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流式细胞仪操作流程(单标)

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流式细胞仪操作流程(单标)

一、开机 (务必按照此顺序开机)

1、 打开下面的小门，推上电源

2、 打开插线板电源开关

3、 开电脑

4、 打开流式细胞仪开关

二、软件准备

1、 打开软件

2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。（等待5～6min startup 完成后再继续）

2、 在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes编号。

3、 在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方图。以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。

4、 点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。

三、上机操作

1、 将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，此时流式细胞仪开始工作。

2、 根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。

3、 点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中出现P1，并且其中的细胞变成红色。

4、 选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。

5、 在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FITC，使其细胞散点图在图2中处于103以内，直方图的峰值在0－103之间。选择右侧显示屏中的Interval Gate 选项，在图3中点击并选定103数值右侧区域，图中显示P2。调节FITC电压，使P2的百分比值尽量在0.5%以下，并尽量使图3中的图象呈正态分布图。

6、 在Acquisition Dashboard中选择stopping gate内的P1，点击record data,机器自动记录数值。

7、 记录完成后，点击remove tube，并将试管取下。

8、 放置需要检测的试管，并点击acquire data，机器自动记录数值并在右侧显示屏中显示，单击record data，记录结果；每一次取下试管前均需点击remove tube，并在出现的进程框未消失前将试管取下。

四、关机

1、 实验完成后，点击菜单栏Cytometer内的shutdown选项，在出现的对话框内选择确定，待系统清洗完毕后在出现的对话框内点击确定。注：每次实验开始时均需要startup,实验完成时均需要shutdown。

2、 关闭流式细胞仪。

3、 关闭电脑。

4、 关闭插线板电源。

5、 关闭下面小门内的电源。

图1

图2

图3

合集下载

BDFACSCalibur流式细胞仪简易操作步骤corr_ZYH_

BDFACSCalibur流式细胞仪简易操作步骤corr_ZYH_

BDFACSCalibur 流式细胞仪

简易操作步骤

-、开机

1） 先打开净化交流稳压电源，其次打开 110V稳压输出电源，再次打开流式细胞仪，最 后打开计算机。

2） 向前拉开储液箱抽屉，检查鞘液筒、废液筒水量，如需充填鞘液，先将减压阀（红色

箭头所示）方向调在 VENT位置（箭头方向），再加入超纯水，保持水位在鞘液桶的 3/4左右，加好后拧紧桶盖并将减压阀方向调在 RUN位置。

:■、开启CellQuest软件、编辑实验文件

1）在屏幕下方点击 CELLQuest （第四个图标）启动软件。桌面会出现一 ’Un titled实验文

件，可点击实验文件的左上角的放大钮（绿色），将实验文件窗口放大。

2）从工具板中点击散点图图示。在实验文件的空白区点击，拖曳对角线至适当大小，然 后放开鼠标。出现散点图对话方框（当所要编辑的图窗口被选中时，会在其四角出现四 个小黑块）。

4）从屏幕上方Plots菜单中选择DotPlot功能，可复制一个同样大小的散点图，在出现的

对话方框内选择 X轴：FL1-H1024 ;如果是双标，Y轴选择：FL2-H1024（根据实验检

测样品确定所选通道，本步骤选 FL1/FL2来说明），如果是单标，Y轴选择：SSC-H。

点击OK , FL1/FL2的散点图出现。完成后可将重制图移至原图右方。

说明：散点图（Dotplot ），又称二维散点图是流式分析最常用图谱，它可以显示两个独立 参数的相互关系。在图中，横坐标 X轴和纵坐标Y轴参数分别设为 FSC-H1024、SSC- 3）在出现的散点图对话方框中点击 PlotSource，选择 AcquisitionandAnalysis( 收取、分

析），确认X和Y轴参数预设为 FSC-H1024、SSC-H1024。

H1024

;双荧光标记时，第二图 X和Y轴参数分别设为 FL1-H1024、FL2-H1024 , X轴为

流式细胞仪操作步骤(FACSCalibur)

流式细胞仪操作步骤(FACSCalibur)

一、开机程序：

1. 检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶体积的3/4位置，可以连续工作3个小时左右）、盖紧黑盖、管道畅通、废液桶有足够空间容纳本批标本排弃的废液。如果要添加鞘液，要先释放鞘液桶中气压。

2. 依次打开流式细胞仪FACSCalibur稳压器、主机开关、电脑开关，打印机。

3. 气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于STANDBY状态，做Prime，以排除管路中气泡。

二、运行FACSComp软件、检查仪器状况

1. 制备三色标准微球样本。一般情况向1ml鞘液（或过滤PBS）中加入

1滴质控小微球，也可以根据实际情况调节浓度。

2. 机器预热5 min，打开FACSComp软件，选择保持路径。选择所需校正内容，如果使用的微球是新一批产品要输入微球的批号。

3. 在软件界面左侧Assay Selection选项中选择质控类型，即实验过程中是否需要清洗样品。

4. 上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。功能键设置在“RUN”。

5. 仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。

6. FACSComp软件运行完毕，显示结果通过测试。

7. 做Set up。

8. 打印校正结果，退出FACSComp程序。

备注：在质控过程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收集速度，但是在调节灵敏度（Sens）时，一定要用“Low”的状态上样，保证仪器灵敏度的准确。在使用仪器过程中要养成好的习惯，在上样品过程中，仪器保持在“Low”“Standby”状态。

三、样品分析软件：CellQuest Pro

1.

