要根据实验要求进行调整。在培养细胞的过程中，要保证细胞处于良好的生长状态，细胞密度适宜。

步骤二：制备质粒

质粒是细胞电转的载体，质粒中携带有我们所需转入的外源DNA。在进行细胞电转之前，需要制备质粒。一般来说，质粒包括DNA序列、选择标记等。制备质粒的方法可以采用化学法、酶切法等。制备好的质粒需要通过DNA纯化等手段进行提纯，以去除杂质。

步骤三：电转操作

电转操作是整个细胞电转过程中的关键步骤。首先，将制备好的细胞转移到电转缓冲液中，使细胞处于最佳状态。然后，将质粒与细胞混合，形成细胞-质粒复合物。为了提高电转效率，可以对细胞-质粒复合物进行几次冷热冲击处理。接下来，将细胞-质粒复合物转移到预先装有电极的电转仪中。

步骤四：电转条件

在进行细胞电转时，需要设置合适的电转条件。电转条件包括电场强度、脉冲数目和脉冲宽度等。不同细胞类型和质粒大小需要不同的电转条件。一般来说，电场强度越高，电转效果越好，但也会对细胞造成伤害。因此，需要根据实验要求进行调整，找到最佳的电转条件。

步骤五：复苏和筛选

经过电转后，细胞需要一定的时间来复苏和表达转入的外源DNA。复苏的条件和时间因细胞类型和质粒而异。复苏后，可以通过添加适当的选择抗生素或荧光标记来筛选转化成功的细胞。通过筛选，可以得到含有目标基因的细胞群。

步骤六：鉴定和分析

对转化成功的细胞进行鉴定和分析。常用的方法包括PCR、限制酶切、DNA测序等。通过这些方法，可以验证转入的外源DNA是否正确，进一步确认转化的有效性。

BIO-RAD Gene Pulser

Xcell Electroporation

System

BIO-RAD电转化仪使用教程（自制）

cexoihtydx 20110902

一 电转仪示意图

Figure 1 connecting the shockpad to the Gene Pulser Xcell main

unit.

Figure 2 Shockpod with cuvette.

Figure 3 Gene Pulser Xcell front panel.

二 电转仪主界面

在主界面中，我们经常会用到：

4. Pre-set protocols 和5. User protocols

Pre-set protocols(预置方案)中，有Bacterial,Fungal和Mammalian三

种预置方案。

下面简单介绍一下Bacterial中E. coli和Fungal中Pichia

pastoris 的电转化方案和注意事项。

三 Electroporation of Bacterial Cells (E. coli)

1 制备电转化感受态细胞

1). Inoculate 5 ml of a fresh overnight E. coli culture into 500 ml of L-broth in

a 2.8 L Fernbach flask.

2). Grow the cells at 37°C shaking at 300 rpm to an OD600 of approximately

0.5–0.7. The best resultsare obtained with cells that are harvested at early- to

mid-log phase; the appropriate cell densitydepends on the strain and growth