常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准
优质标准 满分 质量缺陷减分
组织切面完整，内镜活检、穿 10 组织稍不完整：减1~3分；不完整：减4~10分；未达到规定切片数：减5分
刺标本切片数不少于6片
切片薄（3~5um）,厚薄均匀 10 切片厚（细胞重叠），影响诊断：减6~10分；厚薄不均匀：减3~5分
切片无刀痕、裂隙、颤痕 10 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：减2分; 有刀痕、裂隙、颤痕，影响诊断：减5分
切片平坦，无皱褶、折叠 10 有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减2分；有皱褶或折叠，影响诊断：各减5分
切片无污染物 10 有污染物：减10分
无气泡（切片与载玻片间/盖 10 有气泡：减3分；胶液外溢：减3分
玻片与切片、载玻片间），盖
玻片周围无胶液外溢
透明度好 10 透明度差：减1~3分；组织结构模糊：减5~7分
细胞核与细胞质染色对比清晰 10 细胞核着色灰淡或过蓝：减5分；红（细胞质）与蓝(细胞核)对比不清晰：减5分
切片无松散，裱贴位置适当 10 切片松散;减5分；切片裱贴位置不当：减5分
石蜡切片的制作
石蜡切片的制作
染色液和固定液的配制
①Carnoy’S固定液：
无水酒精60mL，氯仿30mL，冰醋酸10mL。
②Harris苏木精染色法：
10％苏木精(950或无水酒精)溶液10mL
10％钾矾水溶液200mL
先将钾矾水溶液加热溶解，然后将溶的苏木精酒精溶液倒入，继续加热煮沸lmin，停火后缓慢加氧化汞0.5g，再加热煮沸lmin，速将三角瓶放入冷水内冷却。同时加入冰醋酸6～10mL。
⑨奥新兰一沙黄染液配制：奥新兰0.3g，沙黄0.03g，铁铵矾0.4g，醋酸一盐酸缓冲液（PH=1.42）100mL，上液临用时混合。④阿利新兰醋酸液：
阿利新兰(Alcian．blue，简称AB) lg，
3％醋酸水溶液100mL。
⑤1％高碘酸液：
1g高碘酸溶解在100mL蒸馏水中。
⑥Shifr试剂的配制方法：
煮沸蒸馏水200mL，停火后加入碱性品红1g，不停搅拌使溶解。待溶液冷至50℃，加入1N HCl20mL冷至室温(25℃)加偏重亚硫酸钠1g摇荡，置暗处过夜。又加活性碳2g充分摇荡数分钟，过滤。滤液应呈无色或淡黄色，盛入有色瓶内，于冰箱（4℃）保存。
1 %冰醋酸水溶液：冰醋酸1ml , 蒸馏水100 ml 。
HE染色显示肠道黏膜上皮淋巴细胞
奥新兰—沙黄染色显示肠道内肥大细胞AB/SO染色法
阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞AB-PAS染色法
3.3.3 肠道的石蜡切片的制作
（1）取材：用锋利的刀切取罗非鱼的一小段前肠（据胃5cm左右位置的前肠），组织块的规格为 3～5mm×3～5mm×10～15mm。
（2）固定：采用Bouin氏固定液装瓶固定，固定液用量一般为组织块体积的10～20倍。
（3）冲洗：固定12～24h后，将材料自固定液中取出后，在70%酒精中换洗几次，可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止。
（4）脱水：70%酒精（1h）→80%酒精（1h）→90%酒精（1h）→95%酒精（1h）→无水乙醇Ⅰ（1h）→无水乙醇Ⅱ（1h）
设备用具：切片机、恒温箱、溶蜡箱、玻璃缸、载玻片、盖玻片、手术刀片、镊子、包埋盒。
试 剂 ：10％福尔马林、酒精、二甲苯、固体石蜡、苏木精、酸水、氨水、酒精伊红染色剂型、加拿大树胶
（二）HE染色石蜡切片的制作过程
步骤一：取材与固定：
取动物新鲜组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。
步骤二：脱水透明：
一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。
步骤三：浸蜡包埋：
将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。
步骤四：切片与贴片：
将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。
步骤五：脱蜡
常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。
步骤六：染色
HE染色过程是：
①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。
②酸水及氨水中分色，各数秒钟。
③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。
④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。
⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。
实验二十一 石蜡切片法（四）——染色、封藏
仪器设备：显微镜
器具：盖玻片、载玻片、滤纸、镊子、吸水纸、剪刀、解剖盘、棕色滴瓶、染色缸、一次性针筒、培养皿。
材料：石蜡切片
试剂及其配置：各级乙醇（50%、70%、85%、95%、100%）、1/2二甲苯+1/2无水乙醇、二甲苯、埃利希氏苏木精染液、0.2%曙红水溶液、中性树胶
附：埃利希氏苏木精配方
苏木精 1克
纯乙醇（或95%乙醇） 50毫升
冰醋酸 5毫升
钾矾（硫酸铝钾） 约5克（饱和量）
甘油 50毫升
蒸馏水 50毫升
配法：
① 将苏木精溶与约15毫升的纯乙醇中，再加冰醋酸后搅拌。
② 当苏木精溶解后即将甘油倒入并摇动容器，同时加入其余的乙醇。
③ 将钾矾在研钵中研细并加热，然后将它溶解于水中。
④ 将温热的钾矾溶液一滴一滴地加入上述染液中，并随时搅动。
⑤ 此液混合完毕，将瓶口用一层纱布包着小块棉花塞起来，放在暗处通风的地方，并经常摇动以促进它的成熟。成熟时间约3-4周。若加入0.2克碘酸钠，可立刻成熟。
此液稳定而染色均匀，染核效果良好，不会发生沉淀，长期储备无妨。此液可分别与伊红（Enosin 曙红）、橙黄G、番红进行三重染色。