保证机器预热5 min，打开CellQuest Pro软件，选择“联机”。

（1） 在弹出的界面中的选择数据存储路径（Directory 菜单）； Acquire Connect to Cytometer （2） 对实验样本进行命名；

（3） 对实验通道进行预设（FSC,SSC,FL1-FL4）。

流式细胞操作流程

流式细胞操作流程

流式细胞操作流程

流式细胞术是一种用于分析和分类细胞的生物学技术。以下是典型的流式细胞操作流程：

1. 细胞样本准备：

• 收集要分析的细胞样本，可以是细胞悬液、组织细胞悬液或血液等。

• 对样本进行必要的预处理，如裂解红细胞，去除细胞碎片等。

2. 标记细胞：

• 使用荧光标记物（荧光染料、抗体等）标记细胞中的特定分子，以便流式仪器能够检测到这些标记。

• 标记的目标可以是表面抗原、细胞器、DNA或RNA等。

3. 样本染色：

• 添加染色剂（荧光标记物）到细胞样本中，使其能够在流式仪器中发光。

• 染色通常通过孵育样本和染色剂混合物来实现。

4. 细胞固定（可选）：

• 如果需要保持细胞在染色后的状态，可以进行细胞固定步骤。

5. 样本混合：

• 将经过标记和染色的细胞混合均匀，以确保获得代表性的样本。 6. 样本注射到流式细胞仪：

• 将样本通过流式细胞仪的进样口注入，使其形成单个细胞的流动流。

7. 激光激发和信号检测：

• 使用激光激发样本中的荧光标记物。

• 流式细胞仪会检测细胞产生的荧光信号，并记录下来。

8. 数据分析：

• 通过计算机软件对收集到的数据进行分析。

• 分析可以包括对不同细胞亚群的鉴定、数量统计、染色物的表达水平等。

9. 结果呈现：

• 将分析结果呈现为图表、图像或表格，以便更好地理解和解释实验结果。

流式细胞术可以用于许多研究领域，如免疫学、细胞生物学、肿瘤学等，以研究和识别不同细胞类型、表达分子的水平等。

流式细胞仪主要技术参数

流式细胞仪主要技术参数

流式细胞仪主要技术参数

1.光学系统：

1.1*激光配置:配置488nm、638nm激光器，488nm、638nm激光功率都不低于50mW。可选配405nm激光，405nm激光功率不低于80mW。

1.2检测参数：至少可同时激发和检测4色荧光。

1.3光路设计：固定校准的光路设计，智能监控确保激光稳定工作。光学滤光片可由用户根据实际应用自行更换，无需专业人员调校。

1.4#采用新型检测器，能够达到5倍于传统高性能PMT的光电转换效率，每个通道配备独立检测器，电压可独立调节。

1.5*光信号收集系统, NA不小于1.3，能将大视野范围内的光信号准确地传递到接收光路中，最多可以支持到7个空间独立的激光同时激发的信号收集。

1.6* 系统具备进一步升级的能力，可升级至3激光13色。

2.分析性能：

2.1颗粒检测能力：可准确区分0.2um和0.3um的细胞或微粒。

2.2*荧光灵敏度：FITC的荧光灵敏度少于30 MESF，PE的荧光灵敏度少于10 MESF。

2.3荧光分辨率：CV≤3%（G0/G1期最高峰）。

2.4无需微球的绝对计数功能，在检测的同时即可自动计算样本浓度，结果准确。

3.电子系统：

3.1信号处理精度：20比特100万道原始信息量（1,048,576 channels）。

3.2高达107的线性动态范围，可以将高信号和低信号都完全显示在一张图上。

3.3支持多色荧光信号共同采集，信号获取速度（上样速度）达到30,000个/秒以上。

3.4荧光补偿：全矩阵荧光补偿，可脱机补偿，离线分析。 4.液路系统：

4.1自动化上样系统，具有自动混匀和自动清洗功能，降低样本间交叉污染。

4.2液流系统日常维护简单、清洗简便，开关机程序全自动完成，全部由自动软件控制。

4.3#上样速度：除常见低、中、高速外，用户可连续自定义样本进样速度（10-240uL/min）。

5.软件功能：

5.1操作系统：Window 7或以上版本。